A pattern of cell death induced by 40 kHz ultrasound in yeast cell model

김지욱,공희정,김영환,강광일,Kim, Ji Wook,Kong, Hee Jeong,Kim, Young H.,Kang, Kwang Il The Acoustical Society of Korea 2017 韓國音響學會誌 Vol.36 No.3

초음파는 세포사멸을 포함하여 의학 및 생물학분야에 널리 응용되고 있으나 그 정확한 기작에 대해선 논쟁의 여지가 있다. 본 연구에서는 40 kH 초음파 조사시스템을 단세포 효모에 적합하게 개발하고 세포사멸 유도시 40 kH 초음파의 생물학적 현상을 살펴보았다. 아이오딘화 칼륨 선량 측정법을 이용하여 1.5 ml 실험튜브에 40 kH 초음파 조사 시스템의 최적 조건을 맞추어 세포사멸을 시간 의존적 방식으로 연구하였고 초음파 조사과정동안 온열효과와는 별개로 세포 사멸이 관찰되었다. 40 kH 초음파와 과산화수소의 동시 처리는 세포사멸에 상조적인 효과가 관찰되어 활성산소가 40 kH 초음파사멸에 관련이 있었다. 그러나 활성산소 저해제, NAC(N-acetyl-Lcysteine)는 초음파에 의한 세포사멸에 약한 영향만을 미쳤고 다른 세포사멸, 괴사억제제[글리실리진(glycyrrhizin) 또는 zVAD-fmk] 역시도 세포사멸을 완전히 억제하진 못하였다. 본 연구를 통하여 40 kH 초음파에 의한 세포사멸에는 온열효과나 활성산소만으로 사멸이 유도되지는 않는 것으로 보인다. Ultrasound has been widely used for biological and medical applications including induction of cell death, but a precise mechanism of induced cell death by ultrasound is controversial. In this study, an irradiation system with 40 kHz ultrasound was developed for a suitable cell death test of a representative unicellular organism, yeast, and used to study the biological effect of ultrasound on inducing cell death. Potassium Iodide (KI) dosimetry was used to devise an optimal system that successfully delivers 40 kHz ultrasound and produces reactive oxygen species in a 1.5 ml Eppendorf tube. Cell death was observed in an ultrasound transmission time-dependent fashion in this system. Thermal effect during irradiation was not observable in ultrasound induced cell death. Co-treatment of 40 kHz ultrasound and hydrogen peroxide showed a synergistic effect in inducing cell death. This finding suggests that 40 kHz ultrasound is related to reactive oxygen species formation. However, NAC (N-acetyl-L-cysteine) oxygen scavenger slightly inhibited the cell death by 40 kHz ultrasound. It was also found that 40 kHz ultrasound induced cell death was slightly inhibited by inhibitors of necrosis or apoptosis (glycyrrhizin or zVAD-fmk). This study suggests that cell death induced by 40 kHz ultrasound may not be exclusively related to reactive oxygen species formation and thermal effects in irradiated yeast cells.

참담치(Mytilus coruscus) 혈구(hemocyte) 유래 항균 펩타이드 mytilin B의 정제 및 특성 분석

이민정(Min Jeong Lee),오륜경(Ryunkyoung Oh),김영옥(Young-Ok Kim),남보혜(Bo-Hye Nam),공희정(Hee Jeong Kong),김주원(Joo-Won Kim),박중연(Jung Youn Park),서정길(Jung-Kil Seo),김동균(Dong-Gyun Kim) 한국생명과학회 2018 생명과학회지 Vol.28 No.11

