O-Chlorobenzylidene Malononitrile (CS)이 폐포간중격 제 2 형 폐포세포의 미세구조에 미치는 영향

정호삼,김병익,백두진,Chung, Ho-Sam,Kim, Byung-Ik,Paik, Doo-Zin 한국현미경학회 1994 Applied microscopy Vol.24 No.1

In order to investigating the pulmonary toxicity of the O-chlorobenzyledene malononitrile (CS), lacrimating agent, $2.6g/m^3$ of CS was inhalated to Sprague-Dawley rats in the plastic chamber for 20 minutes. The ultrastructural changes of type II pneumocytes in the lung were observed with Hitachi 600 transmission electron microscope. The results obtained were as follows: 1. 3 hours after exposure to CS the fusion of surface microvilli, dilatation of cristernae of the rough endoplasmic reticulum, atrophy of Golgi complex and condensation, deletion of lamellated membranes in lamellar bodies were observed in type II pneumocytes. 2. One and 2 days after CS-exposure, disorganization of mitochondrial double membranes, fragmentations of rough endoplasmic reticulum were found in the great alveolar cells. In addition, decrease in amount of polyribosome granules and deletion or condensation of lamellated membranes in lamellar bodies were also observed. 3. 4 days after exposure to CS, the type II pneumocyte revealed new whorled lamellar membranes in lamellar bodies, a few intact rough endoplasmic reticulum and restoration of polyribosome granules. It is consequently suggested that CS induces degenerative changes of cytoplasmic organelles in the type II pneumocytes.

韓國産 자라(Amyda sinensis)의 脾臟組織에 關하여

정호삼,이경로,Chung, Ho Sam,Lee, Kyung Ro The Korean Society for Integrative Biology 1975 동물학회지 Vol.18 No.3

1) 자라의 비장을 싸고있는 皮膜은 筋內細胞가 없으며 哺乳類의 그것과 마찬가지로 망상섬유와 탄력섬유 및 교원섬유를 함유하고 있다. 2) 자라의 비장의 脾株는 개구리 비장보다 발달되고 짧은 脾株가 잘 발달되어 있다. 3) 자라 비장의 血管系는 哺乳類와 거의 비슷하나 특히 中心動脈이 잘 발달되고 脾洞의 발달은 포유류의 脾洞構造나 數量面에서 下等性을 보인다. 4) 자라 비장의 造血細胞의 출현빈도가 포유류와 양서류등 다른 脊椎動物보다 훨씬 많이 出現된다. Histological studies on the spleen of mud turtle(Amyda sinensis) in Korea were made and the results obtained were as follows: 1. Smooth muscle cells are absent in the capsule of the spleen, although reticular, elastic and collagenous fibers are presnet as in the spleen of other mammals. 2. The trabeculs of the spleen tissue are more highly developed than those of frog and do not extend as deeply into the splenic pulp as the trabecula of mammals. 3. The structure of blood system in the spleen is found to be similar to that of mammals. Particularly, the central arteries of spleen are more highly developed, but the splenic sinus appears to be less developed than that of mammals. 4. The ratio of red pulp and white pulp in the splenic pulp appears to be 1. 5. More hemopoietic cells are seen in the spleen of turtle than in the spleen of mammals.

흰쥐 폐 발생시 Laminin의 발현에 대한 연구

정호삼,박철홍,백두진,백태경,김원규,윤지희,서윤경,Chung, Ho-Sam,Park, Chul-Hong,Paik, Doo-Jin,Baik, Tae-Kyung,Kim, Won-Kyu,Youn, Jee-Hee,Suh, Yun-Kyung 한국현미경학회 2001 Applied microscopy Vol.31 No.1

