평양방문기 - 평양을 다녀온 후 마음 속에는$\cdots$

심양보,Sim, Yang-Bo 한국가톨릭의료협회 2010 Health & mission Vol.19 No.-

Reliable, Accurate Determination of the Leukocyte Differential of Leukopenic Samples by Using Hematoflow Method

조용준,김수화,고광상,박종문,심양보,임지향,김용구,박연준,한경자 대한진단검사의학회 2011 Annals of Laboratory Medicine Vol.31 No.3

Background: Hematology analyzers may ineffectively recognize abnormal cells, and manual differential counts may be imprecise for leukopenic samples. We evaluated the efficacy of the Hematoflow method for determining the leukocyte differential in leukopenic samples and compared this method with the manual differential method. Methods: We selected 249 blood samples from 167 patients with leukopenia (WBC counts, 500–2,000/μL) for analysis in this study. The EDTA-anticoagulated blood samples were analyzed using an automatic blood cell counter (DxH800; Beckman Coulter, USA) and flow cytometry (FC 500; Beckman Coulter) by using Cytodiff reagent and analysis software (Beckman Coulter). Hematoflow results were selected or calculated from DxH800 and Cytodiff results. Two trained pathologists performed a manual differential count by counting 50–100 cells. Results: The precision of the Hematoflow method was superior to that of the manual method in counting 5 leukocyte subpopulations, immature granulocytes (IGs), and blasts. Blasts were detected in all 45 cases (100%) by Hematoflow. The correlation of the Cytodiff blast count to the reference count was high (r = 0.8325). For all other cell populations, the correlation of the Hematoflow results with the reference count was stronger than that of the other manual counts with the reference count. Conclusions: The Hematoflow differential counting method is more reproducible and sensitive than manual counting, and is relatively easy to perform. In particular, this method detected leukemic blasts more sensitively than manual differential counts. The Hematoflow method is a very useful supplement to automated cell counting. Background: Hematology analyzers may ineffectively recognize abnormal cells, and manual differential counts may be imprecise for leukopenic samples. We evaluated the efficacy of the Hematoflow method for determining the leukocyte differential in leukopenic samples and compared this method with the manual differential method. Methods: We selected 249 blood samples from 167 patients with leukopenia (WBC counts, 500–2,000/μL) for analysis in this study. The EDTA-anticoagulated blood samples were analyzed using an automatic blood cell counter (DxH800; Beckman Coulter, USA) and flow cytometry (FC 500; Beckman Coulter) by using Cytodiff reagent and analysis software (Beckman Coulter). Hematoflow results were selected or calculated from DxH800 and Cytodiff results. Two trained pathologists performed a manual differential count by counting 50–100 cells. Results: The precision of the Hematoflow method was superior to that of the manual method in counting 5 leukocyte subpopulations, immature granulocytes (IGs), and blasts. Blasts were detected in all 45 cases (100%) by Hematoflow. The correlation of the Cytodiff blast count to the reference count was high (r = 0.8325). For all other cell populations, the correlation of the Hematoflow results with the reference count was stronger than that of the other manual counts with the reference count. Conclusions: The Hematoflow differential counting method is more reproducible and sensitive than manual counting, and is relatively easy to perform. In particular, this method detected leukemic blasts more sensitively than manual differential counts. The Hematoflow method is a very useful supplement to automated cell counting.

포스터21 : Fluorescent-labeled inactive toxin aerolysin(FLAER)를 이용한 발작야간 혈색소뇨증 진단

고상광,송윤정,박종문,심양보,이선아,한경자 대한임상병리사협회 2009 임상혈액검사학회 발표자료집 Vol.11 No.1

일반연제(구연) : O-3 ; AmpC 생성 Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii, Serratia marcescens에서 qnr 생성 빈도와 quinolone 내성 현황

