A Study on the vaccine mass production process through the development of a high titer culture of avian infectious bronchitis virus type QX in fertilized eggs

Jeon, Ho-Yeon Dong-eui University, Graduate School 2022 국내석사

조류 전염성 기관지염 바이러스 (Avian Infectious bronchitis virus)는 감마 코로나바이러스 (gammacorona virus)로써 전 세계적으로 유행하고 있으며 전염성과 치사율이 매우 높기 때문에 가금류 산업에 막대한 경제적 피해를 입힌다. 모든 연령대의 닭에게 감염이 되고 백신접종이 가장 확실한 방어대책으로써 사용되고 있지만 계속되는 변이형 (mutant)의 출현으로 인해 효과가 떨어지고 있다. 게다가 일교차가 큰 환절기에는 많은 농가에서 호흡기 관련 질병에 피해를 호소한다. 하지만 이러한 피해가 어떤 질병에 의한 것인지 파악하지 못하고 단순 항생제에 의존하는 것이 현실이다. 따라서 호흡기 관련 질병의 피해에 대한 인식과 피해감소를 위한 진단과 예방노력이 빠르게 정착되어야 한다. 빠른 백신의 공급와 생산을 위해서는 고역가의 바이러스를 배양하는 방법이 필요한데 식물로부터 추출한 천연 생리활성물질을 사용했다. In vitro scale에서 활성을 알아보기 위해 3일령의 병아리로부터 폐와 신장의 primary cell을 분리 및 배양하였고, cell 수준에서 천연 생리활성물질에 대한 활성도를 screening 하였다. 활성도가 있는 추출물을 특정하여 in vivo scale에서 바이러스를 배양에 사용하였다. 바이러스는 10일령 yellow fertilized egg의 allantoic cavity 에서 24 hr 동안 배양하였으며 allantoic fluid를 취하여 바이러스를 확보하였다. In vitro 실험에서 viral protein의 크기를 특정하고 확인하 여러 천연 생리활성 추출물에 대한 바이러스 생산성 증대를 확인하기 위해 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamidegel electrophoresis (SDS-PAGE)를 실행하였다. 천연 생리활성 추출물을 사용하여 배양한 고역가의 virus fluid를 formaldehyde soultion으로 불활성화 후 oil adjuvant를 사용해 W/O emusification 시켜 불활화 오일백신으로 제조하는 공정에 대한 protocol을 제안하고자 한다 Avian Infectious bronchitis virus (Avian Infectious bronchitis virus) is a gammacorona virus that is prevalent around the world and causes enormous economic damage to the poultry industry because of its high contagiousness and mortality. It infects chickens of all ages, and vaccination is the most effective defense, but the effectiveness is diminishing due to the continued emergence of mutants. In addition, many farms complain of respiratory-related diseases during the changing season with a large daily temperature difference. However, the reality is that we are dependent on simple antibiotics without knowing what kind of disease this damage is caused by. Therefore, awareness of the damage to respiratory-related diseases and diagnosis and prevention efforts to reduce damage should be established quickly. In order to rapidly supply and produce a vaccine, a method of culturing a virus with high titer is required, and natural physiologically active substances extracted from plants were used. To examine the activity on an in vitro scale, primary cells of the lung and kidney were isolated and cultured from 3-day-old chicks, and the activity against natural physiologically active substances was screened at the cell level. An extract with activity was specified, and the virus was used for culturing on an in vivo scale. Viruses were cultured for 24 hr in the allantoic cavity of 10-day-old yellow fertilized eggs, and the virus was obtained by taking allantoic fluid. In an in vitro experiment, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was performed to characterize and confirm the size of the viral protein and to confirm the increase in viral productivity for several natural physiologically active extracts. We would like to propose a protocol for the process of manufacturing inactivated oil vaccine by W/O emulsification using oil adjuvant after inactivation of high titer virus fluid cultured using natural bioactive extract with formaldehyde solution.

Cell type dependent variation in the paracrine potency determines the therapeutic efficacy in protecting against hyperoxia induced lung injury in neonatal rats

