Identification of the Interaction between Insulin-like Growth Factor Binding Protein-4 (IGFBP-4) and Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein L (hnRNP L)

Mieyoung Choi(최미영) 한국생명과학회 2013 생명과학회지 Vol.23 No.11

hnRNP L은 pre-mRNA에 결합하는 단백질들 중에서 핵심이 되는 단백질이다. hnRNP L은 양이 아주 많은 핵 단백질로서 핵과 세포질을 왕복하는 특성을 지니고 있다. 이 단백질은 염색질 변형(chromatin modification), pre-mRNA 스플라이싱, 인트론이 없는 유전자들에서 유래한 mRNA들의 세포질로의 반출(export), IRES-매개성 번역, mRNA의 안정성 조절, 정자형성과정 등, 세포 내의 여러 가지 과정에 관여하고 있는 것으로 알려져 있다. 이 논문에서는 hnRNP L과 결합하는 세포 내 단백질을 찾아내기 위하여 사람의 간세포 cDNA library를 사용하여 이스트 two-hybrid 탐색 실험을 수행하였다. 그 결과 사람의 간세포에서 IGFBP-4가 hnRNP L과 상호결합하는 새로운 파트너라는 것을 발견하였다. 본 연구를 통하여 hnRNP L이 이스트 two-hybrid 시스템에서 IGFBP-4와 특이적으로 상호 결합한다는 것을 처음으로 발견하였다. 본 연구에서는 또한 이스트 two-hybrid 시스템에서 hnRNP L이 IGFBP-4와 상호결합한다는 점을 in vitro pull-down 실험을 통하여 재확인하였다. Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L (hnRNP L) is a major pre-mRNA binding protein and it is an abundant nuclear protein that shuttles between the nucleus and the cytoplasm. hnRNP L is known to be related to many cellular processes, including chromatin modification, pre-mRNA splicing, mRNA export of intronless genes, internal ribosomal entry site (IRES)-mediated translation, mRNA stability, and spermatogenesis. In order to identify the cellular proteins interacting with hnRNP L, this study performed a yeast two-hybrid screening, using a human liver cDNA library. The study identified insulin-like growth factor binding protein-4 (IGFBP-4) as a novel interaction partner of hnRNP L in the human liver. It then discovered, for the first time, that hnRNP L interacts specifically with IGFBP-4 in a yeast two-hybrid system. The authenticity of this two-hybrid interaction of hnRNP L and IGFBP-4 was confirmed by an in vitro pull-down assay.

Involvement of Akt in naphthoquinone analog-induced apoptosis in HL-60 cells

Kim MieYoung,Chun YoungJin,Kim HaeJong,Mun JungYee,Kang SeungKoo 大韓藥學會 2002 大韓藥學會 總會 및 學術大會 Vol.2002 No.2

Identification of the Gene Encoding N4SSB

Choi, Mieyoung 선문대학교 자연과학대학 1998 자연과학대학 논문집 Vol.1 No.-

Escherichia coli (E, coli) K12 균주를 숙주세포로 삼는 박테리오파아지인 N4는 single-stranded DNA에 결합하는 단백질인 N4SSB (bacteriophage N4-coded single-stranded DNA -binding protein) 단백질을 만든다. N4SSB 단백질은 N4 DNA replication 뿐만 아니라 late transcription에도 필요한 여러 가지 기능을 가진 단백질이다. N4 late transcription은 숙주세포인 E, coli의 E σ^(70) RNA polymerase에 의해서 수행이 되나 N4SSB 단백질을 반드시 필요로 하기 때문에 N4SSB 단백질이 생성될 때까지는 N4 late promoter로부터 RNA 합성이 일어나지 않는다. 본 연구에 서는 N4SSB의 N4 DNA replication과 late transcription의 activation 기작을 연구하기 위한 기반을 마련하기 위하여 N4SSB 유전자를 포함하는 DNA 단편을 찾아내고 cloning 하였다. The bacteriophage N4 encodes single-stranded DNA-binding protein (N4SSB), which nonspecifically bind to single-stranded DNA. N4SSB protein is essential for N4 DNA replication and is also required for N4 late transcription, which is catalyzed Escherichia coli σ^(70) RNA polyrnerase. As a first step to study the function of N4SSB on activating N4 DNA polymerase and E. coli σ^(70) RNA polymerase at N4 late promoter, we identified and cloned the gene encoding N4SSB.

p38 MAP kinase is involved in ceramide-induced apoptosis in HL-60 cells

Kim MieYoung,Chun YoungJin,Kim HaeJong 大韓藥學會 2001 大韓藥學會 總會 및 學術大會 Vol.2001 No.2

The Carboxy-Terminal Domain of N4SSB is not Required for Single-Stranded DNA-Binding But is Essential for Cooperativity