참담치(Mytilus coruscus)의 혈구 유래의 항균 펩타이드를 역상 column들을 사용한 reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC)로 분리 및 정제하였다. 정제된 펩타이드는 matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrophotometer (MALDI-TOF/MS)를 통해 분자량이 4041.866 Da으로 밝혀졌으며 Edman degradation법을 통해 25개의 N-말단 서열을 확보하였다. 이는 참담치의 mytilin B precursor 와 100%, mytilin 8 precursor, mytilin 4 precursor와 96% 일치하였다. 또한 103개의 아미노산 서열을 코딩하고 있는 312 bp의 open-reading frame (ORF)을 밝혔으며 이는 참담치의 mytilin B precursor와 100% 일치하였다. 밝혀진 분자량과 아미노산 서열을 바탕으로 C-말단 alanine 잔기의 유무에 따라 2개의 펩타이드를 합성하였으며 이는 mytilin B1과 B2라고 명명하였다. 이들은 그람 양성 균주 Bacillus cereus, Streptococcus parauberis [minimal effective concentrations, MECs 41.6-89.7 μg/ml], 그람 음성 균주 Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Providencia stuartii, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio ichthyoenteri [MECs 7.4-39.5 μg/ml] 그리고 진균류인 Candida albicans [MECs 26.0-31.8 μg/ml]에 항균활성을 나타냈다. 본 연구 결과, 참담치 혈구유래 mytilin B1과 mytilin B2는 넓은 항균 스펙트럼을 가지고 열과 염분에 대한 안정성이 높으며 용혈현상과 세포독성은 나타나지 않았다. 이러한 특성은 기능성 사료첨가제 및 항생제 대체제로써 충분히 안정적인 역할을 할 뿐만 아니라 추후 mytilin의 구조적 중요성과 참담치의 면역학적 측면에서 다양한 자료를 제시할 것으로 사료된다. We purified an antimicrobial peptide from the acidified hemocyte extract of Mytilus coruscus by C18 reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). The peptide was 4041.866 Da based on matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrophotometer (MALDITOF/MS) and the 25 amino acids of the N-terminus sequence were identified. Comparison of this sequence of the purified peptide with the N-terminus sequences of other antimicrobial peptides revealed 100% identity with the mytilin B precursor of Mytilus coruscus. We also identified a 312 bp open-reading frame (ORF) encoding 103 amino acids based on the obtained amino acid residues. The nucleotide sequence of this ORF and the amino acid sequence also revealed 100% identity with the mytilin B precursor of Mytilus coruscus. We synthesized two antimicrobial peptides with an alanine residue in the C-terminus, and designated them mytilin B1 and B2. These two antimicrobial peptides showed antimicrobial activity against gram-positive bacteria, including Bacillus cereus and Streptococcus parauberis (minimal effective concentration, MECs 41.6-89.7 μg/ml), gram-negative bacteria, including Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Providencia stuartii, Pseudomonas aeruginosa, and Vibrio ichthyoenteri (MECs 7.4-39.5 μg/ml), and the fungus Candida albicans (MECs 26.0-31.8 μg/ml). This antimicrobial activity was stable under heat and salt conditions. Furthermore, the peptides did not exhibit significant hemolytic activity or cytotoxic effects. These results suggest that mytilin B could be applied as alternative antibiotic agent, and they add to the understanding of the innate immunity of hard-shelled mussels.

넙치(Paralichthys olivaceus) 혈청단백질의 이차원전기영동분석 조건확립

한윤희,남보혜,감영옥,김우진,공희정,이상준,최태진,Han, Yoon Hee,Nam, Bo-Hye,Kim, Young-Ok,Kim, Woo Jin,Kong, Hee Jeong,Lee, Sang Jun,Choi, Tae-Jin 한국해양바이오학회 2007 한국해양바이오학회지 Vol.2 No.1