안소윤 Graduate School Kwan-Dong University 2013 국내석사

The purpose is to determine whether there is intratracheally transplanted cell type dependent variation among umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells (UCB-MSC), adipose tissue derived mesenchymal stem cells (AT-MSC), and UCB-mononuclear cells in protecting against neonatal hyperoxic lung injury, and if so, to delineate the possible mechanism of cell type dependent variation. Newborn Sprague-Dawley rats were randomly exposed to normoxia or hyperoxia for 14 days from birth. In the transplantation groups, 5x105 three different types of UCB-MSC, AT-MSC or UCB-mononuclear cells were given at postnatal day 5. In vitro cell culture model, H2O2 was treated to the pulmonary epithelial cells which co-cultured with UCB-MSC, AT-MSC, or UCB-mononuclear cells. The impaired alveolarization, angiogenesis, cell death, and inflammation, which evidenced by increased mean linear intercept, decreased intensity of vWF, enhanced TUNEL positive cells, and augmented inflammatory cytokines with ED-1 positive cells, were significantly apparent in hyperoxic control group compared to normoxic control group, and significantly improved in UCB-MSC group rather than AT-MSC group or UCB-mononuclear cells group. Cultured UCB-MSC showed enhanced potency at expression of growth factors (VEGF/HGF/LIF) than AT-MSC or UCB-mononuclear cells. UCB-MSC significantly more attenuated hyperoxic lung injury in the newborn rats than AT-MSC or UCB-mononuclear cells, and this different recovery property might be related with different expression level of trophic factors.

Implementation of ECAM Motion System using Adaptive Robust Fuzzy Controller with Genetic Algorithms

Tran quang vihn Graduate School Dong-eui University 2011 국내석사

In recent years, the demand on the distributed network motion system with master-slave configuration has been steadily increased with the necessity of the high speed automation equipments. The synchronization of the driving axis is very important in these network motion systems. The conventional way to synchronize axes in these motion control systems depends on mechanical driving shafts. In conventional system, a master axis turns all other axes on the machine through connections such as cams, gearboxes and universal joints. The problem in some applications is that the drive train may twist appreciably, and the position error is induced from the rolls of the master axis. Namely when the master motion speeds up, the slave stands can not follow the master position simultaneously. As a result, jerks and oscillations may occur. For these reasons, electronic cam (ECAM) motion system is increasingly used to provide perfect synchronization between the master motion and other slaves. In this paper, an ECAM motion system using adaptive robust fuzzy controller with genetic algorithms was implemented. The proposed ECAM controller used the polynomial curve-fitting methods to perform smooth cam profile interpolation functions. The adaptive robust fuzzy controller optimized by genetic algorithms was used to guarantees the performance of motion system under various working conditions. The control quality is also enhanced by adopting the digital filter to reduce the undesirable noises caused from the mechanical system. The simulation model of ECAM motion system was constructed in MATLAB/SIMULINK to verify the validity of the applied control algorithms and an experimental system was carried out on an X-Y stage driven by AC servo motors to compare the performance of system by the conventional PID controller and the proposed adaptive robust fuzzy controller with genetic algorithms under real conditions with load torque and parameter uncertainties. Through the simulation in MATLAB and the experiments of the position tracking on X-Y stage, the validity and feasibility of the implemented ECAM motion system was verified.

A STUDY ON THE REMOVAL OF MALODOROUS VOLATILE SULFUR COMPOUNDS WITH AN ACTIVATED CARBON FABRIC : 纖維狀活性炭에 의한 揮發性 硫黃系 惡臭物質의 除去에 관한 硏究

