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        • KCI등재

          중년 남성의 결혼만족도에 미치는 영향요인

          김희숙 ( Kim Hee Sook ),하태희 ( Ha Tae Hi ) 경북대학교 간호과학연구소 2010 경북간호과학지 Vol.14 No.1

          Purpose: The purpose of this study was to investigate the influencing factors of marital satisfaction in middle-aged men. Method: Data collection was carried out May 2 through July 30 2005. In order to get the data by self-questionnaire, 427 subjects were selected. The instruments for this study were Kim's husband and wife compatibility scale, Rosenberg's self-esteem scale, Olson, Sprenkle, and Russel's ENRICH inventory, and Frazier and Bowden's marital satisfaction scale. The dada was analyzed by mean, standard deviation, t-test, one-way ANOVA, Pearson's correlation coefficient, and Stepwise multiple regression using SPSS 12.0 program. Result: The main factors that affect marital satisfaction were husband and wife compatibility, communication, and self-esteem. These variables were account for 69.3% of marital satisfaction. Conclusion: It is necessary to develop a strategy to improve husband and wife compatibility and communication and increase self-esteem for marital satisfaction in middle-aged men Therefore, development of nursing program focus on gender role attitudes is needed.

        • KCI등재

          바이오촉매 및 생물전환을 이용한 광학활성 에폭사이드 제조

          김희숙,이옥경,이은열,Kim, Hee-Sook,Lee, Ok-Kyung,Lee, Eun-Yeol 한국생명과학회 2005 생명과학회지 Vol.15 No.5

          광학활성 에폭사이드는 광학활성 의약품, 기능성 식품 제조용 광학활성 중간체로 사용될 수 있다. 바이오촉매를 이용하여 광학활성 에폭사이드를 제조하는 방법으로는, mono-oxygenase나 peroxidase 등을 이용하여 알켄 기질의 이중결합을 비대칭 에폭시화반응을 통해 제조하는 방법이 있다. Kinetic resolution을 이용하는 방법으로는 epoxide hydrolase를 이용하여 특정 이성질체만을 diol로 가수분해하여 제거시켜 광학활성 에폭사이드를 얻는 방법 등이 있다. 다양한 생물전환 기술, directed evolution 및 site-specific muta-genesis 등을 이용한 광학활성 에폭사이드 제조용 바이오촉매개량 기술 등 효율적인 광학활성 에폭사이드 제조 시스템에 대한 연구 개발도 활발히 진행되고 있어 향후에 상업화가 가능할 것으로 기대된다. Chiral epoxides are important chiral synthons in organic synthesis for the production of chiral pharmaceuticals and functional food additives. Chiral epoxides can be synthesized by enantioselective introduction of oxygen to double bond of substrate by monooxygenase. Peroxidase also carry out asymmetric epoxidation of alkene in the presence of hydrogen peroxide. Kinetic resolution of racemic epoxides via enantioselective hydrolysis reaction by epoxide hydrolase (EH) is a very promising method since chiral epoxides with a high optical purity can be obtained from cheap and readily available racemic epoxides. In this review, various biocatalytic approaches for the production of chiral epoxides with several examples are presented and their commercial potential is discussed.

