Unscheduled DNA Synthesis Induced by Carcinogens in Primary Culture of Rat Hepatocytes

국문 초록 (Abstract)

Rat의 1 차간세포 배양에 environmental 발암물질을 첨가하여 간의 DNA에 손상을 준뒤 복구되는 정도를 정량적으로 측정하였다. 즉, CaCl density gradient 을 초원심분리(ultra-centnfuge)로 만들어 DNA를 추출해서 그것에 결합된 ［^3H］-thymidine양을 liquid scintillating 측정기로 측정하였다. Direct 발암물질인 MNNG에 의한 손상의 복구는 short patch 형태로 복구가 빨리 일어나고, indirect 발암물질인 Benzo(a) Pyrene에 손상의 복구는 large patch 형태로 복구가 천천히 일어난다.
［^3H］-thymidine과 발암물질을 세포에 같이 넣고 UDS을 유도시키는 실험에서 B(a)P에 대한 손상의 복구는 12시간까지 계속해서 증가되었으나, MNNG에 대한 손상의 복구는 3시간안에 급속히 증가된 후 그 수준을 12시간 까지 유지시켰다.
발암물질을 세포에 넣어 2시간 동안 손상을 준후 ［^3H］-thymidine을 세포에 첨가하여 UDS을 유도시키는 실험에서 B(a)P에 의한 복구는 실험 시작후 3-6 hr에서 최대를 보였다. 또 MNNG에 대한 실험에서는 0-3 hr에서 최대를 보였다.
Indirect 발암물질은 세포내에서 대사가 되어야 DNA에 손상을 입힐수 있어 간세포를 얻은 후 18시간 이내에 실험을 시작해야 그 물질의 DNA와 결합하는 성질을 잘 나타낼수 있었다. Dose-response 실험에서는 MNNG는 10^-4M에서 B(a)p는 10^-5M에서 최대값을 얻었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

The ability of direct and pro-carcinogens to induce unscheduled DNA synthesis(UDS) in primary culture of hepatocytes was examined. Hepatocytes were isolated from adult male rats with collagenase perfusion technique and maintained in short-term monolayer culture on collagen-coated plates in serum free modified Waymouth's medium. Incorporation of ［^3H］-thymidine into DNA in the presence of hydroxyurea was used to measure UDS.
N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG) which elicit a "short-patch" type of DNA repair and benzo(a) pyrene (B(a)P) which result in a "long-patch" type of DNA repair were used as standard carcinogens to show repair patterns.
In continuous labelling experiments, UDS induced by B(a)P was increased linearly for 12hr in cultures, but that of