최종정 Graduate School, Dong-A University 1993 국내박사

硫叢系 揮發性惡臭物質의 除去에 관한 物理-化學的 및 生物學的 硏究를 통해 다음과 같은 몇가지 重要한 緖果들을 얻어, 惡臭環境 公害間題를 效果的으로 解決할 수 있는 보다 改善된 脫臭工程의 開發에 寄與할 수 있었다. 濕基準 含水率 80 % 민 纖維狀活性炭을 充塡한 固定層에 空氣와 混合된 200 ppm의 H_(2)S를 空塔速度 100 hr^(-1)로 通氣했을 때, 纖維狀 潘性炭 ( ACF )의 表面에서의 觸媒的 酸化反應으로 因해 長期間 동안 거의 完全한 轉換的 除去現象을 나타내었다. 이 觸媒的 酸化反應에서는 水分과 H_(2)S의 酸化에의해 ACF의 微細孔에 浸積된 元素黃(S˚)이 重要한 因子가 되는 것으로 알고, 그 反應機構도 밝힐 수 있었다. 비록 生成된 SO_(4)^(2-)이온의 累積으로 因해 充塡層 內部의 pH가 變하여 除去能이 低下되었지만, 簡單한 洗淨再生法으로도 除去能을 完全 回復시킬 수 있었다. 이 現象은 旣存의 粒狀活性炭 ( GAC,BPL )에 의한 硏究結果들과는 매우 다른 價値가 있는 硏究結果로 볼 수 있다. CH_(3)SH의 除去에 있어서는 ACF表蘭에서 空氣에 의한 部分酸化反應이 일어나, 惡臭度가 매우 弱한 CH_(3)SSCH_(3)로 轉換되였고, H_(2)S와 混合하였을 경우는 單獨通氣 때 보다 좋은 除去效率을 나타내었다. 이는 H_(2)S의 酸化로 浸積된 S˚의 觸媒效果로 볼 수 있다. 비교적 化學的으로 安定한 CH_(3)SCH_(3)는 ACF외 □潤條件과 관계없이 除去能이 나빴다. 따라서 CH_(3)SCH_(3)는 微生物의 生育條件을 잘 갖춘 ACF를 포함한 몇 種類의 不織化 纖維에 好氣性 消化處理된 活性汚泥를 固定化한 Biofilter에서 生物學的 除去特性을 檢討됐다. □養 결과, 纖維狀活性炭인 FN-200CF-15의 擔體에서 가장 많은 菌體의 集落을 確認 할 수 있었고, Micaelis-Menten武에 의한 速度論的 考擦에서는 最大除去速度 ( Vm ) 와 飽和定數 ( Ks )가 各各 2.19 ( g-S/kg-dry-fab day ), 6.04 ( ppm )로 求해져, 本 硏究에 사용된 다른 □體들 보다는 비교적 優秀한 固定化 □體로 推□ 할 수 있었다. 또 FN-200CF-15 Biofilter에서 單離란 優性菌主 ( Strain IM12 )는 CH_(3)SCH_(3)를 效果的으로 除去하는 酸化性 分解細菌인 事實도 밝혔다. 以上의 硏究結果들로 부터, 硫黃系 惡臭物質들이 混合되어 大氣中으로 放出되어 惡臭環境公害를 誘發할 경우, 纖維狀活性炭 ( FN-200CF-lS )에 의한 物理-化學的 除去工程과 單離된 菌主 IM12를 固定化한 FN-200CF-15 Biofilter에 의한 生物學的 除去工程을 結合한 複合脫臭工程을 考慮한다면 揮發性 硫賣系 惡臭物質들이 效果的으로 除去될 것으로 본다. The removal of malodorous volatile sulfur compounds with an activated carbon fabric ( ACF, FN-200CF-15 ) was studied and some experimental and theoretical efforts are suggested for the future studies for the development of advanced deodorization systems. Activated carbon fabric which is used as catalytic oxidant removes hydrogen sulfide effectively under the condition of its moisture content of 80 % as weight basis, 200 ppm with air of its inlet concentration and 100 hr^(-1) of its space velocity ( load = 11.01 g-S-H_(2)S/㎏-dry-fab day ). Nearly complete removal of H_(2)S lasted for 45 days. Although drastic decrease of the removal ratio was found at pH value less than 0.5 in drain water due to the accumulated sulfuric acid resulting from the oxidation of H_(2)S in the wet ACF, oxidizing ability was recovered by washing out H_(2)SO_(4) in the fiber. This phenomenon is different from granular activated carbon reported previously. A single supply of methanethiol resulted in the production of dimethyl disulfide, and methanethiol was perfectly oxidized to methane sulfonic acid in the mixed supply with H_(2)S. Dimethyl sulfide was not removed even at half inlet sulfur load of CH_(3)SH. Since dimethyl sulfide is difficult to degrade in a physico-chemical method, an attempt was made to demonstrate CH_(3)SCH_(3) by the biological degrading method. Biological deodorization of dimethyl sulfide was studied using different fabrics involving FN-200CF-15 as the carriers of microorganisms in laboratory scale deodorizing system. All the fabrics were seeded with aerobically digested night soil sludge before packing them into biofilters. The activated carbon fabric was the best packing material compared with other four packing materials used in this experiment on the basis of its removal efficiency. The maximum removal rate ( Vm ) and saturation constant ( Ks ) which is evaluated by using Michaelis-Menten equation were 2.19 ( g-S/㎏-dry-fab day ) and 6.04 ( ppm ) in this fabric biofilter. Considering the remarkable removability of the FN-200CF-15 biofilter, isolation of the dominant microorganisms inhabited this biofilter was also carried out. In enrichment culture system, some isolates of the three media degrades dimethyl sulfide successfully. Strain IM12 ( isolates of enrichment culture in Modified Waksman medium from FN-200CF-15 biofilter ) successfully degraded dimethyl sulfide in batch test, indicating that they may play a key role in the field of biological deodorization of sulfur compounds in association with the fabric carrier FN-200CF-15. Thus, the combination of physico-chemical and biological degrading methods by using activated carbon fabric promises an advanced deodorization system to treat sulfur containing gases.

