Actinobacillus actinomycetemcomitans에서 분리된 immunomodulating factor (IMF)가 생쥐의 가지돌기세포, 큰포식세포 및 림프구에 미치는 영향

윤 식(Sik Yoon),전은주(Eun-Joo Jun),유영현(Young-Hyun Yoo),박봉수(Bong-Soo Park),이상화(Sang-Hwa Lee),정수진(Soo-Jin Jeong),김정만(Jung-Man Kim),정민호(Min-Ho Jeong) 대한해부학회 2000 Anatomy & Cell Biology Vol.33 No.3

치주질환의 일차적인 병인균인 Actinobacillus actinomycetemcomitans 균주에서 유래된 Immunomodulating factor (IMF)가 생체내에서 여러 면역세포들에 미치는 면역생물학적인 영향에 관해 알아보고자 면역세포화학적 방법을 이용하여 본 연구를 수행하였다. BALB/c계 생쥐에 10 μg/kg의 IMF를 복강주사한 다음 6시간 및 24시간 후에 동물을 희생시켜 지라를 분리하였다. IMF를 생체 내로 투여할 경우 생쥐 지라에서 주로 B세포 및 가지돌기세포들의 수가 증가되는 현상을 관찰할 수 있었다. IMF 투여 후 6시간 내에 정상 대조군에서 지라 가장자리구역에 위치하던 거의 대부분의 가지돌기세포들이 동맥주위 림프구집 내로 이주하였으며 24시간째 동맥주위림프구집에서 가지돌기세포들의 수가 현저하게 증가하였다. 이와 유사하게 IMF 투여 후 지라의 림프소절내에 분포하는 B세포의 수도 매우 증가하였다. 하지만 이와는 달리 T세포는 특별한 변화 를 나타내지 않았다. 따라서 IMF는 주로 B세포 및 가지돌기세포들을 강하게 자극하는 작용을 가지고 있는 물질이라고 할 수 있겠다. 그리고 IMF는 지라의 F4/80+ 큰포식세포에는 유의한 변화를 나타내지 않았지만 IMF 투여 후 6시간째 MOMA-1+ 큰포식세포 즉 지라 가장자리구역의 금속친화성 큰포식세포 (marginal metallophilic macrophage)의 면역반응성이 소실되는 현상을 관찰할 수 있었다. 따라서 본 연구를 통해 IMF는 생체 내에서 여러 면역세포 중에서도 특히 가지돌기세포 및 B세포에 강한 작용을 나타낸다는 사실을 입증할 수 있었다. This study was performed to investigate the effects of Immunomodulating factor (IMF), derived from Actinobacillus actinomycetemcomitans, on various immune cells in the mouse spleen. A single dose of IMF (10 μg/kg) was administered to BALB/c mice by intraperitoneal injection. After the mice were sacrificed in groups of five at 6 h and 24 h, the spleens were removed. The immunocytochemical characterization of the immune cells was carried out using the various monoclonal antibodies in cryostat-cut sections. We demonstrated in this study a strong stimulating effect of IMF on dendritic cells and B lymphocytes in the mouse spleen after IMF administration. The MOMA-1+ immunoreactivity on the marginal metallophilic macrophages in the splenic marginal zone disappeared 6 h and reappeared 24 h after IMF treatment. However, various subpopulations of T lymphocytes, CD3+, CD4+, CD8+, TCRα, β+ and Vβ8+ T cells in the mouse spleen did not show any significant change in their distributional pattern after IMF treatment. Dendritic cells were found to be increased in number in the periarterial lymphatitc sheath, and B lymphocytes were also increased in number in the lymphoid follicles of the spleen after IMF injection. In conclusion, IMF exhibited a potent stimulative effect on dendritic cells and B lymphocytes in vivo.

