구연 : Restriction Fragment Mass Polymorphism를 이용한 C형 간염바이러스 유전자형 분석법 = New Hepatitis C Virus Genotyping Assay as a Routine Method쟟y Novel Restriction Fragment Mass Polymorphism (RFMP)

국문 초록 (Abstract)

배경/목적: C형 간염의 만성화는 HCV 유전자의 극심한 다양성에 원인이 있다. 이러한 유전자의 다양성 중 HCV의 유전자형 및 그 아형의 분류는 역학조사나 백신개발에 중요한 의미를 내포하고 있을 뿐 아니라 이미 C형간염의 인터페론 치료에 필수적인 임상검사가 되었다. 그러나 기존의 검사방법은 숙련된 인원과 시설을 필요로 하며 primer의 사용에 따라 유전자형이 다르게 나타나거나, 혼합감염의 경우 단독 유전자형으로 분류되며 고가인 점이라는 한계가 있었다. 따라서 더 저렴하면서도 정확하고, 재현성이 있으며 신속한 진단 방법이 절실히 요구되어 왔다. 대상과 방법: 1997년 1월부터 2003년 1월까지 인터페론 치료를 받기 위해 genotyping을 실시했던 환자를 포함한 만성 C형 간질환 48명과 서울대병원 환자 20명을 대상으로 하였으며 이 중 33명은 기존에 RFLP 또는 Hybridization 방법으로 genotyping을 검사했던 환자들이었다. 검사방법은?Restriction Fragment Mass Polymorphism (RFMP) 방법을 이용하였다. HCV RNA를 정제 분리한 후, 5`-UTR 지역을 역전사, 연쇄중합반응 (RT-PCR)하고 TypeIIS 제한효소로 절단한다. 절단된 HCV의 DNA 절편은 바이러스의 염기서열 차이에 따라 독특한 질량을 갖게 되고, 이 질량 차이를 말디토트 (MALDI-TOF) 질량분석기로 분석하여 바이러스의 유전형을 파악하게 된다. 결과: 표와 같이 68예 전예에서 유전자형 및 아형과 혼합감염여부를 알 수 있었으며 기존의 국내보고와는 달리 2c형이 2a형보다 많았고 혼합형도 11예 (16.5%)가 있었다. 기존방법으로 유전자형을 검사한 33예 중 19명 (57.6%)이 같은 유전형을 보였고 4명 (12.1%)이 혼합형을 보였으며 9명 (27.3%)은 유전자형은 같았으나 아형이 달랐고 1예는 다른 유전자형으로 판명되었다. 1b 2a 2c 2a,2c 2a,2e 1b,2a 1b,2a,2e 1b,1f 1b,1c 1b,2c 3e Total 33 8 15 1 2 1 4 1 1 1 1 68 48.5% 11.8% 22% 1.5% 2.9% 1.5% 5.9% 1.5% 1.5% 1.5% 1.5% 100% 결론: 본 검사법은 기존의 RFLP나 Hybridization 방법보다 높은 정확도, 재현성, 신속성이 특징이며 검사과정상 종전의 방법에 비해 비용이 저렴하다. 그리고 6개의 유전자형 뿐 아니라 27종의 아형까지 원스텝으로 진단 가능하다. 또한 중복 감염이나 돌연변이로 2종 이상의 바이러스가 존재할 때, 바이러스의 상대적 양을 추정할 수 있는 장점이 있다. 향후 인터페론 치료전 임상검사뿐 아니라 역학 및 임상 연관성 연구에 최적의 적절한 검사법으로 생각된다.