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        조직 배양법을 이용한 시험관내 면역법

        박성수(Sung-Soo Park),이희래(Hee Lai Lee),서주영(Ju Young Seoh),홍순관(Soon Kwan Hong),한재진(Jae Jin Han),원태희(Taehee Won),배재문(Jae-Moon Bae),신명헌(Myeong Heon Shin),이한주(Han Chu Lee) 대한체질인류학회 1998 대한체질인류학회지 Vol.11 No.1

        조직 및 세포배양법을 이용한 시험관내 연역법의 효능성을 비교 검중하기 위해 편도절제술에서 얻에진 11세 소년의 편도 조직을 균등하게 두 부용으로 나누어 한 부분은l0% Type AB 인혈정이 보강된 RPMI 1640 배양액에 37 ℃ 세포배양기에서 또 한 부분은10% Type AB 인혈정이 보강된 Waymouth MB 752/l 배양액에 37℃조직 배양기에서95% O2/5% CO2 를 공급하며 배양하였다. 배양 1 시간 뒤 50 μ g/ml KLH 및 lOO μg/ml LFS 를 투여하여 연역을 시킨 뒤 Flowcytonletry 를 이용하여 CE23 의 발현정도, 생산된 장체의 생산 시기, 생산 량 항셰 아영 빛 지속정도를 ELISA 벚 western blot 을 이용하여 비교한 경과 조직배양군에서 항원 투여 3 시간 후 CD μ이 세포배양에 비해 먼저 발현되어 더 오래 지됩을 확인할 수 있었다 또한 IgG 형의KLH 빛 LPS 에 대한 특정 항제가 생산됨을 증명하여 향후 시험관내 연역법의 상용화 가능성을 증명할 수 있었다

      • 폐흡충 감염 마우스에 rIFN-γ 처치시 혈청내 IgE 및 말초혈액내 호산구수에 미치는 영향

        신명헌 梨花女子大學校 醫科大學 醫科學硏究所 1997 EMJ (Ewha medical journal) Vol.20 No.1

        Objective : Elevated serum lgE and pheripheral blood eosinophilia are immunologic hallmark in helminthic infections. Recently, these responses are known to be regulated by Th2-specific cytokine IL-4 and IL-5, respectively. And also, the antagonistic effects of IFN-y on Th2 cell proliferation were shown in vitro. However, few studies on the effect of IFN-y on Th2 cytokine responses in Paragonimus westermani infection are reported, In this study, effects of rIFN-y on serum lgE production and the number of pheripheral blood eosinophils in mice infected with P.westermani were examined. Methods : 5-6week old male BALB/c mice treated with IFN-y were divided into 3 groups. All the mice were inoculated orally with 20 metacercariae of P.westermani. GroupⅠmice(0-14days) were treated intraperitoneally with 2×10^3 unit of rIFN-h at daily intervals from the time of the infection to 4th day infection, group Ⅱ mice(5-14 days) were treated with rIFN-y from the 5th to the 14th day of infection and group Ⅲ mice(8-14 days) were treated from the 8th to the 14th of infection. Total serum lgE and the number of pheripheral blood eosinophils were examined in infected mice treated with rIFN-y. Results : The serum lgE levels in groupⅠand Ⅱ were decreased compared with those of infected mice with no treatment with rIFN-y, but not significantly. The number of pheripheral blood eosinophils in groupⅠand Ⅱ were decreased compared with those of infected mice with no treatment with rIFN-y, especially significant(p<0.05) reduction was shown in groupⅠ. However, the serum lgE levels and number of pheripheral blood eosinophils in group Ⅲ were similar to those of infected mice with no treatment with rIFN-y. Conclusion : These results suggest that IFN-y decreases Th2 cytokine response in P.westermani-infected mice. However, IFN-y treatment has less of an effect once the production of Th2-associated cytokines has become established.

