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        • KCI등재

          MC3T3-E1 조골세포에서 에스트로겐이 종양괴사인자-α로 유도된 세포자연사 및 사이토카인 유전자 발현에 미치는 영향

          김승보,강경화,금정철 대한산부인과학회 2001 Obstetrics & Gynecology Science Vol.44 No.2

          목적 : 아폽토시스는 조골세포에서 자연발생적으로 나타나는 세포자연사의 과정으로 특정 호르몬이나 성장인자 등과 같은 생존인자가 결핍되었을 때 세포들은 자연사의 과정을 밟게되다. 이러한 과정은 폐경후 골다공증에서 병태생리학적으로 중요한 역할을 하게 된다. Estrogen은 직접적이고 중요한 영향을 주지만, 세포의 생존유지와 아폽토시스에 대한 역할은 잘 알려지지 않고 있다. 어떤 연구에서는 estrogen이 골흡수를 증가시키는 cytokine의 생성을 조절하여 골세포에 영향을 주는 것으로 추정하지만, 다른 연구에서는 골세포의 아폽토시스에 관한 영향을 발견하지 못 하였다. 따라서 Estrogen이 조골세포에서 아폽토시스를 어떻게 조절하는가를 알기 위하여 MC3T3-E1 조골세포주에 생리적 활성도가 강한 17-βestradiol을 사용하여 실험하였다. 연구 방법 : 본 실험은 Estrogen이 조골세포에서 아폽토시스를 어떻게 조절하는가를 알기 위하여 MC3T3-E1 조골세포주에 생리적 활성도가 강한 17-β estradiol을 사용하여 실험하여 TNF-α로 유도된 아폽토시스와 cytokine의 유전자발현 및 collagen생성에 estrogen이 어떠한 영향을 주는가를 밝히기 위해 고안되었다. 결과 : 1. DNA합성능은 TNF-α 자극시에는 대조군에 비하여 10-11M, 10-10M에서는 자극효과를 나타냈으나 10-9M에서는 억제효과를 나타내었다. Estrogen 첨가시 자극효과가 있으며, TNF-α, estrogen 모두 첨가시 10-10M농도까지는 자극효과가 있었으나 비교적 고농도의 10-9M에서는 estrogen에 의한 상승효과는 관찰할 수 없었다. 2. 2일간의 배양 후에는 200bp 크기의 DNA 분절화의 정도가 TNF-α 첨가시에 가장 뚜렷하였고, estrogen 첨가 시에 저하되어 있었으나 대조군의 수준으로 회복되지는 못하였다. 3. TNF-α 투여 시에는 대조군에 비하여 농도가 증가함에 따라 생존수가 감소하였으며, estrogen을 첨가할 경우 TNF-α 10-10M 까지는 생존수가 증가되었다. 그러나 TNF-α 10-9M의 고농도에서는 estrogen에 의한 증가효과는 관찰되지 않았다. 4. TNF-α 10-10M 농도에서 collagen의 합성능이 저하되었으며, estrogen 추가시에도 저하된 collagen의 합성능은 회복되지않았다. 5. TNF-α, 10-10M에서 뚜렷한 IL-1β 유전자의 발현이 증가되었으며, estrogen 첨가 시에는 감소되었다. IL-6 유전자의 발현은 대조군과 TNF-α 첨가군은 차이가 없었으나 estrogen 첨가시에 감소하였다. 결론 : MC3T3-E1 조골세포에서 estrogen은 골의 미세 환경에서 생성되어 강력한 골 흡수 촉진자로 작용하는 TNF-α에 의한 아폽토시스의 유발을 억제하는 기능을 가지고 있으며, TNF-α에 의한 cytokine의 유전자활성을 억제함을 관찰하였다. 따라서 이러한 아폽토시스의 억제기능이 estrogen의 보호효과와 관련된 하나의 기전으로 작용하여 골 개조에 영향을 줄 수 있을 것으로 사료된다. Introduction : Apoptosis is a naturally occurring cell suicide pathway. The absence of a survival factor, such as a particular hormone or growth factor, will induce a cell to initiate its own cell death. This process induced in osteoblast is thought to play a role in the pathophysiology of postmenopausal osteoporosis. Estrogen plays an important role and exerts direct effects on bone cells, but the role in the maintenance of cell survival and apoptosis is poorly understood. Based on the importance of survival factors and cytokines in bone remodeling, some studies suggest that estrogen acts on bone cell by modulation of cytokine production that increases bone resorption. However other studies have not investigated the effect of estrogen on the apoptosis of osteoblast cells. Objective : To understand how estrogens regulate the apoptosis of osteoblast cells, the physiologically active etrogen metabolite 17 beta-estradiol was tested to determine its effects on the well characterized murine osteoblastic cell-line MC3T3-E1. Methods : Experiments were designed to identify the effects of estrogen on TNF-α induced apoptosis and cytokine gene expression, and collagen synthesis. Results : 1. Within 48 hours of exposure, recombinant murine at 10-11M - 10-10M TNF-α increased the rates of DNA synthesis and 10-11~M - 10-9M TNF-α reduces cell proliferation. 2. Estrogen treatment coordinately increased DNA contents, cell proliferation and collagen synthetic activity. 3. 10-10M TNF-α increased the IL-1β, IL-6 gene expression. 4. Estrogen attenuated the TNF-α- dependent increase in these gene expression. 5. Murine osteoblastic MC3T3-E1 cells underwent apoptosis following removal of serum, or addition of TNF-α, as indicated by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling and DNA fragmentation studies. 6. Estrogen inhibited the apoptosis of osteoblast cells induced by 10-10M TNF-α but not to the levels observed in those control. Conclusion : This in vitro evidence suggests that estrogen might exert at least part of antiapoptotic inflence on the bone cells.

