물곰팡이 Allomyces macrogynus의 홀씨와 팡이실에 존재하는 칼슘이온결합 단백질의 검색 = Calcium binding proteins in zoospores and mycelium of Allomyces macrogynus

국문 초록 (Abstract)

45Ca overlay를 이용한 방법으로 Allomyces macrogynus의 생장과정에서 형성되는 암수배우자 홀씨, 반수체 홀씨, 그리고 이배체 홀씨등의 세가지 홀씨와 팡이실에 존재하는 칼슘이온결합단백질들을 검색하였다. 세가지의 홀씨 각각에서는 모두 5가지 종류의 칼슘이온결합단백질들이 동일하게 관찰되었다. 팡이실에서는 적어도 6개 이상의 칼슘이온결합단백질들이 관찰되었으며, 이중에 3가지는 홀씨에서 관찰된 것과 동일한 것으로 판단된다. Ca2+-dependent phenyl-sepharose를 이용하여 팡이실에서 SDS-PAGE 겔 상에서 19kDa의 분자량을 가지는 칼슘이온결합단백질을 분리하였다. 이 단백질은 등전점이나 열에 대한 안정성, 칼슘이온에 의한 전기영동상에서의 움직임의 변화 등으로 판단하건 데 calmodulin으로 추정된다. 따라서 Allomyces macrogynus의 홀씨와 팡이실에는 calmodulin을 비롯하여 다수의 칼슘이온결합단백질들이 존재하며, 이들 중에는 홀씨, 또는 팡이실에서만 관찰되는 것들도 있었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Calcium binding proteins(CaBPs) present in 3 different types of zoospores and in mycelium of Allomyces macrogynus were screened by using 45Ca overlay method. Five different kinds of CaBPs were equally observed in gametes, haploid spores, and diploid spores, respectively. Six kinds of CaBPs were observed in fractions of DEAE-cellulose chromatography of mycelial extract. Among them 3 CaBPs were shown to be identical with those detected in zoospore extract. 19-kDa CaBP was isolated from mycelial extract by Ca2+-dependent phenyl-sepharose chromatography. The 19-kDa mCaBP showed calmodulin-like properties as determined by molecular weight, isoelectric point, and Ca2+-dependent mobility shift on SDS-PAGE. It is shown that a variety of CaBPs including calmodulin-like protein are present in zoospores and mycelium of Allomyces macrogynus and some are confined to either.

목차 (Table of Contents)

• 요약
• Ⅰ. 서론
• Ⅱ. 재료 및 방법
• 1. 시약
• 2. 곰팡이 균주 배양
• 3. 칼슘이온 결합 단백질의 분석(45Ca overlay 방법)
• 4. 홀씨에서 칼슘이온결합단백질의 검색
• 5. 팡이실에서 칼슘이온결합단백질의 검색
• 6. Ca2+-dependent phenyl-sepharose를 이용한 칼슘이온결합단백질의 분리
• 6. 등전점 전기영동 및 이차원 SDS-PAGE
• 7. 기타방법
• Ⅲ. 결과
• 1. 45Ca-overlay방법에 의한 칼슘이온결합단백질 검색
• 2. Ca2+-dependent phenyl-sepharose를 사용한 칼슘이온결합단백질의 검색
• 3. 19-kDa mCaBP5의 생화학적 특성
• Ⅳ. 고찰
• 감사의 말