박강균,신상현,박정준,심양보,박연준 대한임상병리사협회 2008 임상미생물검사학회 발표자료집 Vol.2008 No.-

배경 : 장내세균에서 quinolone 내성은 대부분 quinolone 제제의 DNA gyrase와topoisomerase IV의 변이에 의한 것이지만, 1994년 K. pneumoniae에서 플라스미드매개 quinolone 내성이 처음 보고된 이후 다수의 균종에서 플라스미드 매개 quinolone내성이 보고되고 있다. 이에 본 연구에서는 AmpC생성 E. cloacae, E. aerogenes, C.freundii, S. marcescens를 대상으로 qnr 생성빈도를 조사하여 quinolone 내성 상황을 살펴보고자 한다. 방법 : 2005년 3월에서 7월까지 전국 12기관에서 분리된 E. cloacae 186주, E.aerogenes 154주, C. freundii 138주, S. marcescens 166주, 총 644주를 대상으로하였다. Ciprofloxacin, nalidixic acid의 MIC는 agar dilution 시험으로 하였다. qnrA, qnrB, qnrS, blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaDHA-1, orf513, orf1005 유전자는 PCR 방법을 시행하였고, qnr subtype은 restriction enzyme분석과 염기서열 분석을 하였다. 결과 : qnr 생성빈도는 C. freundii 38.4%, E. cloacae 28.5%, E. aerogenes 3.2%,S. marcescens 2.4%였다. qnrA1은 E. cloacae 14.5%, qnrB은 C. freundii 에서 13.8%로 가장 많았다. qnrB 생성 13주 중 12주에서 blaDHA-1 유전자가 검출되었다. 모든 qnrA1과 qnr B4은 ciprofloxacin MIC≥0.5 μg/mL, nalidixic acid MIC≥16 μg/mL을 보이나 qnrB1, qnrB2은 ciprofloxacin MIC 0.06~32 μg/mL, nalidixic acidMIC 0.5~256 μg/mL 로 넓은 범위로 나타났다. qnr 생성은 ESBL 비생성균보다 ESBL 생성균에서 높았으며, ESBL생성 E. cloacae 62.3%, C. freundii 75.0%, E.aerogenes 31.3%, S. marcescens 4.8% 에서 qnr 생성을 하였다. 결론 : C. freundii 와 E. cloacae 에서 qnrA, qnrB가 가장 많이 검출되었으며 qnrA,qnrB2, qnrB4 는 ESBL 비생성균보다 ESBL 생성균에서 빈도가 높으므로 이들 ESBL생성균에서의 quinolone 제제 사용은 보다 신중해야 할 것으로 생각된다.

일반연제(구연) : O-2 ; Extended-Spectrum β-Lactamase, Plasmid-Mediated AmpC β-Lactamase 생성 Proteus mirabilis의 빈도 및 유전자형