        • KCI등재

          4-(p-Nitrobenzyl)pyridine의 색깔반응을 이용한 미생물 epoxide hydrolase의 활성 평가

          김희숙,이은열,Kim Hee Sook,Lee Eun Yeol 한국생명과학회 2005 생명과학회지 Vol.15 No.3

          4-(p-Nitrobenzyl)pyridine (NBP)의 색깔변화를 이용한 epoxide hydrolase활성 측정법을 사용하여 다양한 미생물 세포유래의 epoxide hydrolase 활성을 측정하고 평가하였다. Epoxide hydrolase의 가수분해 반응에 의해 분해되고 남은 에폭사이드 기질에 의한 NBP alkylation 반응을 통한 색깔변화로 손쉽게 epoxide hydrolase 활성을 측정할 수 있었다. NBP 반응에서 triethylamine을 첨가하여 색깔반응 효율을 높일 수 있었으며, 10mM styrene oxide에 대한 최적 세포 사용량은 12.5mg/ml로 결정하였다. 본 연구에서 얻은 colorimetric assay조건에서 대용량의 미생물 후보군집으로부터 유용한 epoxide hydrolase를 가지는 신규 미생물을 효율적으로 선별할 수 있을 것으로 기대된다. Epoxide hydrolase activities of various microbial cells were analyzed by colorimetric assay based on alkylation of epoxides with 4-(p-nitrobenzyl)pyridine (NBP). The epoxide hydrolase activity was determined by measuring the decrease of color intensity at 560 nm due to the decrease of styrene oxide substrate by epoxide hydrolase-catalyzed hydrolysis reaction. The experimental conditions of NBP colorimetric assay were optimized for the efficient measurement of epoxide hydrolase activities from various microbial cells.

        • KCI등재

          미생물 세포 기반의 에폭사이드 가수분해효소 활성 측정을 위한 분광학적 분석법 최적화

          김희숙,이은열,Kim Hee Sook,Lee Eun Yeol 한국생명과학회 2005 생명과학회지 Vol.15 No.1

          다양한 라세믹 에폭사이드 기질에 대한 입체선택적 가수분해 반응을 촉매하는 epoxide hydrolase 활성을 측정할 수 있는 미생물 세포 기반의 자외선 활성 분석법을 최적화하였다. 2.5 mg/ml의 세포 농도에서도 비교적 쉽게 흡광도 변화량을 인식할 수 있는 흡광도 범위인 0.5 이상을 얻을 수 있고, 반응 동력학 분석에도 응용할 수 있었다. 기존의 GC, HPLC 분석 법 보다 분석 시간을 줄일 수 있으며, 효소를 별도로 분리$\cdot$정제하지 않고 미생물 세포 자체의 epoxide hydrolase활성 분석이 가능하므로 상업적 특성이 우수한 epoxide hydrolase을 가진 미생물을 효율적으로 선별하는데 응용될 수 있을 것으로 기대된다. Microbial cell-based UV spectrometric assay for the quantitative measurement of epoxide hydrolase activity was evaluated and optimized for the efficient screening of whole cell activity of novel epoxide hydrolase. Epoxide hydrolase activity was determined by measuring the increase of the oxidized product, benzaldehyde. The effects of the concentrations of phenyl-1,2-ethanediol, sodium metaperiodate and cells were optimized for epoxide hydrolase-catalyzed hydrolysis of styrene oxide. The relevant kinetic parameters of Km and $V_{max}$ for the hydrolysis of (R)-styrene oxide by Rhodotorula glutinis were determined from Lineweaver-Burk plot as 41.2 nmol/min$\cdot$mg dcw and 7.5 mM respectively, and coincided well with those from GC analysis.

        • KCI등재

          이동 컴퓨팅 환경에서 이동 호스트의 자치성 증대를 위한 선택적 캐쉬 일관성 유지 기법

          김희숙,황병연,Kim, Hee-Sook,Hwang, Byung-Yeon 한국정보처리학회 2003 정보처리학회논문지D Vol.10 No.4

          현재 이동 컴퓨팅 환경에서 이동 호스트가 사용하는 캐쉬는 전력의 한계와 제한된 대역폭이라는 단점을 보완할 수 있는 중요한 장치로서 사용된다. 하지만 서버 데이터와의 일관성을 유지해야 하는 부담을 가지고 있다. 본 논문에서는 선택적 캐쉬 일관성 유지 기법을 제안한다. 서버는 캐쉬 상태 테이블, 데이터 접근 테이블을 유지하여 이동 호스트에서 미래 사용성이 높은 데이터에 대한 선별을 통해 효율적인 방송을 가능하게 한다. 또한 오랜 접속 단절 이후에 연결된 이동 호스트의 요청에 따라 서버가 보관하고 있던 지난 방송 정보를 전달하고 비동기적인 방송을 수행함으로써 다수의 캐쉬 데이터가 버려지는 것을 방지하고, 최신의 데이터를 보유할 수 있도록 한다. 따라서 이동 호스트는 서버에 대한 의존도를 줄일 수 있게 되어 자치성 증대라는 효과를 얻을 수 있음이 실험을 통해서 보여진다. The cache used by mobile host is an important device that recovers the weak points of limited power and bandwidth, in mobile computing environments. However, it has to stand and maintain the consistency with the server data. In this paper, we propose a 'Selective Cache Consistency Scheme'. The server allows an effective broadcasting by selecting data of high usability using 'Cache State Table' and 'Data Access Table'. Moreover, this scheme prevents the loss of data that nay occur by a long period of disconnection, by asynchronous broadcasting and transmitting those broadcast data preserved in the server. This also allows user to possess the latest data. Through experiments, we have found that the enlargement of autonomy is possible by reducing the dependence of server.