Flounder is one of the major aquacultured fish and of an economically important item in Korean fisheries. Recently, there are trends of research worldwide that aim to analyze and characterize a whole genome or a whole proteome of interesting species. The data are utilized for the understanding and development of preventive and curative technologies for the serious diseases. However, there are very limited information of proteome for marine organisms, we optimized first the conditions for two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE) with serum form a marine fish, flounder (Paralichthys olivaceus). A pre-treatment of serum and an optimization of protein concentration analyzed were surveyed for enhancing the separation for proteins. A statistical analysis was performed on the overall 1,820 protein spots to overcome the variability among individual fishes. 넙치의 혈청 단백질체를 연구하기 위해 본 연구에서는 이차원전기영동 분석 시의 기본조건을 확립하였다. 넙치의 혈청단백질을 이차원전기영동 법으로 분석하기 위해서는 TCA 침전을 이용하여 혈청 내에 고농도로 존재하는 이온물질을 제거하는 전처리과 정이 반드시 요구되었다. 또한 분석 단백질의 농도는 $30{\mu}g$이 적당하였다. 넙치 10개체의 혈청단백질을 이용하여 총 51회의 이차원전기영동을 수행한 결과 1,8207개의 단백질로 이루어진 넙치 혈청단백질 표준 지도를 작성할 수 있었다.

PT-PCR 法에 의한 Infectious Pancreatic Necrosis Virus의 早期診斷

강호성(Ho Sung Kang),공희정(Hee Jeong Kong),구현나(Hyun Na Koo),박정우(Jeong Woo Park),손상규(Sang Kyu Sohn),박명애(Myung Ae Park),김진우(Jin Woo Kim),김한도(Han Do Kim) 한국수산과학회 양식분과 1997 韓國養殖學會誌 Vol.10 No.2

지질다당질로 자극한 넙치 백혈구의 발현유전자의 분석

남보혜,문지영,김영옥,김우진,공희정,이상준,최태진,Nam, Bo-Hye,Moon, Ji-Young,Kim, Young-Ok,Kim, Woo Jin,Kong, Hee Jeong,Lee, Sang-Jun,Choi, Tae-Jin 한국해양바이오학회 2007 한국해양바이오학회지 Vol.2 No.3

넙치의 생체방어 및 면역관련 유전자의 대량확보를 위하여, 지질다당질로 자극한 넙치의 말초백혈구 cDNA library를 suppression subtractive hybridization 방법으로 제작하여 발현유전자의 발현 양상 및 특성을 분석하였다. 총 470개의 SSH 클론 중 기존에 밝혀진 유전자와 상동성을 보인 218개의 클론을 분석한 결과, 대표적인 전염증사이토카인 IL-1의 유인수용체인 IL-1RII가 34번의 가장 높은 빈도로 발현되었으며, IL-$1{\beta}$가 14번의 높은 발현 빈도를 보였다. 그 중 펩티도글리칸 인식 단백질및 혈관활성 장 펩타이드 유전자는 어류에서는 처음으로 보고되는 것으로, 지질다당질로 자극한 넙치의 말초백혈구 SSH cDNA library는 다양한 생체방어 및 면역관련 유전자를 포함하고 있었다. Suppression subtractive hybridization (SSH) was performed to construct an cDNA library of olive flounder Paralichthys olivaceus peripheral blood leukocytes (PBL) stimulated with lipopolysaccharide (LPS). Total 470 clones were randomly selected and sequenced, 214 out of 470 sequences showed identities with known genes and 252 sequences were unknown genes. Among the 218 known genes, 34 sequences were found to be homologous to IL-1RII gene, and 14 sequences were identified as IL-$1{\beta}$. RT-PCR analysis showed that IL-$1{\beta}$ mRNA was induced 1h after LPS-stimulation, and IL-1RII was increased from 3h after stimulation, indicating that most of SSH clones are associated with inflammatory responses in fish, and this SSH cDNA library would be useful to identify bio-defense and immuno-related genes in fish.

The Study of Genetic Diversity and Population Structure of the Korean Fleshy Shrimp, Fenneropenaeus chinensis, Using Newly Developed Microsatellite Markers

Eun-Ha Shin(신은하),Hee Jeong Kong(공희정),Bo-Hye Nam(남보혜),Young-Ok Kim(김영옥),Bong-Seok Kim(김봉석),Dong-Gyun Kim(김동균),Cheul Min An(안철민),Hyungtaek Jung(정형택),Woo-Jin Kim(김우진) 한국생명과학회 2015 생명과학회지 Vol.25 No.12

