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        Anti-proliferative Properties of p-Coumaric Acid in SNU-16 Gastric Cancer Cells

        Mi Gyeong Jang(장미경),Hee Chul Ko(고희철),Se-Jae Kim(김세재) 한국생명과학회 2019 생명과학회지 Vol.29 No.7

        p-Coumaric acid (p-CA)는 항산화 및 항염 활성을 가진 식물계에서 가장 풍부한 식물화학물질이다. 그러나 위암세주포에서 p-CA의 항암 활성과 전사체 발현에 대한 연구는 아직까지 수행된 바 없다. 본 연구에서는 SNU-16위암세포에서 p-CA에 의한 세포 증식 억제 및 전사체 프로파일에 미치는 영향을 조사하였다. p-CA는 세포사멸 단백질 발현을 조절하여 SNU-16 세포에서의 세포사멸을 유도하였다. RNA-seq 분석을 사용하여 p-CA처리에 의해 SNU-16 세포에서 차별적으로 발현된 유전자(DEGs)를 동정하였다. DEGs들의 gene ontology (GO) 술어로 유전자 산물을 검색한 결과, 주로 염증반응, 세포사멸 과정, 세포주기 및 면역 반응에 관여하는 생물학적 과정에 관여하는 것으로 나타났다. 또한, KEGG 경로분석 결과, p-CA는 주로 PI3K-Akt 와 암 신호전달 경로에 변화를 유발하였다. 본 연구결과는 p-CA가 세포증식과 암 신호 전달 경로에 관여하는 유전자 발현을 조절함으로써 위암예방 효과를 나타낼 수 있음을 시사한다. The ubiquitous plant metabolite p-coumaric acid (p-CA) has antioxidant and anti-inflammatory properties, but its anti-cancer activity has not been established in gastric cancer cell lines. In this study, we investigated the effects of p-CA on the proliferation and transcriptome profile of SNU16 gastric cancer cells. Treatment with p-CA induced apoptosis of the SNU-16 cells by regulating the expression of pro-apoptotic and anti-apoptotic proteins, such as Bcl-2, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), Bax, procaspase-3, and cleaved-caspase-3. The genes differentially expressed in response to p-CA treatment of the SNU-16 cells were identified by RNA sequencing analysis. Genes regulated by p-CA were involved mainly in the inflammatory response, apoptotic processes, cell cycle, and immune response. Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathway analysis indicated that the phosphatidylinositol- 3-kinase-Akt and cancer signaling pathways were altered by p-CA. Protein-protein interaction (PPI) network analysis also revealed that p-CA treatment was correlated with differential expression of genes associated with the inflammatory response and cancer. Collectively, these results suggest that p-CA has potential utility in gastric cancer prevention.

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        식물화합물 다량 함유 제주조릿대 잎 추출물의 제조와 특성

        이주엽(Ju Yeop Lee),고희철(Hee Chul Ko),장미경(Mi Gyeong Jang),김세재(Se Jae Kim) 한국생명과학회 2016 생명과학회지 Vol.26 No.11

