성숙미경산 흰쥐의 수정란이식에 관한 연구 2 . 외과적으로 이식한 수정란의 수태율

성환후(Hwan Hoo Seong),윤창현(Chang Hyun Yun) 한국축산학회 1987 한국축산학회지 Vol.29 No.3

This experiment was conducted to determine the effective method for transfer of embryos in mature rats. Total number of 941 ova were recovered from 115 donors and 327 embryos of morula to late blastocyst stage were transferred surgically to 52 recipients (3 to 12 embryos per recipient). The results obtained were summarized as follows: 1. Pregnancy rate after embryo transfer was significantly (p$lt;0.05) lower in embryos from superovulated rats (37.5%) than control rats (60%). Weight of young at birth and gestation period were not significantly different between the groups of recipient transferred with embryos from control and superovulated rats. 2. Pregnancy rates after transfer with cell stage of embryos (50% in morula vs 45% in blastocyst) were not significantly different. 3. Pregnancy rates after transfer with degree of synchronization were 62% in -24 hrs. 50% in D hrs, and 0% in +24 hrs., respectively. And gestation period with degree of synchronization were not significantly different. 4. Pregnancy rates with number of embryos transferred to recipients (3-5, 6-8 and 9-12) were significantly (p$lt;0.05) higher when 9-12 embryos transferred (63%) than 3-5 or 6-8 of embryos transferred (50% and 36%). Pregnancy rates after transfer were not affected by progesterone priming.

소의 체세포핵이식태반과 정상태반간의 차등 발현 유전자 분석

유성란 ( Seong Lan Yu ),정행진 ( Hang Jin Jeong ),상병찬 ( Byung Chan Sang ),류승희 ( Seung Heui Ryoo ),정기철 ( Kie Chul Jung ),윤종택 ( Jong Taek Yoon ),성환후 ( Hwan Hoo Seong ),진동일 ( Dong Il Jin ),이준헌 ( Jun Heon Lee ) 한국동물자원과학회 2008 한국축산학회지 Vol.50 No.5

흰쥐 분만의 인위적 조절에 관한 연구 2 . PGF2α 와 Oestradiol -17β 병용투여에 의한 분만유기시험

윤창현(Chang Hyun Yun),성환후(Hwan Hoo Seong) 한국축산학회 1987 한국축산학회지 Vol.29 No.2

This experiment was carried out to study the efficacy of the exogenous PGF_(₂α) and oestradiol-17_β-injection for induction of parturition in white rats. Sixty of the pregnant white rats were injected with PGF_(₂α)+oestradiol-17_β. The survival rate of new born, effect of injection time and the amount of dosage of oestradiol-17_β on the induction of parturition were investigated. The results obtained were as follows: 1. The average survival rates of new born in groups injected with PGF_(₂α)+oestradiol-17_β on day 15, 17 and 19 of gestation were 53.30%, 42.07% and 22.63%, respectively. There was differences by dosage of oestradiol-17_β. 2. Mean gestation lengths of rats injected PGF_(₂α)+oestradiol-17_β on day 15, 17, 19 of gestation were 22.74±0.27, 21.95±0.32 and 21.54±0.29 days, respectively. There was no significant difference among experimental groups. 3. Mean gestation length of rats injected 0.125㎎ (per ㎏ of wt)of PGF2a 4 times + 0.5㎍ (per ㎏ of wt.) of oestradiol-17_β, 0.5 ㎎ of PGF_(₂α) 2 times+1.0㎍ of oestradiol-17_β, 1.0 ㎎ of PGF_(₂α) once + 0.2㎍ of oestradiol-17_β were 21.92±0.62, 22.10±0.38 and 22.22±0.31 days, respectively. There was no significant difference among experimental groups.

Association of Heat Shock Protein Beta 1 (HSPB1) Gene Expression with Tenderness in Loin Muscle of Korean Cattle (Hanwoo)

Dajeong Lim(임다정),Seung-Hwan Lee(이승환),Yong-Min Cho(조용민),Bong-Hwan Choi(최봉환),Han-Ha Choi(최한하),Hwan-Hoo Seong(성환후),Seong-Koo Hong(홍성구),Nam-Kuk Kim(김남국) 한국생명과학회 2012 생명과학회지 Vol.22 No.11