대하(Fenneropenaeus chinensis)는 우리나라에서 경제적으로 가장 중요한 양식생물 중 하나이다. 그러나 대하의 유전적 특성에 대한 연구는 전무하다. 본 연구에서는 새로 개발된 13개 미세위성체 유전자좌를 이용하여 우리나라에 서식하는 4개 지역 대하의 유전 다양성 및 집단간 관련성을 분석하였다. 평균 대립유전자 richness =16.87, 평균 이형접합률 =0.845를 보여 유전 다양성은 비교적 높은 수준을 보였다. 52개 유전좌중에서 13개 유전자좌가 집단간 분석에서 Hardy–Weinberg 평형에서 유의적인 차이로 벗어났다. Neighbor-joining, principal coordinate 및 molecular variance 분석 결과로 우리나라 대하 집단은 3개 집단(나라도, 천수만, 법성포 및 채석포)으로 구성되어 있으며, 이 결과는 유전적 거리에 근거한 군집 결과와 일치하였다. 본 연구에서 조사된 유전 다양성 및 분화결과는 앞으로 대하의 지속 가능한 자원관리 및 선발 육종을 통한 유전적 개량에 적용될 수 있을 것이다. The fleshy shrimp, Fenneropenaeus chinensis, is the family of Penaeidae and one of the most economically important marine culture species in Korea. However, its genetic characteristics have never been studied. In this study, a total of 240 wild F. chinensis individuals were collected from four locations as follows: Narodo (NRD, n = 60), Beopseongpo (BSP, n = 60), Chaesukpo (CSP, n = 60), and Cheonsuman (CSM, n = 60). Genetic variability and the relationships among four wild F. chinensis populations were analyzed using 13 newly developed microsatellite loci. Relatively high levels of genetic variability (mean allelic richness = 16.87; mean heterozygosity = 0.845) were found among localities. Among the 52 population loci, 13 showed significant deviation from the Hardy–Weinberg equilibrium. Neighbor-joining, principal coordinate, and molecular variance analyses revealed the presence of three subpopulations (NRD, CSM, BSP and CSP), which was consistent with clustering based on genetic distance. The mean observed heterozygosity values of the NRD, CSM, BSP, and CSP populations were 0.724, 0.821, 0.814, and 0.785 over all loci, respectively. These genetic variability and differentiation results of the four wild populations can be applied for future genetic improvement using selective breeding and to design suitable management guidelines for Korean F. chinensis culture.

참담치(Mytilus coruscus) 혈구(hemocyte)에서 분리한 McSSP-31의 항균 특성 분석

오륜경(Ryunkyoung Oh),이민정(Min Jeong Lee),김영옥(Young-Ok Kim),남보혜(Bo-Hye Nam),공희정(Hee Jeong Kong),김주원(Joo-Won Kim),박중연(Jung-Youn Park),서정길(Jung-Kil Seo),김동균(Dong-Gyun Kim) 한국생명과학회 2017 생명과학회지 Vol.27 No.11