        • T Cell에서의 Lectin에 의한 Phospholipase $C-{\gamma}1$ Tyrosine 잔기 인산화를 통한 Phospholipase C의 활성화

          김희숙,문경호,이영한,윤두희,류성호,서판길,Kim, Hee-Sook,Moon, Kyoung-Ho,Lee, Young-Han,Yun, Doo-Hee,Ryu, Sung-Ho,Suh, Pann-Ghill 생화학분자생물학회 1993 한국생화학회지 Vol.26 No.8

          사람의 $CD4^+$ T임파구 암세포인 Jurkat cell에는 phosphatidyl inositide-specific phospholipase C(PI-PLC 또는 PLC)의 이성화효소인 PLC-${\beta}1$, $-{\gamma}1$, $-{\delta}1$이 존재한다. Jurkat cell에 여러 lectin들을 처리하여 $PLC-{\gamma}1$의 인산화반응, tyrosine잔기 인산화반응 및 PI-PLC의 활성도 등을 측정하므로써 lectin들에 의한 T세포의 선호전달에 $PLC-{\gamma}1$이 관여하는지 검토하였다. Phytohem-agglutinin(PHA), Concanavalin A(Con A), Trichosanthis radix aggutinin(TRA) 등의 lectin을 T세포에 처리하였을 때 PLC의 활성에 의하여 세포의 막지질성분인 phosphatidyl inositide의 가수분해물인 inositol phosphate들의 축적이 증가하였다. 그중 세포신호전달에 있어 second messenger인 inositol 1,4,5-trisphosphate(IP3)는 30초 내에 이미 최고수준에 달하였다. 또한 처리 후 30초 이내에 $PLC-{\gamma}1$의 tyrosine잔기에 인산화가 일어났다. 인산화된 tyrosine잔기의 위치는 T cell의 CD3의 항체인 OKT3를 처리하거나 fibroblast에 성장인자인 PDGF 또는 EGF를 처리한 경우와 같음을 tryptic phosphopeptide mapping으로 확인하였다. 이와 같은 결과들은, T세포의 분화를 유도하는 lectin들이 T세포의 항원수용체와 CD3 복합체(TCR-CD3 Complex) 또는 표면당단백질인 CD4, CD8 등과 결합하거나 상호작용하고 있는 nonreceptor tyrosine kinase(fyn 또는 lck)를 활성화시키고 이들에 의해 phospholipase $C-{\gamma}1$의 tyrosine잔기가 인산화됨으로써 세포 외부 신호가 세포내로 전달되고 있음을 암시하고 있다. 이렇게 tyrosine잔기가 인산화되어 활성화된 phospholipase $C-{\gamma}1$은 다시 phosphatidyl inositide를 가수분해시켜 second messenger인 1,2-diacylglycerol(DG)과 inositol 1,4,5-trisphosphate(IP3)를 생성하게 하여 T세포의 분화 및 성장을 유도할 것으로 생각된다. Stimulation of the human T cell line, Jurkat, by the addition of mitogenic lectin activates phospholipase $C-{\gamma}1$($PLC-{\gamma}1$), generating two second messengers, inositol-l,4,5-trisphosphate and diacylglycerol, from phosphatidyl inositide. To investigate the effect of mitogenic lectins, Jurkat cells were treated with PHA, TRA (one of Trichosanthes radix agglutinins) or Can A. The tyrosine phosphorylation of $PLC-{\gamma}1$ occurred rapidly and reached maximum level less than 0.5 min after PHA stimulation in the presence of orthovanadate. In cells prelabeled with [$^3H$]myo-inositol, PHA quickly but persistently stimulates the formation of [$^3H$]inositol-1,4,5-trisphosphate within 0.5 min after stimulation. Two-dimensional phosphopeptide map analysis revealed that the major sites of tyrosine and serine phosphorylation in $PLC-{\gamma}1$ from stimulated Jurkat cells are the same as those in $PLC-{\gamma}1$ from Jurkat cells treated with antibody to CD3 or A43l cells with EGF. Thus, we suggests that mitogenic lectin-dependent increase in phosphoinositide hydrolysis in Jurkat cells can be occur through the phosphorylation of tyrosine residues on $PLC-{\gamma}1$ by a nonreceptor tyrosine kinase(s) coupled to the TCR-CD3 complex.