Improvement study on spatial prediction by variable transformation

Parreno, Geneveve M Dong-eui University, Graduate School 2018 해외박사

Construction of a Transgenic Silkworm, Bombyx mori, Carrying the Chiemric Fibroin Gene : 키메라 피브로인 유전자를 갖는 형질전환 누에 (Bombyx mori) 제작

최광호 Graduate School, Dong-A University 2002 국내박사

누에 (Bombyx mori) 피브로인은 누에 유충의 후부 실샘에서 합성되는 실크 단백질의 주요성분으로서 Heavy chain (350 kDa), Light chain (25 kDa) 및 P25 (30 kDa)로 구성되어 있다. 본 연구는 피브로인 Light chain (L-chain) 유전자를 상동영역으로 사용하여 천잠 (Antheraea yamamai) 피브로인 유전자를 운반하는 형질전환용 베큘로바이러스 전이벡터를 제작하고, 이를 이용하여 피브로인 L-chain 유전자와 천잠 피브로인 유전자가 융합된 키메라 피브로인 유전자를 갖는 형질전환 누에를 제작하고자 하였다. 우선, 재조합 베큘로바이러스 전이벡터의 상동영역으로 사용될 피브로인 L-chain 유전자는 국내 장려 품종인 백옥잠 (B. mori) 후부 실샘에서 추출한 게놈 유전자에서 PCR 법으로 전체 피브로인 L-chain 유전자를 클로닝하여 그 특성을 구명하였다. 백옥잠 피브로인 L-chain 유전자는 7개의 엑손과 6개의 인트론으로 구성되어 있었다. 전체 14,663개의 염기쌍으로 786개의 Open Reading Frame (ORF)으로부터 262개의 아미노산이 번역되어 약 26,000 dalton의 분자량을 갖고 있었다. 염기서열로부터 연역된 백옥잠 피브로인 L chain 아미노산은 일본 계통인 J139와 98.5%의 높은 상동성을 보였으며, 11, 46, 48 그리고 123번째 아미노산 위치에서는 서로 상이하였다. Northern hybridization 분석 결과, 이미 알려진 바와 같이 피브로인 L-chain 유전자는 누에의 후부 실샘에서 조직 특이적으로 합성되는 것을 알수 있었다. 백옥잠 피브로인 L-chain 유전자의 염기서열을 분식함에 있어서, 품종간 유전적 다형성을 갖는 두 변이영역 (Ⅰ과 Ⅱ)이 관찰되었다. 본 연구에서는 추가적 연구로서 이들 두 변이영역의 PCR 증폭을 위한 primer sets을 제작하여 지역별 품종 및 교잡종에서의 염기서열을 분석하여 두 변이영역의 염기서열이 누에의 지역별 계통간 유전자 마커로서 정보를 반영하는지를 분석하였다. 변이영역 I (인트론 2~ 엑손 3~ 인트론 3)의 염기서열 분석 결과, 일본 계통인 잠 123에서는 787 bp, 중국 계통인 잠 124는 770 bp, 잠 123과 잠 124의 교잡 F_(1)인 백옥잠에서는 768 bp였다. 변이영역 Ⅱ (인트론 6 영역)에서는 잠 123은 470 bp, 잠 124와 백옥잠은 각각 428 bp와 429 bp였다. 또한, 잠 125 (일본계통)와 잠 126 (중국 계통) 및 이들의 F_(1) 교잡종인 대성잠에서도 같은 방법으로 염기서열을 분석·비교하였다. 변이영역 1의 염기서열 분석결과, 잠 125는 787 bp, 잠 126과 대성잠에서는 각각 770 bp와 768 bp였다. 변이영역 Ⅱ에 있어서는 잠 125가 467 bp, 잠 126과 대성잠에서는 각각 436 bp와 438 bp인 것으로 분석되었다. 이러한 결과에서 잠 126은 잠 124와, 잠 125는 잠 123과 매우 유사한 피브로인 L-chain 유전자 염기서열을 갖는 것으로 생각되며, F_(1) 교잡종 (백옥잠과 대성잠)의 피브로인 L-chain 유전자 유전양상은 중국 계통 (잠 124와 잠 126)의 영향을 받는 것으로 사료된다. 분석에 사용된 누에의 고치 형태를 관찰한 결과, Fl 교잡종 (백옥잠과 대성잠)은 타원형 고치로서 땅콩형의 일본 계통 (잠 123과 잠 125)보다는 타원형인 중국 계통 (잠 124와 잠 126)의 고치 모양과 유사하였다. 이러한 결과로서, 중국 계통과 일본 계통 누에간의 F_(1) 교잡종은 피브로인 L-chain 유전자 및 고치형태에서 중국 계통의 영향을 받는 것으로 생각된다. 그리고 본 연구에서 조사된 피브로인 L-chain 유전자의 변이영역 -Ⅰ과 -Ⅱ는 일본 및 중국 계통 누에에 있어서 유전자 마커로서의 활용 가치가 높을 것으로 사료된다. 키메라 피브로인 유전자를 갖는 형질전환 누에 제작을 위한 전이벡터 개발은, 분석된 피브로인 L-chain 유전자 영역 중 7.2 kb 유전자 (SFL)를 상동영역으로 여기에 천잠 피브로인 유전자 (AYF, 444 bp)를 SFL 유전자 엑손 6의 Pvu Ⅱ 제한효소 부위에 클로닝 함으로서 천잠 피브로인 유전자와 누에 피브로인 유전자가 융합된 베큘로바이러스 전이벡터 (pBacPAK-SFL-AYF)를 제작하였다. 제작된 플라스미드 벡터는 BacPAK6 viral DNA와 함께 Sf9 곤충 세포주에 co-transfection하여 Autograph californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV)의 polyhedrin 유전자 상에 키메라 피브로인 유전자가 도입된, 누에 피브로인 유전자 형질전환용 재조합 베큘로바이러스(vSFL-AYF)를 제작하였다. 재조합 베큘로바이러스 vSFL-AYF는 암컷 5령 1일째 누에 (F_(0))에 5 x10^(5) PFU/50 ㎕씩 주사 접종하였다. 이후, 차세대 알 및 혈림프에서 추출한 게놈 유전자를 이용하여 PCR과 Southern hybridization 법으로 형질전환 누에를 선발하였다. F_(1) 알에서 분석한 결과, 약 1.5%의 형질전환체를 선발하였으며, 선발된 알은 부화 후 5령기에 개체별로 혈림프를 추출하여 동일한 방법으로 형질전환 누에를 선발하였다. 그 결과, F_(1) 유충에서는 약 2.7%의 형질전환율을 보였다. 계속해서 F_(2) 유충에서는 132 마리의 조사 유충 중 57마리에서 키메라 피브로인 유전자를 갖는 형질전환 누에가 선발되어 약 43.2%의 형질전환율을 보였다. 선발된 F_(2) 형질전환 누에는 고치에서 피브로인 단백질을 추출하여 키메라 피브로인 단백질의 발현 여부를 조사하였다. SDS-PAGE 분석 결과, 형질전환 누에의 고치에서는 피브로인 L chain (25 kDa)과 천잠 피브로인 AYF (14 kDa)가 용합된 39 kDa의 키메라 피브로인 L-chain-AYF 단백질 밴드가 확인되었다. 그리고 키메라 L-chain-AYF 단백질은 native 형태인 25 kDa의 L-chain 단백질과 함께 합성되는 것으로 사료된다. 이상의 결과를 종합하면, 본 연구에서 제작된 누에 피브로인 유전자 형질전환용 재조합 베큘로바이러스 vSFL-AYF를 이용하여 F_(2) 세대에서 43.2%의 형질전환 누에를 선발할 수 있었다. 이러한 결과는 상동재조합에 의한 누에의 견사선으로부터 특정 유용 단백질을 생합성 할 수 있는 형질전환 누에 품종의 개발에 활용할 수 있다는 점에서 큰 의의가 있다고 하겠다. Fibroin produced by the silkworm Bombyx mori within the posterior silk gland consists of a heavy chain of 350 kDa, a light chain of 25 kDa, and P25 of 30 kDa. For the construction of transgenic silkworm, the recombinant baculovirus as a fibroin I,-chain gene targeting vector which deliver chimeric fibroin gene fused with the Antheraea yamamai fibroin (AYF) gene was construced. In the first, the complete fibroin L-chain gene as a homologous region was cloned and characterized from the posterior silk gland of silkworm Baekok- Jam. Baekok- Jam fibroin L-chain gene was consisted of seven exons and six introns. It's 14,663 nucleotides long with an open reading frame of 786 nucleotides that encodes a protein of 262 amino acid residues with a molecular