      • 폐흡충(Paragonimus Westermani) 감염 마우스에 있어 비장 B 세포표면의 CD23(FcεRII) 항원의 발현

        신명헌 梨花女子大學校 醫科大學 醫科學硏究所 1996 EMJ (Ewha medical journal) Vol.19 No.4

        목 적: 윤충 감염시 가장 특징적인 면역반응인 혈청내 lgE의 생산에는 CD23(Fc_eRⅡ) 항원의 발현과 밀접한 관계가있을 것으로 생각되나 이에 대해서는 감염 기생충의 종류에 따라 다른 결과를 보이고 있다. 따라서 이 연구에서는 조직 기생충인 폐흡층을 마우스에 감염시킨 후 비장B 세포표면에 CD23(Fc_eRⅡ) 항원의 발현을 측정하여 폐흡충 감염마우스에 있어 증가되는 혈청내 lgE 생산에 CD23 항원의 역할을 알아보고자 하였다. 방 법: 폐흡충의 제2중간숙주인 참가재에서 분리한 폐흡충 피낭유충을 4~6주령의 BALB/c 마우스에 한 마리당 20개씩 경구 감염시킨 후 감염 시기별로(0,2,3,4,6주)로 마우스의 비장으로부터 단핵세포를 분리한 후 B 세포표면의 DB23항원의 발현을 유세포분석기로 측정하였다. 또한 정상 마우스로부터 분리한 비장세포에 폐흡충 피낭유충의 분비-배설물을 첨가한 후 6시간 및 24시간 배양한 후 B 세포표면의 CD23항원의 발현을 측정하였다. 결 과: 폐흡충 감염 마우스의 비장 B 림프구중 CD23 항원 양성 세포율은 감염 2주에 43.4±7.52%로 대조군의 26.1±7.52%에 비해 유희한 수준으로 증가되기 시작하여 감염 3주에도 44.4±2.99%로 대조군의 33.6±2.91에 비해 유의한 수준(p<0.05)으로 증가되었다. 또한 감염 4주 및 6주의 CD23 항원 양성 세포율도 각각 35.7±3.29% 및 38.9±4.96%로 대조군의 30.7±5.94% 및 31.1±3.77%에 비해 증가되었으나 통계적으로 유의한 차이는 보이지 않았다. 정상 마우스의 비장으로부터 분리한 단핵세포에 폐흡충 피낭유충의 분비-배설물을 첨가하였을 때 배양 6시간 후의 B 림프구중 CD23 양성 세포율은 24.8±2.78%로서 배지만을 첨가한 대조군의 18.6±3.01%에 비해 약간 증가되었으나 유의한 차이는 보이지 않았다. 그러나 배양 24시간 후의 CD23 양성세포율은 60.1±7.54%로서 대조군의 17.8±1.54%에 비해 유의한 수준(p<0.05)으로 증가되었다. 결 론:폐흡충 감염 마우스에 있어 혈청내 lgE의 생산은 CD23 발현과 밀접한 관계가 있으며 이때 폐흡충 유충의 분비-배설물이 비장 B 세포표면의 CD23 항원의 발현을 증가시키는 것으로 생각된다. Object : Elevation of serum lgE is the most characteristic immune response in helminthic infections. Recently, expression of CD23(Fc_eRⅡ) on B lymphocytes play a major role in lgE production in allergic diseases. However, the mechanisms causing increased lgE production during helminthic infections are poorly understood. In the present study, the expression of CD 23 on splenic B lymphocytes during the course of infection with paragonimus westermani was examined. Methods : Female, 4-6-week old BALB/c mice were inoculated orally with 20 metacercariae of P.westermani. For detection of CD23 positive B lymphocytes by flow cytometry, splenocytes from infected mice and non-infected age matched controls were stained with FITC-conjugatedrat anti-mouse DB23 and PE-conjugated rat anti-mouse CD45R/B220 mono-clonal antibody. And also, to observe the effect of metacercarial ESP on the expression of CD23 antigen, splenocytes from non-infected mice were incubated in the presence of ESP at 37℃ for 6 h and 24 h. Results : The frequency of CD23 positive B lymphocytes of infected mice was increased significantly(p<0.05) at two and three weeks after infection(43.4±7.52% and 44.4±2.99%, respectively) and persisted the higher levels at four and six weeks after infection. Expression of CD23 antigen of cultured splenocytes from non-infected mice in the presence of metacercarial ESP was increased significantly(p<0.05) at 24 h after incubation(60.1±7.54%). Conclusion : These results suggest that the expression of CD23 antigen induced by metacercarial ESP might play a important role in serum lgE production in mice infected with P.westermani. Object : Elevation of serum IgE is the most characteristic immune response in helminthic infections. Recently, expression of CD23(Fc_eRⅡ) on B lymphocytes play a major role in IgE production in allergic diseases. However, the mechanisms causing increased IgE production during helminthic infection are pooly understood. In the present study, the expression of CD 23 on splenic B lymphocytes during the course of infection with Paragonimus westermani was examined. Methods : Female, 4-6 week old BALB/c mice were inoculated orally with 20 metacercariae pf P. westermani. For detection of CD23 positive B lymphocytes by flow cytometry, splenocytes from infected mice and non-infected age matched controls were strained with FITC-conjugated rat anti-mouse CD23 and PE-conjugated rat anti-mouse CD45R/B220 mono-clonal antibody. And also, to observe the effect of metacercarial ESP on the expression of CD23 antigen, splenocytes from non-infected mice were incubated in the presence of ESP at 37℃ for 6h and 24h. Results : The frequency of CD23 positive B lymphocytes of infected mice was increased significantly(P<0.05) at two and three weeks after infection(43.4±7.52% and 44.4±2.99%, respectively) and persisted the higher levels at four and six weeks after infection. Expression of CD23 antigen of cultured splenocytes from non-infected mice in the presence of metacercarial ESP was increased significantly(p<0.05) at 24h after incubation (60.1±7.54%). Conclusion : These results suggest that the expression of CD23 antigen induced by metacercarial ESP might play a important role in serum IgE production in mice infected with P.westermani.