        조릿대 속 식물의 잎은 한의학적으로 염증, 해열, 이뇨 관련 질환 치료에 사용되어 왔다. 제주조릿대는 제주도 한라산 일대에서만 분포되어있는 토착식물이다. 본 연구에서는 제주조릿대 잎 추출물의 산업적 활용 효율을 높이기 위해 추출방법에 따른 식물화합물의 함량과 그 생리 활성을 비교함으로써 기능성이 강화된 식물화합물 다량 함유 추출물(phytochemical-rich extract; PRE)의 제조방법을 개발하였다. PRE는 열수추출물과 알코올추출물에 비하여 높은 폴리페놀 함량을 나타내었고, 조릿대 주요성분인 p-coumaric acid (44.10 mg/g)와 tricin (5.35 mg/g)의 함량은 열추추출물(p-coumaric 23.39 mg/g, tricin 0.18 mg/g)과 알코올 추출물(p-coumaric 10.8 mg/g, tricin 0.38 mg/g)에 비해 매우 높았다. RPE는 다른 추출물에 비해 총 폴리페놀 함량과 항산화 활성[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazy (DPPH) 소거활성, 2,2"-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) 소거활성, nitric oxide (NO) 소거활성, xanthine oxidase 저해활성]이 가장 높았다. 그리고 RPE는 LPS로 자극시킨 RAW 264.7 세포에서 NO 생성(IC50 = 59.1μg/ml)과 혈액 암(HL-60) 세포의 성장을 효과적으로 억제하였다. 본 연구결과는 PRE가 식물화합물을 다량 함유하고 있어 항산화 및 항염소재로서 활용가치가 있음을 제시해 준다. Sasa species leaves have been used in traditional medicine for their anti-inflammatory, antipyretic, and diuretic properties. Sasa quelpaertensis Nakai is a small bamboo grass that grows only on Mt. Halla on Jeju Island, Republic of Korea. This small bamboo grass has recently been the focus of much attention due to its potential biomass as well as its beneficial health effects. In this study, to promote the efficient utilization of the S. quelpaertensis leaf, we established a simple preparation method for phytochemical-rich extract (PRE) by comparing phytochemical contents and biological activities according to extraction methods. high performance liquid chromatography (HPLC) analysis revealed that the contents of two major phytochemicals such as, tricin (5.35 mg/g) and p-coumaric acid (44.10 mg/g) contained in PRE were higher than those in fresh hot water extract (SQH, p-coumaric 23.39 mg/g, tricin 0.18 mg/g) and ethanol extract (SQE, p-coumaric 10.8 mg/g, tricin 0.38 mg/g). The antioxidant activities [1,1-diphenyl-2-picrylhydrazy (DPPH) radical scavenging activity, 2,2"-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) radical scavenging activity, nitric oxide (NO) scavenging activity, and xanthine oxidase inhibitory activity] of PRE were higher than those of SQH and SQE. PRE effectively inhibited NO production in LSP- stimulation RAW 264.7 cells, and the growth of human promyelocytic leukemia (HL-60) cells. These results suggest that PRE has a potential as a promising antioxidant and anti-inflammatory agent.

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        Effects of Sasa quelpaertensis Extract on mRNA and microRNA Profiles of SNU-16 Human Gastric Cancer Cells

        Mi Gyeong Jang(장미경),Hee Chul Ko(고희철),Se-Jae Kim(김세재) 한국생명과학회 2020 생명과학회지 Vol.30 No.6

