신령버섯의 기형으로부터 배양불능세균의 PCR 검정 = PCR-based identification of uncultural bacterium from malformed Agaricus blazei

국문 초록 (Abstract)

신령버섯은 항암작용과 더불어 면역강화작용 등 약용으로서 이용되고 있습니다. 최근에는 신령버섯 재배농가에서 새로운 병징 현상이 보고되어 내생세균에 대한 분자생물학적 방법으로 조사하였다. 병징을 나타내는 수집된 기형버섯을 eubacterial 16S rDNA 영역을 이용하여 PCR한 결과 기형버섯만 증폭되었다. 이 영역을 부분적으로 염기서열을 결정한 결과 CFB bacterium과 유사성이 가장 높았고, 이 염기서열을 이용하여 프라이머를 디자인한 후 nested PCR를 부위별로 확인한 결과 기형을 일으킨 갓의 주름살 부위에서 가장 강하게 증폭되었고 포자수확도 되지 않았으며 배양불능세균 group인 CFB bacterium임을 확인하였다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Agaricus blazei Murill is a important medicinal mushroom for a powerful immune system builder and tonic. Currently, it is known about a new disease phenomenon that appears to be occurring on a number of mushroom farms. We described a straightforward approach in which molecular methods was used to survey the presence of potentially endo- and epiphytic bacteria infected with the Agaricus blazei. The 16S rDNA was amplified with universal eubacterial primers directly from pure cultures of Agaricus blazei mycelium and fruit body. The 16S rDNA sequences were almost identical (96 to 97% similarity), and phylogenetic analysis placed them in a single unique rRNA branch belong to the uncultural bacterium phylogroup. PCR detection of uncultural bacterium in the malformed tissues of Agaricus blazei were carried out by using 16S rRNA sequenced specific probe. It was strongly amplified at the malformed pileus region of fruit body and also spore print was impossible.

목차 (Table of Contents)

• 서론
• 재료 및 방법
• 공시균주 및 PCR 프라이머 제작
• Genomic DNA 분리
• PCR
• Partial cloning 및 sequencing
• 조직부위별 PCR
• 결과
• 16S rDNA 영역을 이용한 기형버섯의 PCR 검정
• 기형버섯의 부위별 PCR 검정
• 양송이버섯에서 배양불능세균의 동정
• 고찰