mass of approximately 26,000 dalton. The amino acid alignment revealed that the Baekok-Jam fibroin L-chain had 98.5% amino sequence identity to J139 strain, a Japanese breed, and was different from amino acid residues at four positions, 11, 46, 80 and 123 in J139. Northern hybridization analysis showed that the Baekok- Jam fibroin L-chain gene was specifically expressed in the posterior silk glands. Interestingly, two variable regions (I, intron 2 ∼ exon3 ∼ intron 3; Ⅱ, intron 6) from the fibroin L-chain gene were investigated. To study genetic polymorphism of silkworm races, DNA sequence divergence from the fibroin L-chain gene was analyzed by PCR and sequencing with the primer sets designed in this study. Japanese race (Jam 123), Chinese race (Jam 124) and their F_(1) hybrid Baekok-Jam were used in this study. The PCR product size of I region (intron 2 ∼ exon3 ∼ intron 3; Ⅱ, intron 6) was 787 bp to Jam 123, 770 bp to Jam 124 and 768 bp to Baekok-Jam, respectively. The size of Ⅱ region (intron 6) was 470 bp to Jam 123, 428 bp to Jam 124 and 429 bp to Baekok-Jam, respectively. For the additional evidence, Japanese race (Jam 125), Chinese race (Jam 126) and their F_(1) hybrid Daeseong-Jam were also analyzed. The size of I region was 787 bp to Jam 125, 770 bp to Jam 126 and 768 bp to Daeseong-Jam, respectively. The size of Ⅱ region was 467 bp to Jam 125, 436 bp to Jam 126 and 438 bp to Daeseong-Jam, respectively. The sizes of I- and Ⅱ-regions in Jam 125, Jam 126 and Daeseong-Jam were similar to those of Jam 123, Jam 124 and Baekok-Jam. DNA sequence divergence between the two geographic races of Jam 123 or Jam 125 and Jam 124 or Jam 126 was substantial. The result suggests that in the fibroin L-chain gene, the F_(1) hybrids have inherited the L-chain gene from Chinese races. Additionally, the cocoon shapes of tested animals were observed. Japanese races (Jam 123 and Jam 125) have peanut shape cocoon, and Chinese races (Jam 124 and Jam 126) and F_(1) hybrids (Baekok-Jam and Daeseong- Jam) have elliptical shape cocoon, indiscriminately. The phenomenon suggested that in the fibroin L-chain gene and cocoon shape, Baekok-Jam or Daeseong-Jam is more closely related to Jam 124 or Jam 126 than to the Jam 123 or Jam 125. Taken these data together, the primer sets designed from two variable regions in this study would be highly useful, at least in Japanese and Chinese races, for the genetic marker among silkworm races and/or breeds. To construct a transgenic silkworm carrying the chimeric fibroin gene, the recombinant Autograph californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) was constructed. The 7.2 kb-rear region (SFL) of fibroin L-chain gene as a homologous sequence inserted into pBacPAK9 vector. Subsequently, Antheraea yamamai fibroin (AYF, 444 bp) gene inserted into Pvu Ⅱ restriction enzyme site of the exon 6 on SFL gene to yield a baculovirus transfer vector pBacPAK-SFL-AYF. To construct the recombinant baculovirus vSFL-AYF, the chimeric SFL-AYF gene was replaced with the AcNPV polyhedrin gene. One-day-old fifth instar female larvae were injected (5 × 10^(5) PFU/50 ㎕/individual) with the recombinant vSFL-AYF. After inoculation, the genomic DNAs from embryos or hemolymphs were extracted, and screened for the desired transgenic silkworm carrying the chimeric fibroin L-chain gene by PCR and Southern blot analysis. The screening result in F_(1) egg, approximately 1.5% eggs were screened as transgenic animals. In F_(1) larvae, approximately 2.7% of the individuals tested were the AYF gene positive. The AYF gene positive F_(1) moths were mated with a normal moths. In F_(2) larvae, approximately 43.2% of the F_(2) individuals tested were screened out. To confirm further that the chimeric fibroin L-chain-AYF gene was expressed in the silk glands, SDS-PAGE analysis was performed. The analysis revealed a novel protein with a molecular mass of 49 kDa and a native form of L-chain (25 kDa) in the cocoon protein of F_(2) silkworms as compared with a normal cocoon. The molecular mass of the chimeric L-chain consisted of native L-chain (25 kDa) and A. yamamai fibroin AYF (14 kDa). This result suggests that the construction of novel transgenic silkworm producing useful hybrid silk will be possible by fibroin L-chain gene targeting system.