파킨슨병 모델 동물에서 GDNF 아데노바이러스 벡터를 이용한 유전자치료

성기한(Ki-Han Sung),윤인규(In-Gyu Yoon),정현실(Hyun-Sil Jung),김을선(Eul-Seon Kim),김현주(Hyun-Joo Kim),김양호(Yang-Ho Kim),윤 식(Sik Yoon),김봉선(Bong-Seon Kim),김재봉(Jae-Bong Kim),백선용(Sun-Yong Baek) 대한해부학회 2002 Anatomy & Cell Biology Vol.35 No.6

6-OHDA를 이용하여 실험적으로 유발한 파킨슨병 모델 동물을 대상으로 유전자 치료 목적으로 GDNF 유전자를 포함 하는 아데노바이러스 벡터(Ad-GDNF)를 주사하여 행동 변화와 줄무늬체와 흑색질의 tyrosine hydroxylase (TH) 면역반응양성의 도파민성 세포의 형태학적 변화를 연구하였다. 성숙한 수컷 Sprague-Dawley계 흰쥐의 줄무늬체에 6-OHDA를 주사하고, 1주 후에 apomorphine에 의한 회전 운동 양상 을 측정하여 분당 7회 이상 회전하는 동물은 파킨슨병 모델 동물에 해당하는 것으로 하였다. 이들 동물의 줄무늬체에 Ad-GDNF를 주사하고 1주 후에 apomorphine에 의한 행동 양상을 다시 측정하고, 이어서 심장 관류고정을 실시하여 형태 학적 변화를 관찰하였다. Ad-GDNF 대신에 LacZ 유전자를 포함하는 아데노바이러스 벡터(Ad-LacZ)를 주사한 것을 대조 군으로 이용하였다. 1. 파킨슨병 모델 동물의 줄무늬체에 Ad-GDNF를 주사한 동물에서 apomorphine에 의한 회전 운동 수가 유의하게 감소 하였다. 그러나 Ad-LacZ를 주사한 대조군에서는 회전 운동 수의 변화를 관찰할 수 없었다. 2. 회전 운동 수가 감소한 동물의 줄무늬체에 존재하는 TH 면역반응 양성의 축삭 종말은 대조군의 75% 수준으로 Ad- LacZ를 주사한 37%에 비하여 현저히 증가하여 TH 면역반응 양성 축삭종말의 퇴행성 변화가 방지되었다. 3. 흑색질의 TH 면역반응 양성 신경세포의 수는 Ad-GDNF를 주사한 군에서는 대조군의 82% 수준으로 Ad-LacZ를 주사한 군의 60% 수준에 비하여 유의하게 증가되어 있어서 6-OHDA에 의한 신경세포의 사멸이 방지되는 것을 알 수 있었다. 이상의 결과로 미루어 파킨슨병 모델 흰쥐의 줄무늬체에 Ad-GDNF를 한차례 주사하여 1주 후에 줄무늬체와 흑색질의 도파민성 세포의 사멸이 방지되는 것을 확인하였다. A recombinant adenoviral vector encoding human GDNF gene (Ad-GDNF) was developed to investigate the effect of GDNF gene in 6-OHDA-induced Parkinson’s disease rat. The changes of rotatory behavior and density of THimmunoreactive axon terminals and number of cell bodies were observed by the GDNF expression. Adult male Sprague-Dawley rats were used. Parkinson’s disease (PD) rat models were prepared by the injection of 6-OHDA into the striatum. After 1 week, the animals showing apomorphine-induced rotatory behavior above 7 turns/ min were defined as PD rat model. Ad-GDNF was injected into the striatum of animal model and tested the apomorphine- induced rotatory behavior at 1 week after injection. These animals were perfused with Zamboni fixative to investigate the morphological changes after rotatory behavior test. Instead of Ad-GDNF, Ad-LacZ injected PD rats were used as a control. The following results are obtained: 1. The apomorphine-induced rotational behavior was significantly reduced by the treatment of PD rat by the injection of Ad-GDNF. The Ad-LacZ injected PD rat showed no change in rotatory behavior. 2. The density of TH-ir axon terminals in the striatum was significantly increased by the Ad-GDNF injection (75% of normal side), but there was no change in the density by the Ad-LacZ injection (37% of normal side) compared to 6-OHDA lesioned striatum. This means the Ad-GDNF injection prevented the degenerative change of TH-ir axon terminals in the stritum of the PD rat. 3. The number of TH-ir cell body was significantly recovered by the Ad-GDNF (82% of normal side), but there was not recovered by the Ad-LacZ injection (60% of normal side) compared to 6-OHDA lesion. This means the retrogradely transported Ad-GDNF induced the TH expression in the dopaminergic neurons of the substantia nigra. Gene therapy with Ad-GDNF prevented the degeneration of dopaminergic neurons and axon terminals in the 6- OHDA-induced PD rat.