Laminin은 세포외기질의 주요 구성 당단백질로 알려져 있고 특히 기저막에 다량 분포되어 있어 제 4형 아교질, heparan sulfate proteoglycan 및 entactin과 결속되어 있다. Laminin은 세포외기질에 함유되어 조직의 발생, 분화 및 성숙 등에 직접 및 간접적으로 관련되어 있으며, 특히 세포의 분열, 이동에 관여하고 조직내 기저막의 물질 투과성에 영향을 미쳐 상피의 분화 및 재형성과 관계있음이 많은 학자들에 의하여 보고되어 있다. 최근에는 laminin이 포유동물에서 태자기와 신생아기에서 폐의 발생과 분화에 주요한 역할을 함도 일부 보고되어 있다. 이에 저자는 폐의 발생과정에서 조직 혹은 세포내에서 laminin의 발현과 분포 변화를 면역조직화 학염색법과 면역도금법을 이용해서 추적하고자 하였다. 실험동물로는 발생 제 14일, 제 16일, 제 18일 및 제 20 일의 태자와 생후 1일, 3일 5일 및 7일의 신생 흰쥐를 사용하였으며, 각 실험동물의 폐조직을 절취하고 면역조직화학염색과 면역도금법으로 laminin의 면역활성의 변동을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 발생 제 14일, 제 16일, 제 18일 및 제 20일의 흰쥐 태자와 출생 제 1일의 신생 흰쥐 폐조직에서는 혈관, 기관지 및 폐포의 기저막과 폐포막에서 강한 laminin 면역활성이 지속되었고, 폐포가 형성된 출생 제3일 이후의 흰쥐 폐의 폐포막에서는 laminin 면역활성이 현저히 감소되었다. 2. 흰쥐 태자의 폐조직에서 laminin 면역금과립이 관찰되는 세포는 간엽세포, 혈관내피세포 및 섬유모세포였으나, 신생 흰쥐의 폐에서는 섬유모세포, 제 1형 및 제 2형 폐포세포에서 laminin 면역금과립이 관찰되었으며 금과립이 가장 많이 관찰되는 조직 부위는 공기혈관장벽을 이루는 기저 막이었다. 이상과 같은 실험결과는 태생기에서는 laminin이 주로 폐의 세포외기질에 분포되나 출생 후에는 주로 기저막에 분포되므로 패의 기능이 성숙됨에 따라 laminin의 분포상태에 변동이 일어나고, laminin을 생성하는 세포도 출생 전에는 간엽세포, 혈관내피세포 및 섬유모세포이나 출생 후에는 폐의 실질세포인 제 1형 폐포세포와 제 2형 폐포세포로 합성기능이 이전되는 것으로 생각되었다. Laminin, a kind of multidomain glycoproteins, is mainly localized in the basement membranes of various tissues. It is known that laminin plays an important part in mammalian lung morphogenesis. The authors have undertaken this study to investigate the changes in the distribution of laminin, and to find out cells which synthesize laminin during the organogenesis and differentiation of the lung. The fetal and neoantal rats (Sprague-Dawley strain) were used as experimental animals. The immunohisto-chemical methods were employed for detection of laminin within the developing lung tissue and the immunegold cytochemical methods were performed for detection of cells which synthesize laminin according to each stage of development. The results are as follows; 1. During fetal life, strong immunoreactivity for laminin is maintained in the basement membranes of the blood vessels and the bronchioles, the extracellular matrix of the mesenchyme, and basal lamina of the alveolar septum in the fetal rat lung. 2. After birth, laminin immunoreactivity at the alveolar septum is gradually reduced. 3. During fetal life, laminin is mainly detected within the cytoplasm of the mesenchymal cells, the endothelial cells of blood vessels and the fibroblasts in fetal rat lung. 4. According to the differentiation of type I and type II pneumocyte after birth, laminin is detected within cytoplasm of the type I pneumocytes, type II pneumocytes and fibroblasts. It is consequently suggested that laminin is largely expressed in the developing lung and laminin may be also synthesized by the type II pneumonocytes at early newborn stages.

Adriamycin 투여가 흰쥐 신사구체 기저막의 형태적 변화가 Laminin 분포에 미치는 영향

정호삼(Ho Sam Chung),한상웅(Sang Woong Han),김호증(Ho Jung Kim) 대한신장학회 2001 Kidney Research and Clinical Practice Vol.20 No.1