Cloning, Expression, and Characterization of Genes for Chitinase and Ferritin Subunit from the Spider, Araneus ventricosus : 산왕거미 (Araneus ventricosus)의 Chitinase 와 Ferritin Subunit 유전자의 클로닝, 발현 및 특성

한지희 Graduate School, Dong-A University 2002 국내박사

The Study of Seunggal-tang on the Anti-allergy Effects : 승갈탕의 항알레르기 효과에 관한 연구

주봉현 Graduate School Dong-Eui University 2007 국내박사

The PMA plus A23187-induced RBL-2H3 cells에 대한 승갈탕(升葛湯)의 효과를 조사하기위해, β-hexosamonidase 분비와 passive cutaneous anaphylaxis와 TNF-α 생산과 IL-4 분비에 대한 승갈탕의 효과를 연구했다. 승갈탕은 RBL-2H3세포에서 세포생장에 영향을 주지 않으면서 β-hexosamonidase의 분비를 줄였다. 승갈탕은 PCA 완화에도 효과가 있었고 TNF-α 생산과 IL-4의 분비를 농도 의존적으로 줄였다. 이러한 결과로 미루어보아 승갈탕이 RBL-2H3 cells에서 항알러지 효과가 있음을 알 수 있다. In order to investigate effects of SGT on the PMA plus A23187-induced RBL-2H3 cells, we studied the effect of SGT on β-hexosamonidase release, passive cutaneous anaphylaxis, TNF-α production and IL-4 secretion. SGT inhibited the release of β-hexosamonidase in RBL-2H3, without affecting cell viability. The passive cutaneous anaphylaxis (PCA) was inhibited by the SGT. And SGT also reduced production of TNF-α and secretion of IL-4 in a dose-dependent manner. These results suggest that SGT has anti-allergy effects on the RBL-2H3 cells.

