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      • 이질균의 진단용 단클론 항체 개발에 관한 연구

        이연태,조규봉,이운영 단국대학교 신소재기술연구소 1991 신소재 Vol.1 No.-

        이질균의 항원구조는 매우 복잡하기 때문에 Shigella 균종 중에서 Shigella flexneri를 선택하여 이질균의 항원 특성을 규명하고자 본 실험을 시도하였다. 그래서 본 교실에서 분리 계대해 온 S. flexneri의 균체 항원을 2회에 걸쳐 마우스의 복강내로 주사하였다. 면역된 마우스의 비장에서 임파구를 분리하여 polyethylene glycol을 이용하여 골수종 세포인 P3X63-Ag8.653과 융합하였다. HAT 배지에서 융합 세포를 선택하였다. 무한대 희석법에 의하여 융합 세포의 클로닝을 실시하였으며 항체의 생산은 간접 효소면역흡착법을 이용하여 확인하고 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 세포 골수종 P3X63-Ag8.653의 평균 분열 주기는 대수 증식기에서 12시간이었다. 2. 융합이 실시된 20개의 plate 중에서 융합 세포가 자란 것은 15 well이었다. 3. 융합 세포가 형성된 15 well에서 항체 형성이 검증된 well은 3개였다. 4. 효소면역흡착법을 통해 알아본 각 well에서 생성된 면역글로불린의 class는 2 well에서 IgG, 1 well에서 IgM이었다. 5. 클로닝 후 IgM의 생성이 확인된 세포 배양 상청액을 이용하여 다른 장내세균의 균체 항원과 반응을 시켰으나 반응이 나타나지 않았다. The antigenic structure of Shigella is very complex. So, production of monoclonal antibodies against Shigella flexneri which had been the most prevalent Shigella spp. in Korea was tried to investigate the characteristics of shigella antigens. Heat-killed cellular antigens of S. flexneri which had been cultivated in our laboratory were injected intraperitoneally into BALB/c mice twice at intervals. Spleen lymphocytes of immunized mice were fused with the myeloma P3X63-Ag8.653 cells using polyethylene glocol. Only hybridized cells grew in HAT medium. Supernatants from cultures were assayed for S. flexneri-specific antibodies by the indirect enzyme-linked immunosorbent assay. Hybridomas were cloned by limiting dilution. 1. The mean doubling time of P3X63-A8.653 myeloma cells was 12 hours. 2. Only 15 wells out of 20 plates cell fusions performed showed the growth of hybridized cells in the selecive medium. 3. S. flexneri-specific antibodies were generated from 3 wells of those 15 wells, checked by indirect ELISA. 4. Supernatants from 3 wells had different classes of immunoglobulins : IgG from 2 wells and IgM from 1 well. 5. After cloning, supernatant from SFB 11 checked as Ig M with the strongest visuality was not reacted with cellular antigens of other strains of Enterobacteriaceae.

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