참담치 hemocyte에 존재하는 항균 펩타이드를 역상 HPLC column을 사용하여 분리 및 정제하였다. 정제된 펩타이드는 matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrophotometer (MALDI-TOF/MS) 분석을 통해 분자량이 3330.549 Da이며, edman 분해법을 통해 14개의 N-말단 아미노산 서열을 확보하였다. 분석한 N-말단 서열은 M. californianus의 sperm-specific protein Phi-1과 protamine-like PL-III protein과 각각 93%와 87%의 유사도를 나타냈으며, M. edulis의 sperm-specific protein Phi-1과 87% 일치함을 확인하였다. 또한 openreading frame (ORF)은 306 bp의 길이에 101개의 아미노산을 코딩하고 있음을 밝혔으며, 이는 M. californianus의 sperm-specific protein Phi-1와 93.5% 유사하였다. 분자량과 아미노산 서열에 근거하여 31개 아미노산으로 구성된 펩타이드를 합성하였으며 이는 그람 양성균인 B. subtilis, S. mutans, S. aureus와 그람 음성균인 E. coli, K. pneumoniae, P. mirabilis, P. aeruginosa 그리고 진균류인 C. albicans에 항균 활성을 보였다. 합성한 펩타이드는 항생제 내성균주인 S. aureus CCARM 0203와 S. aureus CCARM 0204에 항균 활성을 보였다. 합성 항균 펩타이드는 넙치 혈장에 대한 용혈현상은 없었고, 세포독성을 확인한 결과 HUVEC cell line에 전혀 독성을 보이지 않았다. 본 연구결과, 참담치의 혈구로부터 분리 및 정제한 sperm-specific protein 유래 항균 펩타이드는 다양한 균주에 항균 활성을 보였고 낮은 세포독성을 가졌으며, 이러한 특성은 본 실험에서 분리한 항균 펩타이드가 항생제 대체재로서 개발 가능성을 제시하고 있다. This study isolated and purified the antimicrobial peptide McSSP-31 from an acidified hemocyte extract of a Mytilus coruscus. The antimicrobial peptide was purified by using a C18 reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC). The peptide was determined to be 3330.549 Da by matrix assisted–laser desorption ionization time-of-flight mass spectrophotometer (MALDI- TOF/MS). The N-terminus of a 14 amino-acid sequence was identified as P-S-P-T-R-R-S-T-S-R-S-K-S-R by Edman degradation method. The acquired sequence showed a 93% similarity with the sperm-specific protein Phi-1, which is from M. californianus. The identified open-reading frame (ORF) of peptide was 306 bp encoding 101 amino acids, which was analyzed by rapid amplification of cDNA ends (RACE), cloning and sequencing analysis. We compared the full sequence with other known proteins that reveal the sperm-specific protein Phi-1 (93.5%) of M. californianus. Synthesized antimicrobial peptide (McSSP-31) showed antibacterial activity against gram-positive bacteria including B. subtilis, S. mutans, S. aureus and gram-negative bacteria including E. coli, K. pneumoniae, P. mirabilis, P. aeruginosa and fungi, C. albicans. Also, synthesized peptide showed strong antibacterial activity against antibiotic-resistant strains, including S. aureus. The cytotoxicity of the peptide was determined by using the HUVEC human cell line. The peptide did not exhibit any significant cytotoxic effects on the normal human cell line, and it had very low hemolytic activity with flounder hemoglobin. The results demonstrated that peptide purified from the hemocyte of a M. coruscus exhibits antibacterial activity against various bacteria and has the potential to be an alternative antibiotic agent.

참담치(Mytilus coruscus) 유래 항균 펩타이드 분리 및 정제

오륜경(Ryunkyoung Oh),이민정(Min Jeong Lee),김영옥(Young-Ok Kim),남보혜(Bo-Hye Nam),공희정(Hee Jeong Kong),김주원(Joo-Won Kim),안철민(Cheul Min An),김동균(Dong-Gyun Kim) 한국생명과학회 2016 생명과학회지 Vol.26 No.11