육질 등급에 차이를 보이는(3등급과 1++등급) 한우 등심육을 대상으로 한 단백체 연구를 통해 heat shock protein beta 1 (HSPB1)의 발현 차이가 관찰되었다. 따라서 본 연구는 HSPB1의 유전자와 단백질 수준에서의 발현이 육질에 중요한 요인으로 작용하는 연도(전단력)에 미치는 영향을 규명하기 위하여 수행하였다. 전단력 값의 차이를 보이는 동기우 집단 20두를 대상으로 유전자 및 단백질의 발현량을 분석하였고, 통계분석을 수행하였다. 유전자 및 단백질 수준에서의 발현량을 분석한 결과 HSPB1은 전단력이 낮은 그룹에서 전단력이 높은 그룹보다 2배 발현이 높은 것으로 확인되었으며(p<0.05), 전단력과의 관련성 분석 결과에서도 유전자와 단백질 발현량 모두에서 통계적 유의성이 확인하였다(p<0.05). 이러한 결과로 볼 때 HSPB1 유전자는 한우 등심육의 연도와 밀접히 관련되어있다고 판단되며, 지속적으로 유전자구조 변이연구 등을 통해 유전자 마커로의 개발이 필요할 것으로 생각된다. In a previous proteomic study, heat shock protein beta 1 (HSPB1) was detected as differentially expressed protein in longissimus thoracis between low (grade 3) and high (grade 1++) meat quality groups by 2DE gel electrophoresis. The present study investigated an association of HSPB1 expression at the level of gene and protein with Warner-Bratzler shear force (WBS) measured in 20 Hanwoo steers. An analysis of variance (ANOVA) between expression values and WBS showed that WBS was affected by HSPB1 expression (p<0.05). The expression (at both gene and protein level) of the HSPB1 was 2 times higher in the low WBS group than that in the high WBS group (p<0.01). This result suggests that the HSPB1 gene may be a candidate gene associated with tenderness in longissimus thoracis of Korean cattle.

Estrogen Receptor-${\alpha}$ 유전자 5' 영역의 Single Nucleotide Polymorphism의 탐색과 한우와 Holstein에서 번식능력 및 산유능력과의 관계

염규태,전향아,박해금,김영신,김현,김재환,성환후,조영무,조재현,고응규,Yeom, Gyu-Tae,Jeon, Hyang-A,Park, Hae-Geum,Kim, Young Sin,Kim, Hyun,Kim, Jae Hwan,Seong, Hwan-Hoo,Cho, Young Moo,Cho, Jae-Hyeon,Ko, Yeoung-Gyu 한국동물번식학회 2014 Reproductive & developmental biology Vol.38 No.3

This study was conducted for SNPs in the 5'-regions of estrogen receptor-${\alpha}$ (ESR-${\alpha}$), and association with calving interval (CI), service per conception (SPC) and 305 days milk yield in Hanwoo and Holstein dairy cattle. The genetic improvement was incurred low reproduction performance. The objective of this study was to investigate connections between single nucleotide polymorphisms (SNP) of Estrogen receptor-${\alpha}$ (ESR-${\alpha}$) with reproduction performance (calving interval, service per conception, and 305 d milk yield) in Hanwoo and Holstein dairy cattle. Hanwoo and Holstein blood samples were collected from 183 and 124 dam of breeding farms and DNA was extracted. Primer design was based on NCBI GenBank (Accession No. AY340579). The PCR-RFLP method with Bgl I was used to genotype the cattle. The result showed two variants of the ESR-${\alpha}$ gene. The Bgl I cut the 492 bp amplification product into 322 bp and 170 bp fragments for allele G, while allele A remained uncut, resulting in two restriction fragments for homozygote G/G and three fragments for heterozygote A/G. We found two of different genotypes in these breeds, A/G and G/G. In Hanwoo, the A/G genotype frequency was 0.13, and G/G was 0.87. The CI of A/G was $382.18{\pm}10.03$ days, and G/G was $381.69{\pm}5.22$ days. The SPC of A/G was $1.62{\pm}0.16$, and G/G was $1.32{\pm}0.04$. While CI showed no significance difference, SPC exhibited significant difference (p<0.05). In Holstein cattle, the frequency of genotype A/G was 0.02 and G/G was 0.98. The 305 days milk yield of A/G was $7,253.00{\pm}936.00kg$ and of G/G was $8,747.51{\pm}204.88kg$, showing no significant difference.