세포 및 조직의 접합물질인 laminin은 신장의 신사구체 기저막을 구성하는 당단백 물질로 알려져 있으며, 상피조직, 신경조직 및 근육조직의 기저막에 분포되어 있어 조직내 세포의 재생, 극성 및 물질수용 동 필수적이고 미세한 역할을 한다고 보고되어 있다. 정상 신장에서는 제 4형 아교질, heparan sulfate proteoglycan 및 fibronectin 등과 함께 가시구조를 이루고 있다. 최근 많은 학자들은 여러 종류의 사구체질환에서 특히, membranous lupus nephriis, 막성증식성신사구체염, 사구체경화증 등에서 기저막내 laminin 의 분포가 변동된다고 주장한 바 있다. 이에 저자들은 신장에 독성이 큰 것으로 알려진 adriamycin을 실험동물에 투여하였을 때 신사구체기저막동에서 laminin의 분포 변동과 신사구체의 형태적 변화와의 관계 여부를 규명하고자 하였다. 본 실험에 사용한 실험동물은 SD계 체중 150g내외의 흰쥐로 대조군과 실험군으로 나뉘었다. 실험군의 흰쥐에는 체중 kg당 25mg되게 adriamycin을 증류수에 희석하여 0.2ml를 복강내로 투여하였고, 대조군에는 주사용 증류수만 투여하였다. Adriamycin 투여후 24시간, 48시간, 72시간, 1주일 및 2주일 경과 후 신장을 절제하여 면역조직화학염색과 전자현미경을 이용한 면역도금법을 위해 조직절편을 제작하여 1차 및 2차 항체에 반응시켜 광학현미경과 전자현미경을 이용하여 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) Adriamycin 투여후 24시간 48시간 경과군에서 신사구체내 laminin 면역반응이 강하게 나타났고, 특히 기저막내 금과립이 증가되었고 혈관사이세포의 세포질에서 금과립이 약간 증가되었다. 그러나 adriamycin 투여 1주일 및 2주일 군에서는 laminin반응이 대조군의 것과 같이 laminin 반응이 약화되었고, 기저막내 금과립도 감소되어 대조군의 것과 비슷하였다. 2) Adriamycin 투여 24시간군에서는 신사구체기저막은 두터워졌고 기저막내 lamina densa층이 관찰되지 않았으며, 기저막의 투명성이 상실되었다. 이상과 같은 결과는 adriamycin이 신독성에 의한 기저막의 손상 등의 형태적 변화와 함께 laminin의 기저막내 증가는 laminin에 의한 신사구체기저막의 재생능에 따른 것으로 생각되었다. 이상과 같은 결과는 adriamycin에 의한 혈관내피세포 및 혈관사이세포등에서 laminin생성의 조절기능 상실에 의한 기저막내 비정상적인 laminin 발현을 나타내는 것으로 생각되고 따라서 기저막의 재생에 laminin의 미세한 역할이 있다고 생각된다. Laminin is a glycoprotein that is composed of the basement membrane of renal glomerulus and various tissues, such as epithelium, nervous tissue, and muscle tissues. Functions of laminin have been dem- onstrated to play an essential role in the regeneration and polarity of cells as well as the reservation of materials inside of the tissues. In collaboration with type IV collagen, heparan sulfate proteoglycan, and fibronectin, laminin forms a spike-like structure in the renal glomerular basement membrane of normal kidney. Recently, many investigators have suggested that the distribution of laminin in the basement membrane was altered in a variety of renal diseases, expecially in membranous lupus nephritis, membra- nous proliferative gromerular nephritis, and glomerulosclerosis. To investigate whether the morphologic changes in the glomerulus are associated with the profile of laminin distribution in the renal glomerular basement membrane, the gromerulus was examined after exposure to adriamycin, a potent inducer of nephritis. Male rats(Sprague Dawley strain) were intraperitoneally injected with 0.2ml adriamycin at 25mg/kg body weight. At 24 hour, 48 hour, 72 hour, one week, and 2 week after adriamycin administration, kidney isolated from sacrificed rats was sectioned and observed by immunohistochemical staining and electron microscopy using the immunogold method. The results we obtained were as follows: 1) Renal glomerulus was strongly stained with anti-laminin antibody when 24 or 48 hours passed after adriamycin administration. However, after 1 or 2 weeks later, the antibody response became weak at the level comparable with the vehicle controls. The renal glomerular basement membrane exhibited an increase of gold particles in subjects passed both 24 and 48 hours after adriamycin administration. This increase was observed in mesangial cells in the same subjects. In contrast, both 1 and 2 week- passed subjects displayed a reduction in the binding of gold particles at the level comparable with the vehicle controls. 2) 24 hour-passed rats upon treatment with adriamycin showed various morphologic changes in the renal glomerulus, including thicker and less transparent basement membrane and undetectable lamina densa layer. In conclusion, these results suggest that adriamycininduced renal toxicity leads to the morphologic alteration along with an increase in laminin expression and that these aspects may be attri- butable to the regenerative potential of laminin.

