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복상어와 고등어의 Trypsin에 관한 비교효소학적 연구 -2. 정제 Trypsin의 효소적 성질-
변재형,조득문,허민수,PYEUN Jae-Hyeung,CHO Deuk-Moon,HEU Min-Soo 한국수산과학회 1992 한국수산과학회지 Vol.25 No.5
전보(Pyeun 등, 1991)에 이어 복상어의 췌장에서 정제한 trypsin과 고등어 유문수에서 정제한 trypsin A 및 trypsin B에 대하여 그 효소적 특성을 비교 검토한 내용을 요약하면 다음과 같다. 1. $30^{\circ}C,\;45^{\circ}C,\;45^{\circ}C$ 및 $60^{\circ}C$의 각 온도 조건에서 효소의 안정성을 검토한 결과, 복상어의 trypsin이 고등어의 두 trypsin보다 안정하였으며, 고등어 trypsin A는 가장 불안정하였다. $55^{\circ}C$에서의 변성속도정수는 복상어 trypsin이 $10.68\times10^{-4}\;sec^{-1}$, 고등어 trypsin A는 $47.18\times10^{-4}\;sec^{-1}$, 그리고 고등어 trypsin B는 $34.06\times10^{-4}\;sec^{-1}$로서 고등어 trypsin A의 변성속도가 가장 빨랐다. 활성화에너지는 복상어 trypsin이 4.07 kcal/mole, 고등어 trypsin A는 11.61kcal/mole, 그리고 고등어 trypsin B는 8.43kcal/mole이었다. 2. Km정수는 복상어 trypsin이 248.59uM, 고등어 trypsin A는 53.7uM, 그리고 고등어 trypsin B는 $96.50\mu M$이었다. 3. Dixon식에서 구한 저해제 TLCK에 대한 저해제 정수는 복상어 trypsin이 $1.50\times10^{-6}M$,고등어 trypsin A는 2$2.86\times10^{-6}M$, 그리고 고등어 trypsin B는 $3.90\times10^{-6}M$였으며, 저해제 DFP에 대한 저해제 정수는 복상어 trypsin이 $9.28\times10^{-6}M$ 고등어 trypsin A는 $2.11\times10^{-4}M$, 그리고 고등어 trypsin B는 $1.60\times10^{-4}M$이었다. 4. 복상어와 고등어 trypsin의 효소적 특성의 두드러진 차이는 pH와 온도에 대해서 복상어의 trypsin은 고등어의 두 trypsin보다 알칼리성측과 고온에 대해 안정하였으며, 저해제에 의하여서는 복상어 trypsin이 보다 예민하게 나타났다. 또한 BA-p-NA 합성기질에 대한 친화성에 있어서는 고등어의 두 trypsin이 복상어의 trypsin보다 높은 것을 알 수 있었다. 5. 아미노산 조성은 세 효소 모두 비슷하였으나, 고등어 trypsin B의 경우 arginine의 함량이 높은 특징을 보였다. 산성아미노산과 염기성아미노산의 비는 복상어 trypsin이 3.57, 고등어 trypsin A는 3.36, 그리고 고등어 trypsin B는 2.23이었다. A comparative study of enzymatic properties between the trypsin from the cat-shark Cephaloscyllium umbratile ( C-T) and the two trypsins from the mackerel Scomber japonicus $(M-T_A\;and\;M-T_B)$ was carried out following after the previous paper(Pyeun et al., 1991). Trypsin from cat-shark(C-T) showed the higher heat stability compared to the others $(M-T_A\;and\;M-T_B)$ and its denaturation constant$(K_D)$ was $10.68\times10^{-4}\;sec^{-1}\;at\;55^{\circ}C$ with BA-p-NA substrate. The activation energies(Ea) of the trypsins measured at a temperature range from $30^{\circ}C\;to\;50^{\circ}C$ were estimated to be 4.07 kcal/mole for C-T, 11.61 kcal/mole for $M-T_A$, and 8.43kcal/mole for $M-T_B$, respectively. The Km values were $24.9\times10^{-5}\;M\;for\;C-T,\;5.37\times10^{-5}\;M\;for\;M-T_A,\;and\;9.65\times10^{-5}\;M\;for\;M-T_B$. On the other hand, the Ki values for TLCK and DFP determined by Dixon plot were $1.50\times10^{-6}\;M\;and\;9.28\times10^{-6}\;M\;for\;C-T\;2.86\times10^{-6}\;M\;and\;2.11\times10^{-4}\;M\;for\;M-T_A\;and\;3.90\times10^{-6}\;M\;and\;1.60\times10^{-4}\;M\;for\;M-T_B$ Similar amino acid profiles were showed between three trypsins each other, with few exceptions of $M-T_B$ containing higher amount of arginine, and the smaller amount of tryptophan in C-T than the others.
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