      • Antibody Induced Capping of Surface Antigens in Trichomonas vaginalis

        Ryu,Jae-Sook,Shin,Myeong-Heon,Min,Duk-Young INSTITUTE OF TROPICAL MEDICINE YONSEI UNIVERSITY 1992 YONSEI REPORTS ON TROPICAL MEDICINE Vol.23 No.1

        기생충의 숙주에 감염시 여러 가지 방법으로 숙주의 면역반응을 회피(escape)한다고 한다. 이질아메바, 트라파노조마, Naegleria fowleri 등에서는 숙주 면역반응의 회피기전의 일환으로 충체 표면항원(surface antigen)을 외부로 탈락시키거나 재생산(renewal)함이 보고된 바 있다. 이 연구에서는 질트리코모나스에서 표면항원의 capping(antigen redistribution)이 일어나는지 관찰하였다. Log-stage의 살아있는 충제(2×10(6))를 질트리고모나스로 면역시킬 토끼혈청(1:5)과 4℃ 30분간 반응시킨 후 fluorescein conjugated goat anit-rabbit IgG(1:30)와 4℃에서 30분 반응시키고 세척 후 즉시 1% paraformaldehyde로 고정하거나 37℃에서 30분내지 2시간 방치한 후 고정하고 형광현미경으로 관찰하였다. 또한 대사억제제인 sodium azide와 미세소관(microtubule)합성 억제제인 vincristine sulfate와 colcemid를 혈청 및 형광항체에 넣어 capping에 영향을 미치는지 관찰하였다. 충체를 4℃ 또는 25℃에서 30분 내지 2시간 반응시킨 군에서는 20% 정도의 copping의 관찰되는데 비해 TSP-1배지에서 37℃, 2시간 반응시켰을 때 60∼70%가 일어났다. 대개 polar capping이었는데, 일부의 충체는 형광물질을 완전히 벗어버려 충체에는 형광이 없었다. Sodium azide의 여러농도(0,025M-0.5M)에서 capping이 현저히 저하되었다. 그러나, vincristine sulfate와 colcemid(5-0.25 g/ml)는 capping에 별 영향을 미치지 않았다. 이상의 결과로 질트리코모나스는 표면으로부터 항체를 제거하여 숙주의 면역반응에 저항하는 것으로 사료되며 이 반응은 반응온도 및 신진대사에 의존되었다. The capping phenomenon, a parasite's escape mechanism from host's immune response by removal of the antibody bound to antigens on parasite's surface membrane, was observed in Trichomonas vaginalis in vitro. An isolated strain of T. vaginalis (HY-9) was incubated with rabbit anti-serum at 4℃, 25℃ and 37℃ for 30 minutes, 1 hour and 1 hours, and then treated with fluorescein labelled anti-rabbit IgG. The cell-capping process was observed obviously under fluorescein microscope, and was temperature dependent. Sodium azide, a metabolic inhibitor, inhibited the capping of T. vaginalis, whereas colchicine and vicristine, the microtubule synthesis inhibitors, did not affect the capping formation. These results suggest that antibody-induced membrane antigen modulation of T. vaginalis may have a role to host's immune response.

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