        • KCI등재
        • KCI등재

          분자공학 기반의 광학활성 에폭사이드 제조용 epoxide hydrolase 생촉매 개발

          김희숙,이은열,Kim, Hee-Sook,Lee, Eun-Yeol 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.1

          광학활성 에폭사이드는 다양한 반응성으로 인하여 고부가가치 광학활성 의약품 및 농약 합성용 중간체로 널리 이용되고 있다. 광학활성 에폭사이드는 에폭사이드 가수분해효소 (epoxide hydrolase, EH)를 이용하여 저가의 라세믹 기질에 대한 입체선택적 가수분해 반응을 통해 제조할 수 있으며, EH는 유도과정 없이 발현되고 보조인자가 필요 없으며 비교적 효소 안정성도 높아 상업적으로 유용한 효소이다. EH에 대한 생화학 및 분자생물학 관련 최근 연구 결과를 바탕으로 촉매 활성 증대 및 기질 선택성을 변경시킨 tailer-made형 EH 생촉매 개발이 가능할 것이며, 실규모의 비대칭 광학분할 생물공정 시스템 개발을 통해 EH에 의한 동력학적 가수분해반응을 이용한 광학활성 에폭사이드 생산기술의 상업화가 가능할 것으로 기대된다. Enantiopure epoxides are valuable intermediates for the asymmetric synthesis of enantiopure bioactive compounds. Microbial epoxide hydrolases (EHs) are versatile biocatalysts for the preparation of enantiopure epoxides by enantioselective hydrolysis of cheap and easily available racemic epoxide substrates. EHs are commercially potential biocatalysts due to their characteristics such as high enantioselectivity, cofactor-independent catalysis, and easy-to-prepare catalysts. In this paper, recent progresses In molecular engineering of EHs are reviewed to evaluate the commercial feasibility of EH-catalyzed hydrolytic kinetic resolution for the production of enantiopure epoxides.