Tg737oprk 생쥐에서 배쪽신경관의 형태발생

오세옥(Sae Ock Oh),배수경(Soo Kyung Bae),윤 식(Sik Yoon),백선용(Sun Yong Baek),김봉선(Bong Seon Kim),김재봉(Jae Bong Kim) 대한해부학회 2005 Anatomy & Cell Biology Vol.38 No.1

Polaris는 Tg737 유전자에 의해 발현되는 단백질인데, 섬모를 구성하며 그 기능에 중요한 역할을 한다. 최근 섬모 형성에 관련된 분자들의 기능이 저하된 생쥐에서 배쪽신경관의 발생장애가 나타나며 이러한 발생장애가 Shh 신호전달체계와 관련이 있음이 제시되었다. 본 연구에서는 섬모 형성 장애가 있는 Tg737oprk 생쥐에서 신경관 발생장애를 면역조직화학법으로 분석하여 Polaris와 Shh 신호전달체계와의 관련성을 규명하고자 하였다. Tg737oprk 생쥐에서는 V3 사이신경 전구세포와 마루판은 발생하지 않았으나 V2 사이신경세포와 운동신경 세포는 보존되었다. 보존된 V2 사이신경세포와 운동신경세포는 그 생성영역이 배쪽화되었으며, 서로 섞여 있었다. Nkx6.1과 Olig2 전사인자 발현은 Tg737oprk 생쥐에서 보존되었으며 Olig2의 발현 영역이 배쪽화되었다. 이러한 발생장애는 Shh 신호전달체계에 장애가 있는 Shh-/-; Gli3-/-생쥐나 Gli2-/-; Gli3-/- 생쥐에서와 아주 유사하다. 따라서 이러한 결과는 Polaris의 기능이 정상적인 Shh 신호전달을 위해 필요하다는 것을 나타낸다. Polaris, which is encoded by Tg737 gene, has been associated with cilia formation. Recently phenotypes of ventral neural tube in mice who have abnormal cilia formation have been reported to be similar with those of sonic hedgehog (Shh) signaling mutants. These interesting findings lead us to further examine the patterning of ventral neural tube in Tg737oprk mice. In this study, we found that motor neuron and V2 interneuron were preserved whereas P3 progenitor domain and floor plate were missing in Tg737oprk mutant. V2 and motor neurons in Tg737oprk were ventralized and mixed with each other. Nkx6.1 and Olig2 expressions were preserved and the Olig2 expression was ventralized in Tg737oprk. These penotypes are quite similar with those in Shh-/-; Gli3-/- or Gli2-/-; Gli3-/- mutants, suggesting that the function of Polaris might be involved in Shh signaling.