Inverse Polynomial Module and Localization : 역다항식모듈과 국소성

이옥현 Graduate School, Dong-A University 1999 국내박사

R이 항등원을 가지고 S가 자연수의 부분모노이드이며 M이 좌 R-모듈이면 쌍멱다항식 M[[χ^(-1), χ]]는 좌 R[χ^(s)]-모듈이다. Mckerrow는 만약 R이 좌 Noetherian환일 때, E가 단사 좌 R-모듈일 필요충분조건이 역다항식 E[χ^(-1)]가 R[χ]-모듈로써 단사인 것을 보였다. 본 논문에서 우리는 쌍멱다항식 M[[χ^(-1), χ]]의 성질을 연구하고, 만약 E가 단사 좌 R-모듈이고 S가 자연수 N의 부분모노이드이 면 E[[χ^(-1), χ]]가 단사 좌 R[χ^(s)]-모듈임을 보였다. S= {0, k_(1), k_(2), k_(3)…}가 자연수의 부분모노이드이고 이 좌 R-모듈이면, 다음과 같이 정의된 쌍멱다항식 M[[χ^(-1), χ]]은 좌 R[χ^(s)]-모듈이다. ◀식 삽입▶(원문을 참조하세요) 그리고 Hom_(R)(R[χ], E) 와 역멱다항식 E[χ^(-1)]이 R[χ]-모듈로써 다음과 갈이 Φ를 정의함으로써 동형이 됨을 알 수 있었다. Ф(f)=f(1)+f(x)x^(-1)+f(x^(2))x^(-2)+…, f∈Hom_(R)(R〔x〕,E). 또한 만약 R이 좌 Noetherian환이고 E가 단사 좌 R-모듈이며 E가 ker(f)의 본질적 확장이면서 f가 End(5)의 원소일 때, f는 E상에서 국소적으로 거듭제곱이 0이 됨을 알 수 있었다. 이 사실을 이용하여, 만약 R이 Noetherian환이고 E가 단사 좌 R-모듈이면 E[χ^(-1)]가 R[χ]- 모듈로써 단사적 포락면임을 보였다. 또한 P가 사영 좌 R-모듈일 필요충분조건이 P[χ]가 R[χ]-모듈로써 사영일 때임을 보였다. 그리고 P[χ^(-1)]는 사영 좌 R-모듈에 대해 R[χ]-모듈로써 사영이 아님을 다음의 그림을 이용하여 보일 수 있었다. ◀그림삽입▶(원문을 참조하세요) 마지막으로 국소성 T^(-1) R[χ^(S)]가 평탄 R[χ^(S)]-모듈임을 보이고, 그 때 국소성 T^(-1) R[χ^(S)]와 쌍다항식 R[χ^(-1), χ]가 R[χ^(S)]-모듈로써 동형임을 보였다. 그리고 단사 좌 R-모듈 E에 대해 단사 좌 R[χ^(S)]-모듈로써 Hom_(R)(R[χ^(-1), χ], E)을 만들 수 있었고, Hom_(R)(R[χ^(-1), χ], E)와 쌍벽다항식 의E[[χ^(-1), χ]]가 R[χ^(S)]-모듈로써 동형이 됨을 보였다. Let R be a ring with unity and S be a submonoid of the set of natural numbers N, and M be a left R-module, then M[[χ^(-l),χ]] is a left R[χ^(S)]-module. Mckerrow prove that R is a left noetherian ring then E is a injective left R-module if and only if the inverse polynomial module E[χ^(-1)] is an injective left R[χ]-module. In this paper we study the properties of bipower series M[[χ^(-1),χ]] and we prove if E is an injective left R-module and S is a submonoid of the natural numbers N, then E[[χ^(-1),χ]] is an injective left R[χ^(S)]-module. Let S = (0, k_(1), k_(2), k_(3),ㆍㆍㆍ} be a submonoid of the natural numbers and M be a left R-module, then M[[χ^(-l),χ]] is a left R[χ^(S)]-modules such that r(ㆍㆍㆍ+m_(i)χ^(2)+ㆍㆍㆍ+m_(1)χ+m_(0)+n_(1)χ^(-1)+ㆍㆍㆍ+n_(i)χ^(2)+ㆍㆍㆍ) =ㆍㆍㆍ+rm_(i)χ^(2)+ㆍㆍㆍ+rm_(1)χ+rm_(0)+rn_(1)χ^(-1)+ㆍㆍㆍ+rn_(i)χ^(-2)+ㆍㆍㆍ. and r(ㆍㆍㆍ+m_(j)χ^(j)+ㆍㆍㆍ+m_(1)χ+m_(0)+n_(1)χ^(-1)+ㆍㆍㆍ+n_(j)χ^(-j)+ㆍㆍㆍ) =ㆍㆍㆍ+m_(j)χ^(j+k_(i))+ㆍㆍㆍ+m_(1)χ^(1+k_(i))+m_(0)χ^(k_(i))+n_(1)χ^(-1+k_(i))+ㆍㆍㆍ+n_(j)χ^(-j+k_(i))+ㆍㆍㆍ. And we show that Hom_(R)(R[χ], E) and the inverse power series E[[χ^(-1)]] are isomorphic as R[χ]-modules by defining Φ(□)=f(1)+f(χ)χ^(-1)+f(χ^(2))χ^(-2)+.ㆍㆍ for □ ∈ Hom_(R)(R[χ], E). So we prove that if R is a left noetherian ring and E is an injective left R-module and □ ∈ End(E) is such that E is an essential extension of ker(□), then □ is locally nilpotent on E. Using this fact, we prove that if R is a noetherian ring, and E is an injective left R-module, then E[χ^(-l)] is an injective envelope of E as R[χ]-modules. And we prove that P is a projective left R-module if and only if P[χ] is a projective left R[χ]-module. And we prove that P[χ^(-1)] is not a projective left R[χ]-module for a projective left R-module P, by showing that the following diagram ◁그림삽입▷ (원문을 참조하세요) can not be completed as an R[~]-linear map. Finally we prove that the localization T^(-1)R[χ^(S)] is a flat R[χ^(S)]-module and then we claim T^(-1)R[χ^(S)] and R[χ^(-1), χ] are isomorpic as R[χ^(S)]-modules. And for an injective left R-module E, we can make Hom^(R)(R[χ^(-1), χ], E) as an injective R[χ^(S)]-module, and we show Hom^(R)(R[χ^(-1), χ], E) and E[[χ^(-1), χ]] are isomorphic as R[χ^(S)]-modules.