흰쥐의 콩팥 발생과정에서 Laminin 및 Laminin β1 chain 분포에 대한 연구

정호삼(Ho-Sam Chung),서윤경(Youn-Kyung Seo),백두진(Doo-Jin Paik),김원규(Won-Kyu-Kim),윤지희(Jee-Hee Youn),김호중(Ho-Jung Kim),백태경(Tai-Kyoung Baik),노원재(Won-Jae Roh) 대한체질인류학회 2001 대한체질인류학회지 Vol.14 No.1

간추림 최근 콩팥의 사구체 기저막에서 laminin은 제4형 아교질, heparan sulfate, proteoglycan 등의 당단백과 함께 가시구조 (spike-like structure)를 형성하고 있음이 밝혀졌고, 않은 연구자는 신사구체막엽이 있을 때 laminin 의 분포, 합성 등에 변화가 있으며, 신사구체 기저막의 재형성과 신사구체 세포의 재생에 laminin 이 주요한 역할을 한다고 알려져 있다. 저자는 흰쥐 태자와 선생흰쥐에서 신사구체 기저막에서 laminin 과 laminin β1 chain 의 항성 및 분포를 발생시기에 따라 추적하고, 신독성으로 작용하는 adriamycin 투여 후 나타나는 변화를 관찰하고자 하였다. 온 실험에 사용한 실험동물은 Sprague-Dawley 계 흰쥐를 사용하였으며 임신후 제16일, 제18일, 제20일의 태자와 출생 1일 및 출생 l주의 신생 흰쥐군으로 나누에 각군에 각각 5마리를 배정하였다. Adriamycin 처리군은 처리 후 1일, 2일 및 1 주군으로 나누고, 각 군에 5 마리의 흰쥐 (체중 150gm 내외) 를 사용하였다. 각 실험군의 태자, 신생흰쥐 및 성숙 흰쥐를 희생하여 콩팥을 절취하여 동결 조직표본을 제작하였고, 일부 조직은 전자현미경 관찰을 위하여 통상적인 방법으로 초박절편을 제작하였다. 각 표본은 면역조직염색과 면역도금염색을 실시하여 광학 및 전자현미경으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 제16일, 18일 및 20일 태자의 콩팥단위의 기저악과 주위의 간엽조직에서 강한 laminin 면역반응이 관찰되고, 출생 제1일의 신사구체에서 강한 면역반응이 계속되었고 출생후 1 주 경과된 신생흰쥐의 신사구체내에는 약한 laminin 반응이 나타났다. 2. 제18일 대자의 미성숙 콩팥의 심표형 콩팥단위를 구성하는 세포 중에서 혈관내피세포, 혈판사이세포의 과립포철세망의 수조, 소포 및 막에서 면역반응급과립이 관찰되었다. 3. Laminin β1 chain 의 면역반응은 태생 제 16 일, 18 일 및 20 일 대자의 콩팥에서 미약하였으나 출생 제1일 신생 흰쥐의 모세혈관 주위와 혈관사이 조직에서 약한 반응융 보였다. 4. Adriamycin 투여후 24 시간군의 신사구체에서 중등도의 laminin 반응을 보였으며, 신사구체의 내피세포와 혈관사이세포의 세포질에 소량의 금과립이 관찰되었고, laminin β1 chain 반응은 24 시간에는 약한 반응을 보였고, 48 시간군에서는 미약한 반응으로 감소되었다. 이상파 강은 경과로 미루어 흰쥐 콩활의 발생에 따라 laminin 은 태생기 초기에 대부분 강한 반응을 나타내지만 출생 후에는 그 반응이 약화되었으며, adriamycin 투여후 나타나는 콩팥조직의 손상이 회복될 때 laminin 과 laminin β1 chain 의 발현이 증가되는 것으로 생각되었다.