        제주조릿대 잎은 항염, 해열 및 이뇨작용을 가지고 있어 위궤양, 목마름 및 토혈 치료를 위한 민간의약으로 사용되어 왔다. 본 저자들은 제주조리대 잎에서 분리한 피토케미칼 풍부 추출물(PRE)과 그 에틸아세테이트 분획물(EPRE)은 여러 위암 세포주에서 세포사멸을 유도하는 항암 효과가 있다고 보고한 바 있다. 본 연구는 EPRE의 세포사멸 유도 기전에 관여하는 분자표적들을 탐색하기 위하여 EPRE을 처리한 SNU-16 세포에서 mRNA와 microRNA (miRNA)의 프로파일 변화를 분석하였다. RNA sequencing 분석을 통해 총 2,875개의 차등적으로 발현되는 유전자들(DEGs)을 동정하였다. 유전자 온톨로지(GO)와 KEGG 경로 분석 결과, EPRE는 세포사멸, 유사분열-활성화 단백질 키나제(MAPK) 및 염증 반응, 종양 괴사 인자(TNF) 신호 전달 및 암 경로에 관여하는 유전자들의 발현을 조절하는 것으로 나타났다. 단백질-단백질 상호 작용(PPI) 네트워크 분석으로 세포사멸 및 세포죽음과 관련된 유전자들 간의 상호작용들을 확인할 수 있었다. 그리고, miRNA sequencing 분석을 통해 총 27개의 차별적으로 발현되는 miRNAs (DEMs)를 동정하였다. GO와 KEGG 경로 분석 결과, EPRE는 세포주기, 세포사멸 및 tropomyosin-receptor-kinase (TRK) 수용체 신호 전달, 성장인자-β(TGF-β), 핵인자 κB (NF-κB) 및 암 경로에 관여하는 miRNAs의 발현을 조정하였다. 본 연구결과는 EPRE의 항암 효과의 근본적인 메커니즘에 대한 통찰력을 제공한다. Sasa quelpaertensis Nakai leaf has been used as a folk medicine for the treatment of gastric ulcer, dipsosis, and hematemesis based on its anti-inflammatory, antipyretic, and diuretic characteristics. We have previously reported the procedure for deriving a phytochemical-rich extract (PRE) from S. quelpaertensis and how PRE and its ethyl acetate fraction (EPRE) exhibits an anticancer effect by inducing apoptosis in various gastric cancer cells. To explore the molecular targets involved in this apoptosis, we investigated the mRNA and microRNA profiles of EPRE-treated SNU-16 human gastric cancer cells. In total, 2,875 differentially expressed genes were identified by RNA sequencing, and gene ontology (GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) analyses indicated that the EPREmodulated genes are associated with apoptosis, mitogen-activated protein kinase, inflammatory response, tumor necrosis factor signaling, and cancer pathways. Subsequently, protein-protein interaction network analysis confirmed interactions among genes associated with cell death and apoptosis, and 27 differentially expressed microRNAs were identified by further sequencing. Here, GO and KEGG pathway analysis revealed that EPRE modified the expression of microRNAs associated with the cell cycle and cell death, as well as signaling of tropomyosin-receptor-kinase receptor, transforming growth factor-b, nuclear factor kB, and cancer pathways. Taken together, these results provide insight into the mechanisms underlying the anticancer effect of EPRE.

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        제주조릿대 잎 잔사 추출물의 항산화 및 항염 활성

        이주엽(Ju-Yeop Lee),송하나(Hana Song),고희철(Hee-Chul Ko),장미경(Mi-Gyeong Jang),김세재(Se-Jae Kim) 한국생명과학회 2018 생명과학회지 Vol.28 No.6

        제주조릿대는 한라산 일대에서 자생하는 제주특산식물이다. 예로부터 조릿대 잎은 다양한 약리효과를 가지고 있어 전통의약에서 사용되어 왔을 뿐만 아니라 최근에는 식품 및 화장품 소재로서 활용되고 있다. 우리 연구팀은 제주조릿대 잎의 효율적인 산업적 활용을 촉진하기 위하여 열수 추출한 후 남는 잔사로부터 식물화합물을 다량으로 함유한 잔사 추출물(PRE)을 제조하는 방법을 보고한 바 있다. 본 연구는 PRE 및 분획물이 항산화 혹은 항염소재로서 활용 가능성을 평가하기 위하여 수행하였다. PRE 에틸아세테이트 분획물(EPRE)은 DPPH, ABTS, superoxide 자유기 소거활성이 우수하였고, LPS로 자극한 RAW 264.7 세포에서 활성 산소종(ROS)과 nitric oxide(NO) 생성을 효과적으로 억제하였다. EPRE는 nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf 2)의 핵내 이동을 증가시킴으로써 heme oxygenase-1 (HO-1)의 발현을 유도하였다. HO-1 저해제인 zinc protoporphyrin (ZPP)은 EPRE에 의한 NO 생성 저해 능을 감소시키기 때문에 HO-1이 NO 생성 억제에 관여함을 알 수 있었다. 본 연구결과는 PRE와 EPRE가 항산화 및 항염 소재로서의 활용 가능성을 제시해 준다. Sasa quelpaertensis Nakai is a native Korean plant that grows only on Mt. Halla of Jeju Island. Its leaf is used for a popular bamboo tea due to its various health-promoting properties, and it has been increasingly used as food and cosmetic ingredients. To utilize the S. quelpaertensis leaf efficiently, the preparation method for phytochemical-rich extract (PRE) using the leaf’s residue was previously reported, which was produced after hot water extraction. This study was undertaken to evaluate the anti-oxidant and anti-inflammatory potential of PRE and its solvent fractions. The ethyl acetate fraction of PRE (EPRE) showed higher DPPH, ABTS, and superoxide radical scavenging activities, and it effectively inhibited intracellular reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO) production in lipopolysaccharides (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells. EPRE also induced the expression of heme oxygenase-1 (HO-1) by increasing the level of nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2) in a nuclear fraction. The inhibiting effect of EPRE on LPS-induced NO production was partially reversed by the HO-1 inhibitor (zinc protoporphyrin, ZPP), suggesting that HO-1 is involved in suppressing NO production. Taken together, the results suggest that EPRE has potential as a promising anti- oxidant and anti-inflammatory agent.