The Study of the Bufonis Venenum on the Anti-inflammatory Effects : 蟾소 추출물이 炎症反應에 미치는 影向

김민희 Graduate School Dong Eui University 2006 국내박사

섬소는 두꺼비의 耳後腺이나 皮膚腺에서 분비되는 白色腸液을 건조하여 만든 것으로 功毒消腫하는 효능이 있어 고대로부터 각종 癰疽, 瘡瘍등증에 많이 이용되어왔다. 癰疽, 瘡瘍은 서의학적 개념의 염증반응과 유사하여 섬소의 抗炎作用에 대해 알아보고자 BV-2 microglia에서의 NO의 농도, 세포 생존도, iNOS의 발현, IL-1β, IL-12, TNF-α의 농도를 실험한 결과 NO의 농도가 현저히 감소되었고, 세포 생존도에는 변화가 없었으며 iNOS의 발현도 현저히 감소되었고 IL-1β, IL-12, TNF-α의 농도 역시 유의하게 감소되었다. 以上을 살펴볼 때 섬수 추출물은 항염증에 유의한 효과가 있음을 알 수 있었다. Bufonis Venenum(dried toad venom; korean name, seom so) is a traditional oriental medicine obtained from the skin venum gland of the toad. This substance has traditionally been used to treat inflammatory disease such as abscess, carbuncle and phlegmon etc. with the internal or external drug by promoting subsidence of swelling, removing stagnation of Gi(energy) and removing toxic substances. Ongjuh(癰疽) is one of the oriental medical name of disease, including all inflammatory disease of skin. In the view of western medicine, Ongjuh(癰疽) is very similar to various acute and chronic inflammatory disease. Inflammation is localized response to foreign substance such as bacteria or in some instance to internally produced substances and has relation with immunity system. Since nitric oxide (NO) is one of the major inflammatory parameter, we firstly studied the effect of aqueous extracts of Bufonis Venenum on NO production in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated BV-2 microglia. Bufonis Venenum inhibited the secretion of NO in BV-2 microglia, without affecting cell viability. The protein level of inducible nitric oxide synthase (iNOS) was decreased by Bufonis Venenum. Proinflammatory mediators such as TNF-α, IL-1, IL-12 were inhibited by Bufonis Venenum in a dose-dependent manner. This results show that Bufonis Venenum could be used as an anti-inflammatory herbal material.