Adriamycin 투여가 흰쥐 피부내 제Ⅰ형 아교질의 분포변화에 대한 면역조직학적 연구

정호삼(Ho Sam Chung),장견호(Kyun-Ho Chang) 대한체질인류학회 1998 대한체질인류학회지 Vol.11 No.1

피부조직내 제 I 형 아교질의 분포가 adriamycin 투여로 인하여 어떻게 변화되는지를 관찰하고자 하였다. Adriamycin을 신생흰쥐의 체중 kg 당 5mg 을 매일 3 일간 복강내 투여후 일정기간 (12시간, 24시간, 3일 및 1주일 ) 후 제 I형 아교질의 분포현상을 관찰한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 1 피부의 진피층내 제 I형 아교질은 adriamycin 투여후 12시간에서 2일까지는 감소되지만 3일 이후부터는 정상쥐의 것과 같이 일정량 분포되었다. 2 피부의 그물층내 제1영 아교질은 adriamycin 투여 초기에 급속히 감소되나 제 2일후 부터는 증가되었다. 이상과 같은 결과는 adriamycin 은 피부의 진피층내 제1형 아교정의 분포와 함량에 제한적이거나 억제적으로 작 용하는 것으로 판단되었다.

발생과정중 흰쥐 넙다리곧은근에서 Laminin의 발현과 분포에 대한 연구

정호삼(Ho-Sam Chung),서윤경(Yun-Kyung Suh),윤지희(Jeehee Youn),김원규(Won-Kyu Kim),백두진(Doo-Jin Paik),김종관(Chong-Kwan Kim),신규석(Kyu-Suk Shin) 대한해부학회 2000 Anatomy & Cell Biology Vol.33 No.3

Laminin은 생체조직의 세포밖바탕질에 존재하는 구조단백질의 일종으로 세포 혹은 조직의 결합, 이동, 발생 및 분화에 유기적인 역할을 한다고 알려져 있다. 이에 저자는 흰쥐의 넙다리곧은근의 발생과 분화과정에서 laminin의 생성과 분포를 성숙한 근육조직이 될 때까지 추적하고자 하였다. 실험동물로 SD계 흰쥐를 사용하였으며, 실험군으로 14일, 16일, 20일 및 22일의 태자군과 출생 1일, 3일, 5일 및 7일의 신생흰쥐군으로 분류하였다. 각 실험군에서 적출된 넙다리곧은근에서 나타나는 laminin의 생성과 분포는 면역조직염색법 과 면역금도금법을 이용한 전자현미경적 방법으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 제 14일의 흰쥐 태자의 원시넙다리곧은근에서는 근육모세포와 중간엽세포가 관찰되었으며 금과립이 세포질에 고르게 분포되었다. 2. 제 16일의 흰쥐 태자의 넙다리곧은근에서는 세포밖바탕질, 근육모세포 및 중간엽세포 등에서 laminin에 대한 강한 면 역반응이 관찰되었고, 근육모세포와 중간엽세포의 세포질에 금과립이 분포되었다. 3. 제 18일 및 20일의 흰쥐 태자의 넙다리곧은근에서는 근육세포의 바닥판에서 강한 면역반응이 나타났고, 근육세포의 바닥판에 금과립이 분포되었다. 4. 제 22일군의 흰쥐 태자와 출생 제 1일군의 흰쥐의 넙다리곧은근에서는 바닥판에서 강한 면역반응이 관찰되었고, 근육 세포의 바닥판과 근육속막내의 섬유모세포에 다량의 금과립이 분포되었다. 5. 출생 제 3일, 5일 및 7일군의 흰쥐 넙다리곧은근에서는 바닥판에 중등도의 면역반응이 관찰되었고, 근육세포의 바닥판 과 근육속막에 위치한 섬유모세포의 과립세포질세망에서 다량의 금과립이 관찰되었다. 이상과 같은 결과를 종합하면 흰쥐 넙다리곧은근의 근육조직내의 laminin은 근육모세포가 근육세포로 분화되기전에 바 닥판과 근육속막에 다량 분포되어 있었고, 출생후에는 바닥판에는 소량 분포됨을 알수 있었다. 따라서 근육조직에서 laminin 분비는 태자시기에는 근육조직내 근육모세포에서 분비하나 출생후에는 근육조직내 섬유모세포가 대부분을 분비 하는 것으로 사료된다. Laminin is an extracellular matrix-associated protein, which is largely present in the basement membranes of the human placenta, striated muscle and Schwann cell. Laminin has been proposed to promote attachment, spread, motility, growth and development of tissues or cells. In this study, we investigated the formation, localization and migration of the laminin in developing rectus femoris muscle of fetal and newborn rats. Experimental animals, fetal or newborn rats (Sprague-Dawley strain), were divided into 8 groups (14 day-old, 16 day-old, 18 day-old, 20 day-old and 22 day-old fetal rats, 1 day-old, 3 day-old, 5 day-old and 7 day-old newborn rats). The specimens of each group were prepared for detection of the laminin by immuno- histological and immunogold electron microscopic methods. 1. The primitive rectus femoris muscle of 14 day-old fetal rats consisted of mesenchymal cells and myoblasts. Laminin stained with a few gold particles were observed in the cytoplasm of myoblasts and rough endoplasmic reticulum of mesenchymal cells. 2. In the rectus femoris muscle of 16 day-old fetal rats, laminin was strongly expressed in myoblasts and mesenchymal cells. Gold particles were distributed in the cytoplasm of myoblasts and mesenchymal cells. 3. In the rectus femoris muscle of 18 and 20 day-old fetal rats, strong laminin immune reactions were observed in the basement membrane of muscle cells. A few gold particles distributed on the basal lamina of muscle cells and in the RER of fibroblasts. 4. In the rectus femoris muscle of 22 day-old fetal rats and 1 day-old newborn rats, strong laminin immune reactions were seen in the basement membrane of muscle cells. Numerous gold particles were located on the basal lamina of muscle cells and the RER of fibroblasts. 5. In the rectus femoris muscle of 3 day, 5 day and 7 day-old newborn rats, moderate laminin immune reactions were detected in the basement membrane of the muscle cell. A few gold particles were located on the basal laminae of muscle cells and RER of fibroblasts. These results suggest that the distribution of laminin in the rectus femoris muscle is related to myogenicity. Laminin seemed to be secreted by myoblasts of rectus femoris muscle at the fetal stage, but by fibroblasts in the muscle at neonatal and adult stages.