        • KCI등재

          해양세균 Streptomyces sp. M3로 부터 얻은 재조합 polyG-specific lyase의 특성

          김희숙,Kim, Hee-Sook Korean Society of Life Science 2010 생명과학회지 Vol.20 No.11

          A new alginate lyase gene of marine bacterium Streptomyces sp. M3 had been previously cloned in pColdI vector and transformed into E. coli BL21 (DE3). In this study, M3 lyase protein without signal peptide was overexpressed by induction with IPTG and purified with Ni-Sepharose affinity chromatography. The absorbance at 235 nm of the reaction mixture and TLC analysis showed that M3 alginate lyase was a polyG-specific lyase. When M3 lyase was assayed with substrate for 10 min, optimum pH and optimum temperature were pH 9 and $60^{\circ}C$. For the effect of 1mM metal ion on M3 lyase activity, $Ca^{++}$ and $Mn^{++}$ ions increased the alginate degrading activity by two-fold, whereas $Hg^{++}$ and $Zn^{++}$ ions inhibited the lyase activity completely. $Mg^{++}$, $Co^{++}$, $Na^+$, $K^+$, and $Ba^{++}$ did not show any strong effects on alginate lyase activity. 전 연구에서 해양세균 Streptomyces sp. M3의 새로운 alginate 분해효소를 signal peptide가 제거된 상태로 클로닝하고 E. coli BL21 (DE3) 균에 형질전환시켰다. 본 연구에서는 배양할 때 IPTG를 첨가하여 M3 alginate 분해효소 단백질을 과발현시키고 Ni-Sepharose 친화력 chromatography로 정제하여 생화학적 성질을 조사하였다. 기질특이성을 시험하기 위한 235 nm에서의 흡광도와 TLC 분석 결과로부터 M3 alginate 분해효소가 polyG block에 기질특이성을 나타냄을 알 수 있었다. M3 분해효소를 기질과 10분 동안 반응시켰을 때, 최적 pH 및 최적온도는 pH 9 및 $60^{\circ}C$이었다. 1 mM $Ca^{++}$ 및 $Mn^{++}$은 alginate 분해활성을 2배 증가시킨 반면 $Hg^{++}$ 및 $Zn^{++}$는 분해활성을 완전히 저해하였다. $Mg^{++}$, $Co^{++}$, $Na^+$, $K^+$, 및 $Ba^{++}$은 M3 alginate 분해효소의 활성에 거의 영향을 미치지 않았다.

        • KCI등재

          Enhancing the Alginate Degrading Activity of Streptomyces sp. Strain M3 Alginate Lyase by Mutation

          김희숙,Kim, Hee-Sook Korean Society of Life Science 2012 생명과학회지 Vol.22 No.1

          이전 연구에서 Streptomyces sp. M3 균주로부터 polyguluronate에 기질특이성을 가지는 알긴산분해효소를 cloning하고 활성을 연구하였다. 이번 연구에서는 pColdI vector에 들어있는 M3 알긴산분해효소 유전자를 돌연변이시켜 알긴산분해효소의 활성을 증진시키고자 하였으며, 점-돌연변이 또는 무작위-돌연변이 방법을 사용하여 돌연변이를 실시하였다. Ser25Arg, Phe99Leu, Asp142Asn, Val163Ala, Lys191Glu 및 Gly194Cys 등 6 종류의 돌연변이 단백질을 얻을 수 있었다. Phe99Leu 및 Lys191Glu 돌연변이 단백질은 알긴산을 분해하는 능력을 완전히 잃었으나 Gly194Cys 돌연변이 단백질의 활성은 원래 단백질에 비하여 10배 증가하였다. 또한 돌연변이된 M3 알긴산분해효소 단백질의 3차 구조는 Swiss-Model 자동모델러를 이용하여 생성하였으며 다른 알긴산분해효소의 결정구조와 비교하였다. 194 번째 아미노산인 글리신은 알긴산의 C-말단 보존서열인 YFKAGXYXQ의 Gly193과 Tyr195 사이에 위치한다. 이 연구에서 돌연변이된 글리신과 페닐알라닌 잔기들은 활성자리로부터 많이 떨어져있음에도 불구하고 돌연변이에 의하여 알긴산 분해활성이 강하게 영향을 받는 것으로 나타났다. A polyguluronate-specific lyase from Streptomyces sp. strain M3 has been previously cloned and characterized. In this study, the M3 alginate lyase gene in the pColdI vector was mutated by site-directed mutagenesis and random mutagenesis to enhance the alginate degrading activity. Six mutants were obtained: Ser25Arg, Phe99Leu, Asp142Asn, Val163Ala, Lys191Glu, and Gly194Cys. Phe99Leu and Lys191Glu mutants completely lost their alginate lyase activity, whereas the alginate degrading activity of Gly194Cys mutant increased by nearly 10 fold. The 3-D protein structure of M3 alginate lyase, which was constructed using the Swiss-Model automodeler, was also compared to the crystal structure of another alginate lyase. A mutated glycine residue was positioned between Gly193 and Tyr195 of the C-terminal conserved sequence, YFKAGXYXQ. A phenylalanine residue (at position 99) and a glycine residue (at position 194) mutated in this study were distant from the active site, but the degrading activity was strongly affected by their mutation.

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