발생 중 척수 전구세포영역 확립에 있어 Gli3의 역할

오세옥(Sae Ock Oh),배수경(Soo Kyung Bae),윤 식(Sik Yoon),백선용(Sun Yong Baek),김봉선(Bong Seon Kim),김재봉(Jae Bong Kim) 대한해부학회 2005 Anatomy & Cell Biology Vol.38 No.1

Sonic hedgehog (Shh)는 발생 중 척수에서 형태발생인자(morphogen)로 작용한다. Shh의 농도에 따라 다른 종류의 전구세포영역(progenitor domain)과 그에 따른 신경세포가 생성된다. 그런데 Shh의 농도차이에 따라 어떻게 다른 종류의 신경세포가 생성되는지 아직 명확히 밝혀져 있지 않다. Shh의 농도차이가 어떻게 각 전구세포에서 해석되는지를 연구하기 위하여 Shh-/- 생쥐와 Shh-/-; Gli3-/- 생쥐에서 척수 전구세포영역 확립에 필수적인 homeoproteins의 발현을 제자리부합법으로 관찰하였다. Shh-/- 생쥐에서 class I homeoproteins (Pax6, Irx3, Dbx2, Dbx1)의 발현은 배쪽화하였고, class II homeoproteins (Nkx6.1, Nkx6.2, Olig2, Nkx2.2)의 발현은 사라졌다. Shh-/-; Gli3-/- 생쥐에서 class I homeoproteins의 발현은 부분적으로 회복되었으며, class II homeoproteins은 Nkx2.2를 제외하고 회복되었다. 이러한 결과는 Gli3가 class II homeoproteins의 발현을 조절할 수 있고, 이는 Shh의 농도경사가 신경관 전구세포에서 Gli 전사인자의 활성도 경사로 번역되어짐을 의미한다. University Sonic hedgehog (Shh) signaling has been shown to play instructive roles in developing spinal cord. Depending on the Shh concentration gradient, different progenitor domains and ventral neurons are induced. However, the way how the Shh gradient is translated into different progenitor domains, is not clear. To investigate the translation of the Shh gradient, we studied expressions of homeoproteins which are critical for establishment of progenitor domains, in the ventral neural tube of Shh-/- and Shh-/-;Gli3-/- mutants, using in situ hybridization. In Shh-/- mutant, the expressions of class II homeoproteins (Nkx6.1, Nkx6.2, Olig2, Nkx2.2) were totally repressed. The expressions of class I homeoproteins (Dbx1, Dbx2, Irx3, Pax6) were ventralized. In Shh-/-;Gli3-/-mutant, the expressions of class II homeoproteins except Nkx2.2 were restored. The expressions of class I homeoproteins were restored to its original position although their restoration is not complete. From above results, we conclude that Gli3 can regulate the expressions of class II homeoproteins, which suggests that the Shh gradient will be translated into Gli activity in the developing spinal cord.

등쪽신경관에서 Gli3의 역할

오세옥(Sae Ock Oh),배수경(Soo Kyung Bae),윤 식(Sik Yoon),백선용(Sun Yong Baek),김봉선(Bong Seon Kim),김재봉(Jae Bong Kim) 대한해부학회 2005 Anatomy & Cell Biology Vol.38 No.1