Choi, Mieyoung 선문대학교 자연과학대학 1999 자연과학대학 논문집 Vol.2 No.-

박테리오파아지 N4는 single-stranded DNA에 결합하는 단백질인 N4SSB (bacteriophage N4-coded single-stranded DNA-binding protein) 단백질을 만든다. N4SSB 단백질은 N4 DNA replication 뿐만 아니라 N4 DNA recombination과 N4 late transcription에도 반드시 필요한 여러 가지 기능을 하는 단백질이다. 본 연구에서는 N4SSB 단백질이 N4 DNA replication과 N4 DNA recombination 그리고 N4 late transcription을 활성화시키는 기작을 이해하기 위하여 돌연변이 활성을 조사를 하였다. 그 결과 N4SSB 단백질의 single-stranded DNA에 대한 결합력과 cooperativity에 대한 활성을 조사를 하였다. 그 결과 N4BBS 단백질의 single-stranded DNA에 결합하는데 필요한 부위는 cooperativity에 필요한 부위와 분리되어 있음을 알 수 있었다. 그리고 N4SSB와 다른 여러 가지 세포 내 단백질들과 상호작용하는데 필요한 부위도 single-stranded DNA에 결합하는데 필요한 부위와 분리되어 있을 것으로 사료된다. The single-stranded DNA-binding protein coded by coliphage N4 (N4SSB) which nonspecifically bind to single-stranded DNA, is required for viral replication, recombination and activation of viral late transcription. As a first step to understand the mechanism of N4SSB on activating N4 DNA polymerase, increasing N4 DNA recombination, and activating E. coli RNA polymerase at N4 late promoter, we examined whether the single-stranded DNA-binding domain of N4SSB can be separated from the domain important for protein-protein interaction. The result suggests that the carboxy-terminal domain of N4SSB is not required for single-stranded DNA-binding but is essential for cooperative binding.

인간 hnRNP A1 단백질에 포함된 RGG 상자의 기능 분석

최미영(Mieyoung Choi) 한국산학기술학회 2017 한국산학기술학회논문지 Vol.18 No.12

본 연구는 hnRNP A1 단백질에 포함되어 있는 RGG 상자가 이 단백질의 세포내 위치에 미치는 영향 및 이 단백질의 안정화에 미치는 영향을 분석하는 것을 목적으로 하며 2014년 10월부터 약 3년 동안 수행되었다. 이를 위해 먼저, RGG상자 내의 6개의 아르기닌을 라이신으로 돌연변이를 만든 다음 pcDNA1-HA-hnRNP A1(6R/K)를 재조합하였다. 다음, 이 플라스미드 DNA를 HeLa 세포에 형질주입하여 HA-hnRNP A1(6R/K) 단백질의 세포내 위치에 미치는 영향을 면역형광현미경법으로 분석하였다. 그 결과 hnRNP A1(6R/K) 단백질은 (wt 단백질처럼 핵에 위치하지 못하고) 핵과 세포질 모두에 퍼져 있는 것을 확인하였다. hnRNP A1(6R/K)의 안정성을 조사하기 위해서는 pcDNA1-HA-hnRNP A1(6R/K)를 HeLa 세포에 형질주입시킨 다음 발현된 단백질을 웨스턴 블랏 실험으로 분석하였는데, 그 결과 HA-hnRNP A1(6R/K)는 (잘려서) 크기가 작아 진 것을 확인할 수 있었다. 이 결과들로부터 HA-hnRNP A1(6R/K)가 핵과 세포질 모두에 퍼져 있는 것은 6R/K 돌연변이가 hnRNP A1의 핵 위치 능력에 영향을 미쳤기 때문이 아니라 6R/K 돌연변이가 일어난 부위 또는 그 부근이 절단되어 hnRNP A1의 핵 위치 신호(nuclear localization singal)인 M9 도메인이 들어있는 C-말단 부위를 잃었기 때문이라는 점을 확인 할 수 있었다. 본 연구의 결과들은 hnRNP A1에 있는 RGG 상자의 아르기닌이 hnRNP A1의 안정성에 중요한 역할을 한다는 것을 제시한다. 세균에서 발현시켜서 정제된 hnRNP A1(6R/K)의 RNA-결합 능력에 대한 영향 분석은 추후 과제로 남겨둔다. This study analyzed the effects of RGG box of hnRNP A1 on its subcellular localization and stabilization of hnRNP A1 over a three year period from October 2014. First, a 6R/K mutation in RGG box was generated, and pcDNA1-HA-hnRNP A1(6R/K) was constructed. The subcellular localization of hnRNP A1(6R/K) from the HeLa cells transfected with this plasmid DNA was analyzed by immunofluorescence microscopy. HA-hnRNP A1(6R/K) was found to exhibit nuclear and cytoplasmic fluorescence. The stability of hnRNP A1(6R/K) was checked by Western blot analysis using the expressed protein from the HeLa cells transfected with the pcDNA1 HA-hnRNP A1(6R/K). The results show that HA-hnRNP A1(6R/K) has a smaller size. These confirm that HA-hnRNP A1(6R/K) is localized both in the nuclear and cytoplasm, not because 6R/K mutation affects the nuclear localization of hnRNP A1, but because 6R/K mutation causes hnRNP A1(6R/K) to cleave at the mutation or near the mutation site. The cleaved protein fragment, which lacks the M9 domain (i.e. nuclear localization signal of hnRNP A1), did not exhibit nuclear fluorescence. This suggests that the arginines of RGG box in hnRNP A1 play an important role in stabilizing hnRNP A1. An analysis of the RNA-binding ability of hnRNP A1(6R/K) expressed and purified from bacteria will be a subsequent research project.