신상현,박강균,박정준,심양보,박연준 대한임상병리사협회 2008 임상미생물검사학회 발표자료집 Vol.2008 No.-

배경 : Proteus mirabilis 는 주요 원내 감염균이고, ampicillin 과 다른 β-Lactam계 항균제에 대부분 감수성이다. 최근 유럽에서 extended-spectrum β-Lactamase(ESBL) 생성으로 β-Lactam 제제에 내성을 보이는 P. mirabilis와 plasmid-mediated AmpC β-Lactamase (PABL) 생성 P. mirabilis가 보고되고 있으나 아직 국내에서는 이에 대한 연구가 드물다. 본 연구에서는 국내에서 분리된 P. mirabilis에서의 ESBL, PABL 생성균의 빈도 및 유전자형에 대하여 조사하고자 하였다. 방법 : 2004년 4월에서 9월까지 전국 12개 기관에서 분리된 P. mirabilis 134주를 대 상으로 agar dilution 법으로 cephalothin, cefuroxime, ceftazidime, cefotaxime, aztreonam, cefepime, cefoxitin, amikacin, gentamicin, piperacillin, ciprofloxacin, meropenem, imipenem MIC을 시험하고 double disk synergy 시험, modified Hodge 시험으로 ESBL, PABL 생성균을 선별하였다. ESBL은 blaTEM, blaSHV, blaCTX-M-1, blaCTX-M-2, blaCTX-M-9, blaPER, blaGES, blaVEB을 PCR로 검출하고, PABL은 6개 set의 AmpC-specific primer를 이용한 multiplex PCR로 PABL 유전자형을 분류하였으며, 염기서열, PFGE 분석도 함께 시행하였다. 결과 : 134주 중 각각 39주(29.1%)와 24주(17.9%)가 cephalothin과 cefuroxime에 내성이었으며, 13주에서 ESBL 유전자형이 검출되었는데 blaCTX-M-14형이 8주, blaCTX-M-9형이 1주, blaTEM-52형이 1주, blaSHV-12형이 1주, blaPER-1형이 1주이었다. 134주 중 15주는 cefoxitin에 비감수성이며 그 중 11주는 cefuroxime에 내성이었다. PABL 검출을 위한 modified Hodge 시험에 5주가 양성이었다. PABL 유전자형은 4주 중 2주에서 CMY-10형, 각 1주에서는 CMY-2 와 DHA-1 형이 검출되었다. 1주의 CMY-10형에서는 blaPER-1, blaTEM-52형의 유전자도 함께 가지고 있었다. DHA-1생성 주는 ceftazidime(MIC≤1 μg/mL), cefotaxime (MIC≤1 μg/mL)에 감수성이었고 CMY-2, CMY-10을 생성하는 균주들도 ceftazidime MIC가 각각 (MIC : 4 and ≤1 μg/mL) 감수성이었다. 결론 : P. mirabilis 에서의 ESBL, PABL 생성은 9.7%와 3.0%이었으며, ESBL의 대부분은 blaCTX-M-14형이었다. 이들 유전자의 균주간 전이와 PABL검출을 위한 선별 기준에 대해서는 더 많은 연구가 필요할 것으로 판단된다.