체세포 복제란 이식 한우의 분만 전 혈장 Progesterone과 Estradiol-l7$\beta$ 농도 변화

황성수,최선호,장유민,고응규,양병철,임기순,민관식,성환후,Hwang, Seong-Soo,Choi, Sun-Ho,Chang, Yoo-Min,Ko, Yeoung-Gyu,Yang, Byong-Chul,Im, Gi-Sun,Min, Kwan-Sik,Seong, Hwan-Hoo 한국동물번식학회 2008 Reproductive & developmental biology Vol.32 No.3

본 연구는 한우 체세포를 이용하여 생산된 복제란을 한우 대리모에 이식하여 임신이 확인된 개체에서 임신 기간 중 주요 호르몬의 발현 특성을 인공수정으로 임신된 대리모와 비교 분석하고자 실시하였다. 한우 섬유아세포를 이용하여 생산된 체세포 복제란을 자연발정으로 동기화된 한우 대리모에 이식하여 임신이 확인된 개체를 공시하였으며(n=8), 대조군으로는 인공수정으로 임신된 대리모을 사용하였다(n=5). 발정 관찰 후 60일경에 직장검사로 임신을 확인하였다. 주요 스테로이드 호르몬인 progesterone(P4)와 estradiol-l7$\beta$ (E2) 농도는 방사선동위원소 면역분석시험(RIA) 방법을 이용하였으며, 혈중 cortisol 농도는 ELISA 방법으로 측정하였다. 인공수정한 대리모의 경우 E2 농도가 분만 시기에 급격하게 증가하였으나, P4 농도는 분만 시기에 급격하게 감소하는 경향을 나타내었다. 이에 반해 복제란 이식우의 혈장 P4 농도는 분만 50일 전부터 분만 10일전까지는 대조군과 유사하게 유지되었으나, 분만예정일에는 전혀 떨어지지 않고 높은 수준으로 유지되었다. 한편, 복제란 이식우에서 분만 때까지 정상적으로 임신이 유지된 대리모들의 경우는 임신 기간 동안 cortisol 농도는 임신 후반기까지 낮게 유지되며 별다른 변화를 나타내지 않았다. 반면에 유산이 일어난 개체의 경우에는 임신 100일경에 cortisol의 농도가 급격하게 증가하는 것을 확인하였다. 이상의 결과를 종합하여 보면, 복제란 이식우의 경우 분만예정일 전 후에 일어나는 급격한 호르몬의 변화가 일어나지 않음을 확인할 수 있었으며, 이러한 현상은 복제란 이식우의 분만 지연과 밀접한 관계가 있는 것으로 사료된다. This study was performed to analyze the characterization of plasma hormonal levels during pregnancy in the Hanwoo recipients pregnant by artificial insemination (AI) or somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos. The synchronized recipients pregnant by SCNT embryos produced by Hanwoo fetal fibroblast cells (n=8) and by AI (control, n=5) were used. The plasma hormonal levels were measured by RIA (P4 and E2) and ELISA (cortisol), respectively. In control, the increase of E2 and the decrease of P4 were occurred immediately before the initiation of parturition. The expression pattern of plasma P4 was similar in both groups from 50 to 10 days before parturition, however, it did not decrease even at the expected date of labor in the SCNT recipients. The plasma cortisol was expressed a lower level during pregnancy in the SCNT recipients. But, the cortisol was increased in the cow aborted around 100 days of pregnancy (n=1). Based on these results, it can be postulated that the failure of the hormonal changes immediately before parturition in the SCNT recipients may be one of the most important reasons for a delayed parturition in clone calving.

유전 및 육종 : MS 마커를 이용한 토종닭 브랜드의 유전적 특성 및 개체 식별력 분석

서상원 ( Sangwon Suh ),조창연 ( Chang Yeon Cho ),김재환 ( Jae Hwan Kim ),최성복 ( Seong Bok Choi ),김영신 ( Young Sin Kim ),김현 ( Hyun Kim ),성환후 ( Hwan Hoo Seong ),임현태 ( Hyun Tae Lim ),조재현 ( Jae Hyeon Cho ),고응규 ( Yeo 한국동물자원과학회(구 한국축산학회) 2013 한국축산학회지 Vol.55 No.3