        • KCI등재

          자궁내막 Interleukin-1 receptor type 1의 조절

          김승보,이보연,윤현하 대한산부인과학회 1998 Obstetrics & Gynecology Science Vol.41 No.2

          The Interleukin-1 system has been suggested as an important modulator for implanta-tion process, although its clear mechanism of action has not been elucidated. In this study we investigate the response of interleukin-1 receptor type1 in cultured endometrial cells by various embryonic products known to be involved in successful pregnancy outcome, includ-ing IL-1β, platelet activating factor(PAF) and human chorionic gonadotropin(hCG). Human endometrial tissue was separated to glandular epitherial cells and stromal cells. After 6 days culture of confluent monolayer in the serum containg media with progesterone, endometrial cell layers were further cultured with 6ml media each containing IL-1β(10 IU/ml), PAF(200 nM) or hCG(10 IU/ml). After 24 to 48 hr of culture endometrial cell layers were scraped and IL-1RtI expression was determined by Northern blot analysis. Endometrial expression of IL-1RtI messenger ribonucleic acid(mRNA) was increased until 24 hours and did not ch-anged until 48 hours. IL-1RtI mRNA expression of endometrial stromal cells cultured with IL-1β and PAF were higher than that of control(P>0.05). HCG did not affect the endome-trial stromal IL-1RtI mRNA expression. These results suggest that IL-1 system plays a role in embryo- endometrial communication.

        • KCI등재

          BEP 복합화학요법후 완전관해을 보인 내배엽동종양 1 례

          김승보,허주엽,김미영 대한산부인과학회 1993 Obstetrics & Gynecology Science Vol.36 No.8

          본 저자들은 최근 11세 여아에서 발생한 내배엽동종 1례를 경험하여 이에 대해 수술후 3차에 걸BEP 복합화학요법을 실시한 후 지금까지 8개월째 매달 외래에서 추적관찰중이며 현재 질병의 완전관해가 관찰되고 있어, 내배엽동종양 및 이에 대한 최근의 복합요법 동향과 추적관찰에 대해 간단한 문헌고찰과 더불어 보고하는 바이다. The endodermal sinus tumor is the second most common malignant germ cell tumor of the ovar, comprising 22% of all malignant germ neoplasms. Unlikely the dysgerminoma, which is only low grade in its malignant potentials, the endonermal sinus trmor is an exceedingly virulent ovarian tumor. Therapeutic approaches and prognosis have been making proces, there have been more emphases in treating the endodermal sinus trmor of the ovary with the adjuvant chemotherapy(BEP regimen)following appropriaate surgery. We had experienced a cases of the endodermal sinus trmor of 11year old women. We report this case with a review of the concerned literatures.