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        누리장나무 잎 추출물의 항산화 및 항염증 활성

        김지혜(Ji Hye Kim),송하나(Hana Song),고희철(Hee Chul Ko),이주엽(Ju Yeop Lee),장미경(Mi Gyeong Jang),김세재(Se Jae Kim) 한국생명과학회 2017 생명과학회지 Vol.27 No.6

        누리장나무의 잎과 줄기는 예로부터 항고혈압, 관절염, 류마티스 관절염, 항염증 등을 치료하는 민간약재로 사용되어 왔다. 본 연구에서는 누리장나무의 잎 추출물과 그 분획물의 항산화 및 항염증 소재로서의 활성가능성을 확인하기 위하여 수행되었다. 누리장나무 잎의 ethanol (EtOH)로 추출물과 이 추출물을 분획하여 얻은 hexane, chloroform (CHCl3), ethyl acetate (EtOAc), n-butanol (BuOH) 분획물들의 총 폴리페놀 함량을 비교한 결과, 총 폴리페놀 함량은 EtOAc 분획물(78.08 μg/mg)과 BuOH 분획물(77.54 μg/mg)에서 높게 측정되었다. 각 분획물의 항산화 활성을 비교한 결과, 폴리페놀 함량이 높은 EtOAc 분획물과 BuOH 분획물에서 높은 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 및 ABTS (2,2’-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)) radical 소거활성을 나타내었다. 그리고 xanthine oxidase 저해활성은 CHCl3 분획물(IC50 = 4.43 μg/ml)과 EtOAc 분획물(IC50 = 5.69 μg/ml)에서 높게 나타났다. EtOAc 분획물은 RAW 264.7 세포에서 lipopolysaccharide (LPS)로 유도된 nitric oxide (NO)의 생성을 효과적으로 억제하였다(IC50 = 18.87 μg/ml). 또한, EtOAc 분획물(100 μg/ml)은 LPS로 지극한 RAW 264.7 세포에서 tumor necrosis factor α (TNF-α)와 interleukin-6 (IL-6)의 생성과 inducible nitric oxide synthase (iNOS)와 cyclooxygenase-2 (COX-2) 단백질의 발현을 효과적으로 억제하였다. 본 연구결과는 누리장나무 잎 추출물과 분획물이 항산화 및 항염증 소재로서의 활용가능성이 있음을 제시해 준다. Clerodendrum trichotomum (CT) leaves and stems have been used in folk medicine for their anti-hypertension, arthritis, rheumatism, and anti-inflammatory properties. This study was performed to evaluate the potential of CT as an anti-oxidant and anti-inflammatory agent. CT leaves were extracted using 70% ethanol (EtOH). Then, using this extract, a hexane, chloroform (CHCl3), ethyl acetate (EtOAc), and n-butanol (BuOH) fraction was prepared. The polyphenol contents were higher in the EtOAc fraction (78.08 μg/mg) and BuOH fraction (77.54 μg/mg) compared to the other fractions. Also, these two fractions exhibited strong 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2’-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS) radical scavenging activities. Xanthine oxidase inhibitory activities were higher in the CHCl3 fraction (IC50 = 4.43 μg/ml) and EtOAc fraction (IC50 = 5.69 μg/ml). Moreover, the EtOAc fraction effectively inhibited nitric oxide (NO) production in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells (IC50 = 18.87 μg/ml). Thus, we investigated the effects of the EtOAc fraction on the expression of pro-inflammatory cytokines, inducible nitric oxide synthase (iNOS), and cyclooxygenase-2 (COX-2) in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. The treatment of the EtOAc fraction (100 μg/ml) effectively decreased the levels of the tumor necrosis factor α (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6), and the expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2). These results suggest the potential for CT extract and fractions as promising anti-oxidant and anti-inflammatory agents.