MS 마커는 가축의 유전적 다양성, 유연관계 및 품종식별의 연구에 있어서 매우 유용하다. 본 연구는 26개의 MS 마커를 이용하여 토종닭 브랜드 2집단(우리맛닭, 한협3호)과 토착종 순계 2집단(화이트 레그흔, 로드 아일랜드 레드)을 대상으로 집단내 및 집단간의 유전적 다양성, 계통유전학적 관계, 유전적 균일성 등을 검증하여 고유 유전자원으로서의 가치 구명 및 개체식별력이 높은 마커를 선별하여 토종닭 브랜드 계육의 생산이력시스뎀에 활용 가능한 기초 자료를 제시하고자 실시 하였다. 대립 유전자형 분석결과 총 191개 중 47개(24.6%)가 지단 특이 대립 유전자였으며, 다형성지수의 평균은 HExp=0.667, PIC=0.630으로 산출 되였다. 공시된 320 수 개체에 대한 요인대응분석(FCA) 결과 4개의 군집을 형성하였지만 2개 토종닭 브랜드 집단은 타 집단에 비해 매우 가까운 거리에 위치하고 있었으며, 집단간의 DA 유전거리 결과 또한 이와 동일했다. 각 집단에 대한 유전적 균일도는 모든 집단에서 94% 이상으로 높았다. 이상의 결과는 2개 토종닭 브랜드 집단은 유전적으로 유사하지만 토종닭 순계 집단과는 유전적인 차이가 크며, 순계 2집단 또한 유전적으로 확연히 분리됨을 증명 할 수 있다. 26개 MS마커 사용시 동일개체 출현확률(PI)은 1.17×10-49였다. 2011년 기준으로 닭 사육수수 149,511,309수를 고려해 PI 값이 높은 마커 9~12개 정도를 선별 및 분석에 이용 한다면 동일개체 출현확률(PI)이 1.14×10-15 에서 7.33×10-20 이므로 개체식벽 및 친자 감별이 가능할 것으로 사료된다. 향후 경제적 효율성을 고려하여 MS 마커 및 mtDNA의 SNP를 기반으로 multiplexing PCR 시스템을 확립을 위한 연구가 이행된다면 토종닭 브랜드육의 생산이력시스템에 적용이 가능할 것으로 판단된다. Microsatellite markers have been a useful genetic tool in determining diversity, relationships and individual discrimination studies of livestock. The level of genetic diversity, relationships among two Korean indigenous chicken brand populations (Woorimatdag: WR, Hanhyup3: HH) as well as two pure populations (White Leghorn: WL, Rhode Island Red: RIR) were analyzed, based on 26 MS markers. A total of 191 distinct alleles were observed across the four chicken populations and 47 (24.6%) of these alleles were unique to only one population. The mean HExp and PIC were estimated as 0.667 and 0.630. Nei`s DA genetic distance and factorial correspondence analysis (FCA) showed that the four populations represented four distinct groups. However, the genetic distance between each Korean indigenous chicken brand (WR, HH) and the pure population (WL, RIR) were threefold that among the WR and HH. For the STRUCTURE analyses, the most appropriate number of clusters for modeling the data was determined to be three. The expected probabilities of identity among genotypes of random individuals (PI) were calculated as 1.17×10-49 (ALL 26 markers) and 1.14×10-15, 7.33×10-20(9, 12 with the highest PI value, respectively). The results indicated that the brand chicken breed traceability system employing the own highest PI value 9 to 12 markers, and might be applicable to individual identification of Korean indigenous chicken brand.

유전 및 육종 : 한우 L4번 염색체 QTL 영역내 Fatty acid binding protein 5 유전자의 다형성과 도체 및 육질 형질과의 관련성 분석

허강녕 ( Kang Nyeong Heo ),김남국 ( Nam Kuk Kim ),이승환 ( Seung Hwan Lee ),김남영 ( Nam Young Kim ),전진태 ( Jin Tae Jeon ),박응우 ( Eung Woo Park ),오성종 ( Sung Jong Oh ),김태헌 ( Tae Hun Kim ),성환후 ( Hwan Hoo Seong ),윤두학 한국동물자원과학회(구 한국축산학회) 2011 한국축산학회지 Vol.53 No.4