일반연제(포스터) : P-5 ; GenoType MTBDRplus의 수정된 검사방법을 이용한 리팜핀과 아이소니아지드 신속감수성검사의 평가

이건동,채효진,이상윤,이승남,박상미,심양보,박연준 대한임상병리사협회 2008 임상미생물검사학회 발표자료집 Vol.2008 No.-

배경 : 결핵은 현재 전 세계적으로 약 200만 명 이상이 사망하고 있는 중요한 보건문제의 하나인데 특히 다제내성결핵균의 치료는 많은 어려움을 안고 있다. 그러므로 다제내성결핵균의 조기 발견은 올바른 약제를 사용하여 적절한 치료를 앞당길 수 있으며 내성균주의 전파를 억제하는데 매우 중요하다. 이에 저자들은 배양 양성 검체 뿐아니라 도말 양성인 호흡기 검체에서도 리팜핀(RMP)과 아이소니아지드(INH)의 내성을 검출할 수 있다고 알려진 GenoType MTBDRplus assay(Hain Lifescience GmbH,Nehren, Germany)를 평가하였으며 총 64개의 임상균주를 대상으로 전통적인 배양법을 이용한 항 결핵제 감수성 검사와 비교하였다. 방법 : 먼저 검사의 검출 민감도를 평가하기 위해 13개의 1+ 그리고 12개의 2+ 도말 양성인 호흡기 검체와 액체배지에서 배양된 5개의 검체를 대상으로 검사를 시행하였다. 그러나 일부 strip의 band의 강도가 약해 양성여부를 판독하기 부적합하여DNA 추출법의 종류(resin법 sonication법) 및 검체의 특성(양, 탁도, 원심분리 후pellet의 양)에 따른 상관성 비교를 실시하였으며, DNA 양 및 PCR cycle수와 PCR-역교잡 band의 강도와의 상관성도 비교하였다. 또한 총 58개의 배양 양성 균주와 도말양성(1+~2+)인 6개의 호흡기 검체를 대상으로 RMP 내성에 관여하는 rpoB의 81-bp hotspot 부위와 INH 내성에 관여하는 katG codon 315 그리고 inhA의 regulatory region의 돌연변이여부를 PCR-역교잡방법으로 확인하였으며, 이를 전통적인 배양법을 이용한 항 결핵제 감수성 검사결과와 비교하였다. 결과 : 도말 결과 1+인 검체 중 61.5%(8/13), 2+인 검체의 8.3%에서 PCR이 일어나지 않거나 rpoB와 inhA 유전자좌 대조 band 또는 rpoB wild type band의 위음성결과가 관찰되었다. 이에 DNA 추출법의 종류(resin법 sonication법) 및 검체의 특성(양, 탁도, 원심분리 후 pellet의 양)과의 상관성을 비교하였으나 뚜렷한 상관성은 발견할 수 없었으며, DNA양 및 PCR cycle수를 증가시킨 결과 도말 1+~2+ 양성인 검체에서 일관되게 PCR-역교잡 후 양성band의 강도가 판독 가능한 정도로 향상되었다. 또한 전통적인 배양법을 이용한 항결핵제 감수성 검사와 비교한 64개 균주는 GenoType MTBDRplus assay결과 RMPr/INHr이 26균주, RMPs/INHr이 26균주, RMPs/INHs이 8균주 그리고 RMPr/INHs이 4균주였으며, 배양법을 이용한 항결핵제 감수성 결과와의 일치율은 RMP이 95.4% (62/64) INH가 92.2% (59/64)였다(Table1). RMP 내성 균주 중에서 Ser531Leu 돌연변이가 58.6%로 가장 많았으며, INH 내성 균주 중에서 katG 유전자의 Ser315Thr 돌연변이가 69.8%를 차지하였으며, inhA유전자의 promoter 부위의 Cys15Thr 돌연변이가 24.5%를 차지하였다. 고찰 : GenoType MTBDRplus 검사는 수정된 검사방법을 이용하여 시행한 결과 전통적인 배양법을 이용한 항결핵제 감수성 검사와 비교해볼 때 신속하며 배양 양성 균주나 도말양성(1+~2+)인 호흡기 검체에서도 직접 검사가 가능하고 RMP과 INH 내성균주 검출율에 높은 민감도와 특이도를 보였다.

Hitachi 7600 p-모률을 이용한 유리형경쇄 정량검사의 항원과잉역 반응

차경호 ( Kyong Ho Cha ),김승희 ( Sung Hεe Kim ),송창은 ( Chang Un Song ),심양보 ( Yang Bo Sim ),채효진 ( Hyo Jin Chae ) 대한임상검사과학회 2009 대한임상검사과학회지(KJCLS) Vol.41 No.4

The analysis of serum free light chains (sFLCs) can improve the diagnosis and monitoring of multiple myeloma and other plasma cell dyscrasias. As with other immunoassays, sFLCstests are subject to potential antigen excess and heterophilic antibody interference. We describe 9 cases of sFLCs antigen excεss in patients with multiple myeloma using the FreeliteTM Human Kappa and Lambda Frεe Kits (Thε Binding Site ltd., Birmingham, UK) and the Hitachi7600 P module turbidimetric system. A total of 1,247 consecutive samples from 250 patients with multiple myeloma were assayed for sFLCs from April to September, 2009. The samples were assayed using an initial dilution of 1 :5and subsequent dilutions of 1 :50 and 1: 100. The same samples were analyzed for the presence of monoclonal gammopathies using serum protεin electrophoresis (SPE) and immunofixation electrophoresis (IFE). There were 9 samples (0.72%) of antigεn excess with 3 cases of kappa (0.24%) and 6 cases of lambda (0.48%). Thεse cases reprεsents an example of antigen excess or " hook effect" using the sεrum free light chain assays and mandates high level of attεntion to falsely low sFLC 1εvels due to antigen excess, especially when it is disaccordant to other assay rεsults or c1inical manifestations.