Chitosan 계 인공피부의 개발

정호삼(Ho Sam Chung),김계용(Kea Yong Kim),민동선(Dong Sun Min) 한국고분자학회 1988 폴리머 Vol.12 No.3

Cyclophosphamide가 흰쥐 골수의 기질세포에서 Laminin-1의 발현에 미치는 영향

이창훈,정호삼,백두진,황세진,김원규,윤지희,김종관,Lee, Chang-Hun,Chung, Ho-Sam,Paik, Doo-Jin,Hwang, Se-Jin,Kim, Won-Kyu,Youn, Jee-Hee,Kim, Chong-Kwan 한국현미경학회 2002 Applied microscopy Vol.32 No.4

골수내 정상적인 혈구형성은 줄기세포와 주위의 미세환경 사이에 일어나는 상호작용에 의해서 좌우된다고 알려져 있다. 이때 미세환경은 성장요소, 기질세포 및 기질세포가 분비한 세포외기질의 복잡한 망상구조로 이루어져 있다. 골수의 세포외기질은 거대분자로 구성되어 있으며 이중 구성요소의 일부인 당단백이 혈구형성의 조절에 주요한 요소가 된다고 많은 학자들이 주장해 왔다. 골수의 기질을 이루고 있는 망상세포, 지방세포, 섬유모세포, 혈관내피세포 및 혈관주위세포 등이 분비하는 세포외기질에 여러종류의 laminin 동형체가 함유되어 있으며 여러 종류의 혈구형성에 주요한 역할을 한다는 연구보고가 있다. 저자는 골수내 종양을 치료하기 위해 빈번히 사용되는 cyclophosphamide가 골수에 미치는 영향을 규명하고자 실험동물의 혈구형성에 영향을 미치는 laminin-1의 발현의 변화를 골수의 기질세포에서 추적하고자 하였다. 건강한 SD계 흰쥐를 실험동물로 사용하여 cyclophosphamide를 체중 kg당 75 mg을 복강내로 1회 투여하고 3일, 1주, 3주 및 5주 후 희생하여 골수조직을 채취하여 면역조직염색법으로 염색하여 laminin-1의 골수내 분포의 변화를 관찰하였고, 일부 조직은 전자현미경표본을 제작하여 1차 항체(rabbit anti-laminin)로 반응시킨 후 직경 12 nm의 금과립이 섞인 제2차 항체(biotinylated goat anti-rabbit IgG)로 다시 반응시키고 uranyl acetate로 단일염색 후 전자현미경으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Cyclophosphamide 투여 후 3일 경과군의 흰쥐 골수조직은 정맥동이 확장 되었고, 일부 조직이 괴사되었으며, 혈구형성세포가 감소되었다. 망상조직과 지방세포사이의 조직에서 laminin-1의 면역반응이 강하게 나타났다. 2. Cyclophosphamide 투여 후 1주, 2주 및 5주 투여군의 골수에서 laminin-1의 약한 면역반응이 기질조직에 계속되었고 혈구형성세포의 수는 증가되었다. 3. Laminin-1의 면역반응을 나타내는 금과립은 cyclophosphamide 투여 3일군의 골수 기질세포에서 가장 많은 수가 관찰되었고, 투여 1주, 3주 및 5주군에서는 금과립의 수량이 감소되었다. 이상과 같은 실험결과는 cyclophosphamide가 흰쥐에 투여되었을 때 골수의 혈구형성의 미세환경을 유지하는 기질세포의 laminin-1의 발현을 증가시키는 것으로 생각되었다. The purpose of the present study is to investigate whether stromal cells supporting specific microenvironment for hematopoiesis of bone marrow are affected by toxicants and therapeutic drugs such as antibiotics and anticancer drugs and whether laminin-1 is associated with such effects. SD rats were intraperitoneally injected with 75 mg/kg of cyclophosphamide which is widely used to treat infant's solid tumor, leukemia and myeloma and sacrificed after 3 days, 1 week, 3 weeks or 5 weeks of injection. The bone marrow extracted and paraffin-sectioned was analyzed using immunohistochemical staining. A part of tissues was subjected to electron microscopy following reaction with rabbit anti-laminin antibody, biotinylated goat anti-rabbit IgG conjugated with 12 nm gold particles, and staining with uranyl acetate. 