본 연구는 한우에서 소 염색체 14번(BTA14)에서 근내지방도 및 도체중과 관련성이 보고된 QTL영역(48-58cM) 내의 FABP5 유전자를 대상으로 SNP를 발굴하고 도체형질과의 관련성 분석을 위하여 수행하였다. PCR 및 염기서열결정법을 통해 FABP5 유전자내 4개의 SNP(-1141A>G, 949A>G, 969A>G, 1085C>G)를 발굴하였고, 이중 promoter 영역에 위치하는 SNP의 경우 미 보고된 신규 SNP로 확인되었다. 발굴된 4개의 SNP를 대상으로 표현형 기록치를 보유한 후대검정후 583두에 대하여 유전자형 분석 및 관련성 분석을 수행하였다. 분석 결과 4개의 SNP중 SNP1 (-1141A>G)은 근내지방도에 있어서 G유전자형이 A유전자형에 비해서 근내지방도가 2.2 정도 높았고, SNP2(949A>G)는 배최장근 단면적에 있어서 G유전자형이 A유전자형보다 배장근단면적에 있어서 3cm2 만큼 높은 효과를 보였다. 본 결과에 대해 추후 지속적인 연구가 요구되어지며, FABP5의 SNPs은 한우의 도체 및 육질 관련 형질을 위한 유전자 마커로서 활용 가능할 수 있을 것으로 사료된다 The aim of this study was to evaluate the association between economic traits of Korean cattle (Hanwoo) and genetic variation in fatty acid binding protein 5 (FABP5) gene within QTL region of carcass weight and marbling score traits on BTA 14. We sequenced for detection of single nucleotide polymorphism (SNP) with 24 unrelated Hanwoo samples and identified four SNPs (-1141A>G, 949A>G, 969A>G and 1085C>G). Relationship between the genotypes of 583 Hanwoo individuals by PCR-RFLP and economic traits were analyzed by the mixed regression model implemented in the ASReml program. As the result of statistical analysis, SNP1 (-1141A>G) showed significant effect (p<0.003) on marbling score (MS) and SNP2 (949A>G) showed significant effect (p<0.034) on eye muscle area (EMA). Further studies are required to validate the significant SNPs in a bigger population, but the SNPs (-1141A>G and 949A>G) of FABP5 could be a genetic marker to estimate molecular breeding value (MEBV) for carcass traits in Hanwoo.

특수 목적견으로서의 품성 및 능력 관련 유전자들에 관한 생물정보학적 분석

권윤정(Yun-Jeong Kwon),어정우(Jungwoo Eo),최봉환(Bong-Hwan Choi),최유리(Yuri Choi),김정안(Jeong-An Gim),김다희(Dahee Kim),김태헌(Tae-Hun Kim),성환후(Hwan-Hoo Seong),김희수(Heui-Soo Kim) 한국생명과학회 2013 생명과학회지 Vol.23 No.11

특수 목적견(구조견, 군견, 안내견 및 탐지견)은 집중력, 소유욕, 대담성 등을 기반으로 한 훈련시험을 통해 선별된다. 최근 특수견으로서의 특수한 능력 및 품성에 대해 유전적인 정보가 중요한 인자로 다뤄지고 있다. 본 연구에서는 특수견으로서의 개의 특수한 능력 및 품성과 관련된 유전자들의 분자적인 특징을 고찰하고자 하였다. 이전 연구에서 보고된 24개의 유전자(AR, BDNF, DAT, DBH, DGCR2, DRD4, MAOA, MAOB, SLC6A4, TH, TPH2, IFT88, KCNA3, TBR2, TRKB, ACE, GNB1, MSTN, PLCL1, SLC25A22, WFIKKN2, APOE, GRIN2B, PIK3CG)를 선택하여 품성, 후각, 운동 및 학습능력 관련 유전자, 네 가지 카테고리로 분류하였다. 본 연구에서는 생물학적인 기법을 이용하여 이 유전자들의 염색체상의 위치, 유전자들 간의 네트워크를 통한 상호관계를 조사하였으며, 어떤 생물학적 기능과 관련이 있는지 Gene Ontology 분석과 데이터베이스를 기반으로 in silico 발현 양상을 살펴보았다. 또한 이전 연구를 통하여 품성 관련 유전자들의 다양한 유전적 다형성에 대한 보고를 조사하였다. 본 연구는 특수견으로서 주요하게 고려되는 개의 고유한 능력 및 품성 관련된 유전자에 대해 분자적 특징을 제시하고 있다. 이 후보 유전자들은 개의 특수한 표현형과의 관계를 밝힐 수 있는 연구의 기초자료로서 이용될 수 있을 뿐만 아니라 핵심적인 유전인자로 응용되어 신속하고 정확한 특수견 선발에 기여할 수 있을 것으로 전망된다. Working dogs, such as rescue dogs, military watch dogs, guide dogs, and search dogs, are selected by in-training examination of desired traits, including concentration, possessiveness, and boldness. In recent years, genetic information has been considered to be an important factor for the outstanding abilities of working dogs. To characterize the molecular features of the canine genes related to phenotypes for working dogs, we investigated the 24 previously reported genes (AR, BDNF, DAT, DBH, DGCR2, DRD4, MAOA, MAOB, SLC6A4, TH, TPH2, IFT88, KCNA3, TBR2, TRKB, ACE, GNB1, MSTN, PLCL1, SLC25A22, WFIKKN2, APOE, GRIN2B, and PIK3CG) that were categorized to personality, olfactory sense, and athletic/learning ability. We analyzed the chromosomal location, gene-gene interactions, Gene Ontology, and expression patterns of these genes using bioinformatic tools. In addition, variable numbers of tandem repeat (VNTR) or microsatellite (MS) polymorphism in the AR, MAOA, MAOB, TH, DAT, DBH, and DRD4 genes were reviewed. Taken together, we suggest that the genetic background of the canine genes associated with various working dog behaviors and skill performance attributes could be used for proper selection of superior working dogs.