RNA에 결합하는 능력을 상실한 mutant hnRNP K단백질이 핵과 세포질을 왕복하는 활성에 미치는 영향

최미영 선문대학교 자연과학대학 2001 자연과학논총 Vol.4 No.-

Rotating flow of a stratified fluid contained in a circular cylinder with unstable temperature gradient imposed on the side wall of it has been numerically studied. The temperatures at the endwall disks are constant. The top disk of the container is colder than that of the bottom disk, as much as the temperature difference nΔT, (0≤n≤3). Flows in the vessel are driven by an impulsive rotation of the hot bottom disk with respect to the central axis of the cylinder. Flow details have been acquired. For this flow, the principal balance in the interior core is characterized by a relationship between the radial temperature gradient and the vertical shear in the azimuthal velocity. As the buoyancy effect becomes appreciable, larger portions of the meridional fluid transport are longcircuit from the bottom disk to the interior region via the side wall.

N4SSB 단백질의 C-말단기의 7개의 아미노산이 N4SSB 단백질의 in vivo 활성에 미치는 영향

최미영,Choi, Mieyoung 한국미생물학회 1998 미생물학회지 Vol.34 No.4

Bacteriophage N4, a lytic phage specific for Esherichia coli K12 strain encodes single-stranded DNA-binding protein, N4SSB (bacteriophage N4-coded single-stranded DNA-binding protein). N4SSB protein is originally identified as a protein required for N4 DNA replication. N4SSB protein is also required for N4 late transcription, which is catalyzed by E. coli ${\sigma}^{70}$ RNA polymerase. N4 late transcription does not occur until N4SSB protein is synthesized. Recently it is reported that N4SSB protein is essential for N4 DNA recombination. Therefore N 4SSB protein is a multifunctional protein required for N4 DNA replication, late transcription, and N4 DNA recombination. In this study, a variety of mutant N4SSB proteins containing internal deletions or substitutions were constructed to define and characterize domains important for N4 DNA replication, late transcription, and N4 DNA recombination. Test for the ill vivo activity of these mutant N4SSBs for N4 DNA replication, late transcription, and N4 DNA recombination was examined. The results suggest that C-terminal 7 amino acid residues are important for the activity of N4SSB. Three lysine residues, which are contained in this region play important roles on N4SSB activity. Esherichia coli(E. coli) K12 균주를 숙주세포로 삼는 박테리오파아지인 N4는 single-stranded DNA에 결합하는 단백질인 N4SSB(bacteriophage N4-coded single-stranded DNA-binding protein) 단백질을 만든다. N4SSB 단백질은 N4 DNA replication 뿐만 아니라 late transcription과 N4 DNA recombination에도 필요한 여러 가지 기능을 가진 단백질이다. N4 late transcription은 숙주세포인 E. coli의 $E{\sigma}^{70}$ RNA polymerase에 의해서 수행이 되나 N4SSB 단백질을 반드시 필요로 하기 때문에 N4SSB 단백질이 생성될 때까지는 N4 late promoter로부터 RNA 합성이 일어나지 않는다. 본 연구에서는 N4SSB의 N4 DNA replication과 late transcription, 그리고 N4 DNA recombination에 필요한 영역(domain)을 알아내기 위해서 여러 가지 돌연변이형 N4SSB 단백질을 만들어 N4 DNA replication과 late transcription, 그리고 N4 DNA recombination의 3가지 작용에 대한 in vivo 활성을 조사 분석하였다. 그 결과 N4SSB 단백질의 C-말단기에 있는 7개의 아미노산이 N4SSB 단백질의 활성에 중요하다는 것을 알 수 있었다. 특히 C-말단기의 7개의 아미노산에는 세 개의 lysine이 포함되어 있는데 이 lysine이 N4SSB 단백질의 활성에 중요한 역할을 한다는 것이 제시되었다.

POTENT INHIBITION OF HUMAN CYTOCHROME P450 1 ENZYMES BY DIMETHOXYPHENYLVINYL THIOPHENE

Chun YoungJin,Kim MieYoung,Kim SangHee,Lee SangKwang 大韓藥學會 2002 大韓藥學會 總會 및 學術大會 Vol.2002 No.2

Effects of C²-Ceramide on Cell Cycle Alteration and C-fos Gene Expression in U-937 Cells

Kim, Keuncheol,Kim, Mieyoung,Choi, Kyunghee Korean Society of Molecular Biology 1994 Molecules and cells Vol.4 No.4