        • KCI등재

          후레자일 X 증후군의 분자유전학적 진단 (I)

          김승보,이숙환,곽인평,차광열,김종욱,이우식,김언경 대한산부인과학회 1995 Obstetrics & Gynecology Science Vol.38 No.12

          본 연구는 1993년 11월부터 1994년 12월까지 차병원 산부인과,기초의학연구소,소화아동병원 및 순천향대학병원에서 후레자일 X 증후군의 진단을 위해 내원한 94명을 대상으로 말초 혈액에서 DNA를 추출후 써던 블롯팅과 중합효소연쇄반응을 이용하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 남녀 환자, 보인자의 빈도는 남자환자가 6.4%, 여자환자가 2.1%이었고, 남녀보인자는 각각 4.3%로 일반적으로 알려져있는 general population 빈도보다 월등히 높았다. 이는 본 연구에서 시행된 94예가 후레자일 X 증후군의 의심하여 그 진단을 위해 의뢰된 것이기 때문이며 아직까지 치료방법이 개발되어 있지않는 본 증후군의 예방적인 차원에서 앞으로 우리나라에서도 general population에서의 후레자일 X 증후군의 빈도에 대한 연구가 필요하리라 본다. 2. 분자유전학적 진단방법의 하나로 써던 블롯팅은 EcoRI,Eagl의 두 가지 제한 효소의 이중 절단작용으로 정상 남녀에서는 각각 2.8kb, 2.8kb와 5.2kb의 band를, 그리고 남자보인자인 경우 2.8kb보다 높은 즉 크기(size)가 큰 band를 보이며 여자 보인자의 경우,2.8kb, $gt; 2.8kb 그리고 5.2kb의 세 band를 보이게 된다. 남녀 환자에서는 5.2kb에서 적어도 1kb이상 떨어진 부위에서 메칠화를 보이게 되는데 이런 메칠화현상은 CGG 반복수가 200개 이상으로 증폭되면서 FMRI유전자의 mRNA발현이 소실되는 과정의 late event가 그 분자학적인 병인으로 설명될 수 있다. 반면 보인자에서 볼 수 있는 band의 양상은 CGG 반복수가 54-200개 미만으로, 메칠화는 볼 수 없고 활성화된 X염색체 위에서는 발현되기 때문이다. 3. 중합효소연쇄반응을 이용한 진단방법은 정확하게 CGG의 반복수를 알 수 있다는 점과 써던 블롯팅보다 아주 적은 량의 DNA로 신속하게 결과를 얻을 수 있다는 점이 장점이 될 수 있으나, CGG의 반복수가 비교적 큰 premutation이나 CGG 반복수가 200개이상으로 늘어난 full mutation인 경우 증폭이되지 않기 때문에 band를 얻을 수가 없으므로 아직까지는 중합효소연쇄반응을 만으로 남녀보인자나 환자의 진단에는 상당한 주의가 요하고 반드시 그 결과를 써던 블롯팅으로 확인하는 것이 중요하다. 이와 같이 아직은 써던 블롯팅보다 중합효소연쇄반응을 이용한 진단율은 떨어지나, 신속하면서도 적은양의 DNA를 쓸 수 있다는 점에서 premutation 및 full mutation을 정확히 진단할 수 있는 중합효소연쇄반응을 이용한 실험방법의 개발이 시급할 것으로 생각된다. Background : The fragile X syndrome, the most common form of inherited mental retardation, is caused by mutations that increase the size of a specific DNA fragment of the X chromosome(Xq 27.3). In Korea, we don`t have molecular study analysis about the fragile X syndrome which never fount geographic, racial or ethnic clustering of this syndrome. We have analyzed fragile X syndrome in terms of molecular method. Patients and Methods : Ninety-four patients who were referred to Human Genetics Center of Cha General Hospital under the tentative impression of fragile X syndrome were studied using mutation analysis with Southern blotting and polymerase chain reaction (PCR). Mutations and abnormal methylation were detected by Southern blotting with a probe adjacent to the mutation target. Their size of the repeat region was also determined by a second method, polymerase chain reaction(PCR). The DNA in this region was amplified by the PCR and the size of the amplification products were determined. Result : DNA analysis unambiguously established the genetic status at the fragile X locus for all samples test. 8 in 94 patients(8.5%) were affected and 9 in 94 patients (9.6%) were carrier status. Conclusion : Southern blotting was more powerful and reliabla than cytogenetic testing or segregation studies with colsely linked polymorphic markers. PCR may help to analyze the size of the repeat region which led to determine the status of some carriers and normal individuals. The discrete bands in affected and carrier status detected by PCR were not always seen on the direct analysis. Therefore, caution should be exercised in interpreting PCR results alone for diagnosis of affected and some carrier individuals. we suggest that if altered allele are detected by PCR, confirmatory direct genomic Southern analysis sould be offered.

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