항생제 남용의 문제점 및 사용제한에 따른 천연물 유래 항생제 대체제 개발을 위하여 우리나라와 중국, 일본에서만 서식하는 고유종인 참담치의 족부 근육 추출물로부터 항균 펩타이드를 분리 및 정제하였다. C18 역상 컬럼을 사용하여 항균 펩타이드를 정제하였으며, MALDI-TOF/MS로 분석 결과 분자량은 6,701 Da에 해당하였다. edman degradation 방법으로 N-말단 아미노산 서열 분석을 통하여 20개의 아미노산 서열을 밝혔으며 이는 캘리포니아 홍합(Mytilus californianus)의 sperm-specific protein 또는 protamine-like PL-II/PL-IV precursor와 100% 상동성을 지님을 밝혀냈다. 이러한 정보를 바탕으로 ORF를 분석한 결과 60개의 아미노산을 코딩하는 183 bp로 캘리포니아 홍합의 protamine-like PL-II/PL-IV precursor와 아미노산 서열이 100% 일치하였고 유전자 염기서열은 97.2%의 상동성을 나타냈다. 합성된 항균 펩타이드는 그람 양성 균주 Bacillus cereus (MEC, 20.8 μg/ml), Bacillus subtilis(MEC, 0.2 μg/ml), Streptococcus mutans (MEC, 0.2 μg/ml), 그람 음성 균주 Pseudomonas aeruginosa (MEC, 5.7 μg/ml), Escherichia coli (MEC, 2.6 μg/ml) 그리고 진균류 Candida albicans (MEC, 56.3 μg/ml)의 항균활성을 나타냈다. 또한 높은 열안정성을 지녔으며, C. albicans를 제외하고 염안정성을 지닌 항균 펩타이드로 확인되었다. 이를 통해 참담치 유래의 항균 펩타이드는 항생제 대체제의 후보소재로 높은 가능성을 지녔다고 할 수 있다. 따라서 본 연구에서 분리한 참담치 족부 근육 유래 항균 펩타이드는 향후 추가적인 연구를 통하여 항생제를 대체할 수 있는 물질의 개발이 가능할 것으로 사료된다. 그리고 해양무척추동물의 선천성 면역 기작에 대한 정보를 제공할 것으로 기대한다. In this study, we investigated antimicrobial peptide from the acidified muscle extract of Mytilus coruscus, which mostly inhabits China, Japan, and Korea, to develop a natural product-derived antibiotics substitution in terms of its abuse and restriction. Antimicrobial peptide was purified by C18 reversed-phase high-performance liquid chromatography and was detected as having a molecular mass of 6,701 Da by MALDI-TOF/MS. The N-terminal amino acid sequence of the purified peak was obtained from edman degradation, and 20 identified residues shown 100% identity with the N-terminus region of sperm-specific protein and protamine-like PL-II/PL-IV precursor of Mytilus californianus. We also identified 60 open-reading frame (ORF) encoding amino acids with 183 bp of purified peptide based on the obtained amino acid residues. The amino acid sequence of ORF showed 100% and the nucleotide sequence revealed 97.2% identity with the protamine-like PL-II/PL-IV precursor of Mytilus californianus. Synthesized antimicrobial peptide showed antimicrobial activity against gram-positive bacteria, including Bacillus cereus (minimal effective concentration [MEC], 20.8 μg/ml), Bacillus subtilis (MEC, 0.2 μg/ ml), Streptococcus mutans (MEC, 0.2 μg/ml), gram-negative bacteria including Pseudomonas aeruginosa (MEC, 5.7 μg/ml), Escherichia coli (MEC, 2.6 μg/ml) and fungi, Candida albicans (MEC, 56.3 μg/ml). In addition, synthesized peptide showed stable activities under heat and salt conditions against gram-positive and gram-negative bacteria, but was inhibited by salt against only C. albicans. With these results, isolated peptide from M. coruscus could be an alternative agent to antibiotics for defending against pathogenic microorganisms, and helpful information to understand the innate immune system of marine invertebrates.

참전복(Haliotis discus hannai)에서 분리한 peroxiredoxin 2 유전자의 분자생물학적 고찰 및 발현분석

문지영(Ji Young Moon),박은희(Eun Hee Park),공희정(Hee Jeong Kong),김영옥(Young-Ok Kim),김동균(Dong-Gyun Kim),안철민(Cheul Min An),남보혜(Bo-Hye Nam) 한국생명과학회 2014 생명과학회지 Vol.24 No.12