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        Protective effects of Sasa quelpaertensis Leaf Residue Extract against Potassium Oxonate-induced Hyperuricemia in Mice

        Mi Gyeong Jang(장미경),Hana Song(송하나),Ju Yeop Lee(이주엽),Hee Chul Ko(고희철),Sung-Pyo Hur(허성표),Se Jae Kim(김세재) 한국생명과학회 2019 생명과학회지 Vol.29 No.1

        조릿대 잎은 항염, 해열, 이뇨작용 등의 약리효과를 가지고 있어 예로부터 전통의약에서 사용되어 왔다. 본 연구팀은 열수 추출한 후 남는 잔사로부터 식물화합물을 다량으로 함유한 잔사 추출물(PRE)을 제조하는 방법을 보고바 있다. 본 연구는PRE의 고요산 혈증 저감소재로서 활용 가능성을 평가하기 위하여 수행하였다. Potassium oxonate (PO)로 유도한 고요산 혈증 생쥐 모델에서 PRE는 혈액 내의 요산, 요소 질소, 크레아틴 농도는 감소시켰고, 오줌내의 요산과 크레아틴 농도는 증가하였다. 또한, PRE 투여한 고용산 혈증 생쥐에서 간 내 요산 농도와 xanthine oxidase 활성이 대조군에 비해 감소하였고, PRE는 PO에 의해 유도된 간 조직의 상해를 보호하였다. 이 결과는 PO로 유도된 고요산 혈증 생쥐에서 PRE는 항염증 및 세포보호 작용에 기인하는 것으로 판단된다. 부가적으로 PRE에 의한 신장조직에서 transcriptome의 반응 변화를 RNA 서열분석법으로 분석하였다. PRE는 주로 면역반응, 염증반응 및 대사과정에 관여하는 유전자의 발현에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 본 연구 결과는 염증을 동반하는 고요산 혈증을 개선하는 소재로서의 PRE의 활용 가능성을 제시해 준다. Leaves of Sasa quelpaertensis Nakai are used in folk medicine for their anti-inflammatory, antipyretic, and diuretic properties. To ensure efficient utilization of S. quelpaertensis leaf, we previously reported a preparation method for phytochemical-rich extract (PRE) using the leaf residue, which was produced after hot water extraction. This study was undertaken to evaluate the hypouricemic potential of S. quelpaertensis leaf PRE in potassium oxonate (PO)-induced hyperuricemic mice. The administration of PRE significantly reduced serum uric acid (UA), blood urea nitrogen (BUN), and serum creatinine levels and increased urine UA and creatinine levels in the PO-induced hyperuricemic mice. It also reduced liver UA levels and xanthine oxidase (XA) activity. A histological analysis revealed that PRE administration protected against PO-induced liver damage, pointing to anti-inflammatory and cytoprotective effects in PO-induced hyperuricemic mice. We analyzed the transcriptome response to PRE administration in PO-induced hyperuricemic mice using RNA sequencing (RNA-Seq) in kidney tissues. The administration of PRE mainly enriched genes involved in mediating immune and inflammatory responses and the metabolic pathway. A Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) analysis showed that the metabolic pathway, purine metabolism, and antibody biosynthesis were the major pathways altered in the PRE and PO groups. These results suggest a potential role for PRE in the prevention and treatment of hyperuricemia with inflammation.

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