1. The bone marrow tissue at day 3 post injection with cyclophosphamide displayed dilated venous sinus, partial necrotic death, and decreased number of hematopoietic cells. Laminin-1 was intensively stained in the reticular and adipose tissues. 2. Up to 5 weeks post injection, laminin-1 was stained at a low level in the stromal tissue of bone marrow and the number of hematopoietic cell was increased. 3. Deposition of the gold particle which represents laminin-1 expression was observed at the highest level in the stromal cells of bone marrow obtained 3 days after injection, and decreased after 1 to 5 weeks. These results suggest that stromal cells which play a role in supporting microenvironment for bone marrow hematopoiesis augment induction of laminin-1 expression and activation upon administration of cyclophosphamide.

착상기간의 자궁내 환경이 생쥐 난자 및 배아의 투명대 미세구조에 미치는 영향

한성원,정호삼,강희규,이호준,계명찬,김성례,김문규,Han, Sung-Won,Chung, Ho-Sam,Kang, Hee-Gyoo,Lee, Ho-Joon,Gye, Myung-Chan,Kim, Sung-Rye,Kim, Moon-Kyoo 대한생식의학회 1999 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.26 No.3

In the studies on the hatching mechanisms in mammals, many investigators focused on the embryonic intrinsic factor(s) in in vitro culture, but the uterine environment as the extrinsic factor(s) is thought to play an important role in hatching mechanism. Therefore, to evaluate the effect of uterine environment on the hatching event in vivo, the immature(GV) and ovulated(MII) oocytes, and the late 2-cell embryos of mouse were transferred to pseudopregnant foster mother's uterus during peri-implantation period. So it was verified whether there would happen hatching by only uterine environment independently on embryonic stage. The ultrastructural changes of the zona surface of transferred group were compared with those 01 in vivo and vitro group by SEM. 36 hrs after transfer, the immature and ovulated oocytes almost degenerated, and the late 2-cell embryos developed to various embryonic stages. However, the embryos which didn't develop to blastula stage did not hatch. The ultrastructural network of ZP in transferred group seemed to be smoothed uniformly, which was different from in vitro group. In conclusion, it is suggested that the uterine environment during peri-implantation period enhances the embryo hatching by provoking the structural change of ZP.