본 연구에서는 참전복(Haliotis discus hannai)의 대용량 염기서열 분석을 통해 peroxiredoxin (Prx) 2 유전자의 full length의 cDNA를 동정하였다. 참전복 Prx 2 유전자의 총 길이는 1,052 bp로 597 bp의 open reading frame는 총 199개의 아미노산을 코딩하고 있으며 분자량은 22 kDa, 등전점은 7.58로 예측되었다. 참전복 Prx 2 아미노산서열에는 typical 2-Cys Prx의 특징을 갖는 motif와 효소활성에 중요한 cysteine잔기가 매우 보존되어 있었다. 참전복 Prx 2 아미노산 서열은 다른 종의 Prx 2와 64~99% 유사하였고, 특히 패류의 Prx 2와 가장 유사성이 높았다. 참전복 Prx 2 유전자의 mRNA는 관찰된 모든 조직에서 발현하고 있었으며, 특히 외투막, 아가미, 족부, 간췌장, 소화관에서 높은 발현이 확인되었다. 참전복의 Prx 2는 비브리오균으로 감염시킨 전복의 혈구세포에서 감염 후 1시간 째 발현이 증가했다가 서서히 감소하였고, 간췌장 조직에서는 감염 6시간 경과 후 발현 정도가 최고로 증가했다가 감소하였다. 따라서 typical 2-Cys Prx의 특징을 잘 보존되어 있는 참전복 Prx 2는 병원균 감염에 따른 산화스트레스 조절에 관여하는 인자로 중요한 역할을 할 것으로 예상된다. Peroxiredoxins (Prxs) are a ubiquitous family of antioxidant enzymes that participate in a variety of biological processes, including H₂O₂-mediated signal transduction, molecular chaperoning, and mitochondrial function. In this study, we isolated and characterized a Prx 2 cDNA from abalone (Haliotis discus hannai). The abalone Prx 2 cDNA encoded a 199-amino acid polypeptide that belongs to a class of typical 2-Cys Prxs that contain peroxidatic and resolving cysteines. The deduced abalone Prx 2 protein showed strong homology (64-99%) with Prx 2 proteins from other species, including mollusk, fish, amphibians, and mammals, and it was most closely related to disk abalone (H. discus discus) Prx 2. Abalone Prx 2 mRNA was ubiquitously detected in tested tissues, and its expression was comparatively high in the mantle, gills, liver, foot, and digestive duct. The expression level of abalone Prx 2 mRNA was 106.7-fold, 51.9-fold, and 437.8-fold higher, respectively, in the gills, digestive duct, and liver than in the muscles. The expression level of abalone Prx 2 mRNA in the liver peaked at 6 hr postinfection with Vibrio parahemolyticus and decreased at 12 hr postinfection. The expression level of abalone Prx 2 mRNA in hemocytes was drastically increased at 1 hr postinfection with V. parahemolyticus. These results suggest that abalone Prx 2 is conserved through evolution and that it may play a role similar to that of its mammalian counterpart.

Genetic Relationships of Four Korean Oysters Based on RAPD and Nuclear rDNA ITS Sequence Analyses

김우진,이정호,김경길,김영옥,남보희,공희정,정현택,Kim, Woo-Jin,Lee, Jeong-Ho,Kim, Kyung-Kil,Kim, Young-Ok,Nam, Bo-Hye,Kong, Hee-Jeong,Jung, Hyung-Taek The Malacological Society of Korea 2009 The Korean Journal of Malacology Vol.25 No.1

Random amplified polymorphic DNA (RAPD) marker and sequence analyses of the internal transcribed spacer (ITS) region of ribosomal DNA were used to assess phylogenetic relationships of four Korean oyster species. The average number of species-specific markers identified from five universal rice primers (URPs) by RAPD-PCR was 1.8 for Crassostrea gigas, 3.2 for C. nippona, 3.6 for C. ariakensis, and 4.6 for Ostrea denselamellosa. The length of the ITS (ITS1-5.8S-ITS2) region ranged from 1,001 to 1,206 bp (ITS1, 426-518 bp; 5.8S, 157 bp; and ITS2, 418-536 bp), while the GC content ranged from 55.5-61.1% (ITS1, 56.8-61.8%; 5.8S, 56-57.3%; and ITS2, 54.1-62.2%). A phylogenetic analysis of the oysters based on our RAPD, ITS1, and ITS2 sequence data revealed a close relationship between C. gigas and C. nippona and a distant relationship between the genera Crassostrea and Ostrea. Our results indicated that RAPD and ITS sequence analysis was a useful tool for the elucidation of phylogenetic relationships and for the selection of species-specific markers in Korean oysters.