포유류배양세포 동결보존에 있어 Lactamide의 효과

김현(Hyun Kim),조영무(Young Moo Cho),고응규(Yeoung-Gyu Ko),성환후(Hwan-Hoo Seong) 한국생명과학회 2014 생명과학회지 Vol.24 No.11

DMSO는 배양포유류세포 동결보존의 동결보호제로써 일반적으로 사용 되어져 왔지만, DNA 메틸화 및 히스톤의 수식에 의해 일부 세포에서는 분화를 일으키는 것으로도 알려져 있다. 동결보존시의 배양세포의 안정된 분화 형질유지에는 메틸화를 일으키는 DMSO 이외의 동결보호제의 사용이 필요하다. 세포독성이 낮고, 동물정자동결 보존에 효과적인 것으로 알려진 아미도 화합물이 동일하게 포유류의 배양세포의 동결보존에서 동결보호작용이 있는지를(8종류의 아미드 화합물) 배양 마우스 혈관내피세포를 이용해 조사했다. 조사한 아미드 화합물 중에 아세트아미드와 락트아미드의 2종류가 배양세포에 대해서 동결보호작용이 있고, 가장 효과적인 것은 농도가 1.5 M의 락트아미드이다. 배양세포의 동결보존에 관해서는 삼투압 스트레스를 받지 않을 필요가 있기 때문에, 1.5 M 락트아미드 용액을 제작 시, 용매를 각 희석율의 PBS로 하고, 삼투압을 바꾼 동결 보존액에 동결세포의 생존율을 조사했다. 그 결과, 0.4배 농도의 PBS가 삼투압 스트레스를 가장 낮고 생존율이 가장 높음을 확인했다. 동결보존배지에 고 분자량재료를 첨가하면 세포생존율이 개선되는 것이 알려져 있기 때문에 BSA, HES, 데키스트란의 효과를 조사했다. 그 결과, 락트아미드를 이용한 동결보존배지는 0.4× PBS를 이용한 1.5 M 락트아미드용액에 1%의 BSA를 첨가한 경우, DMSO의 동결보호작용에 필적하는 동결보호작용을 나타내는 것을 확인했다. While dimethyl sulfoxide (DMSO) is the most commonly used cryoprotectant agent in the cryopreservation of cultured mammalian cells, it has been reported to cause differentiation of some cell lines by DNA methylation and associated histone modifications. To avoid the side effects of DMSO in cryopreservation, other agents might be more appropriate for maintaining the stable differentiation of cultured cell phenotypes through cryopreservation. All cryoprotectants should be highly soluble in water and display low cell toxicity. Cryoprotective agents have been shown to be effective in animal sperm preservation, and eight types of amides were examined in the cryopreservation of cultured mouse endothelial cells. Among the amides examined, acetamide and lactamide were effective cryoprotectants for cultured mammalian cells. The most effective concentration of lactamide, 1.5 M, had an even lower cryoprotective ability than 1M DMSO. Because successful cryopreservation of cultured cells is hampered by osmotic stress, the adequate ionic concentration was determined by diluting phosphate-buffered saline (PBS) in the 1.5M lactamide solution. The most effective concentration was 0.4×PBS, which minimized osmotic stress during the cryopreservation of cultured cells. As the addition of high molecular weight materials in cryopreservation media improves the viability of cells, the effects of bovine serum albumin (BSA), hydroxyethyl-starch (HES), and dextran were examined. The best combination of lactamide-based media for cryopreservation was found to be 1.5 M lactamide in 0.4×PBS with 1% BSA.