배쪽신경관 형성에 있어 Gli3의 필수적인 역할은 Shh-/- 생쥐나 Shh-/-;Gli3-/- 생쥐 등의 연구를 통해 잘 알려져 있다. 그러나 Gli3가 등쪽신경관에 많이 발현되고 있음에도 불구하고 그 역할이 아직 명확하지 않다. 본 연구에서는 등쪽신경관에서 Gli3의 역할을 구명하기 위하여 Gli3-/-생쥐의 등쪽신경관 발생을 관찰하였다. Phosphohistone 3에 대한 면역조직화학법과 BrdU 실험을 통하여 세포분열을 조사하였을 때 Gli3-/- 생쥐의 등쪽신경관에서 세포분열이 정상 생쥐에 비해서 증가하였다. 세포주기를 벗어난, 신경세포와 dI3 사이신경세포에서 각각 발현되는 HuC/D와 Isl1은 Gli3-/- 생쥐에서 정상 생쥐에 비해서 그 발현이 지연되었다. 전구세포에서 신경세포로의 분화를 유도하는 Ngn2의 발현도 Gli3-/- 생쥐에서 정상 생쥐에 비해서 지연되었다. HuC/D, Isl1 그리고 Ngn2의 발현 결과들은 Gli3-/- 생쥐의 등쪽신경관에서 신경분화가 지연되었음을 의미한다. 이상의 결과들는 Gli3가 등쪽신경관에서 신경전구세포의 세포분열과 분화에 관여함을 의미한다. Essential roles of Gli3 in ventral neural tube have been stressed from studies of Shh-/- and Shh-/-; Gli3-/- mutants. However, roles of Gli3 in dorsal neural tube have not been fully appreciated despite of its high expression. To find out roles of Gli3 in dorsal neural tube, we studied cell proliferation and neuronal differentiation in dorsal neural tube of Gli3-/- mutant. In Gli3-/- mutant, proliferation of progenitor cells in dorsal neural tube is increased compared to wild type embryos based on phosphohistone 3 immunohistochemistry and BrdU experiment. The appearances of HuC/D positive and Isl1 postive cells which represent postmitotic neurons and dI3 interneurons were delayed in Gli3-/- mutant compared to wild type embryo. The appearance of a proneural gene, Ngn2 was also delayed in Gli3-/- mutant compared to wild type embryo. Neuronal differentiation of progenitor cells in dorsal neural tube was delayed in Gli3-/- mutant compared to wild type embryos based on HuC/D, Isl1 and Ngn2 expressions. These results suggest that Gli3 plays important roles in cell proliferation and neuronal differentiation in dorsal neural tube. Thus our data shed a new light on the role of Gli3 in the development of neural tube.

흰쥐 가슴샘상피세포 아형의 미세구조학적 특성

김봉선(Bong-Seon Kim),이경희(Kyeong-Hee Lee),이희우(Hee-Woo Lee),김재봉(Jae-Bong Kim),김성일(Sung-Il Kim),윤 식(Sik Yoon) 대한해부학회 2003 Anatomy & Cell Biology Vol.36 No.4

Thymic epithelial cells constitute a major component of the thymic microenvironment. The thymus is involved in the regulation of the proliferation, maturation and differentiation of thymocytes. There is some controversy about the classification of thymic epithelial cell types. Traditionally, thymic epithelial cells have been divided into cortical and medullary epithelial cell types. In general, the thymic epithelium can be broadly subdivided into subcapsular, cortical and medullary epithelial cells, and Hassall’s corpuscles by immunocytochemical methods. Although a few studies were performed on the ultrastructural characteristics of the different types of thymic epithelial cells, there is still some controversy about the classification of thymic epithelial cell subsets. Thus, the present study was performed to investigate the ultrastructural features of thymic epithelial cell subsets in adult male Sprague-Dawley rats, which are the most commonly used species of rat for biological researches, using transmission electron microscopy to shed more light on the heterogeneity of thymic epithelial cells. On the basis of ultrastructural features, we could identify and classify eight subsets of epithelial cells in normal rat thymus. In particular, this study provided a clear and easy way to identify the type 3 epithelial cells by their characteristic ‘perinuclear arrangement pattern of relatively short bundles of tonofilaments’. This is an important finding since the type 3 epithelial cells has been considered to be the most difficult type to identify among various thymic epithelial cell types. The results of the present ultrastructural study of thymic epithelial cells provided more insight into the heterogeneity of thymic epithelial cells, and can contribute to the understanding of roles played by different types of thymic epithelial cells. 가슴샘상피세포는 가슴샘세포의 증식, 성숙 및 분화에 관여하는 가슴샘미세환경의 가장 주된 구성요소이다. 이전에는 가슴샘상피세포를 겉질상피세포 및 속질상피세포로 크게 두 종류로 구분하였으나, 현재에는 일반적으로 면역세포화학적 방법을 이용하여 피막밑상피세포, 겉질상피세포, 속질상피세포 및 가슴샘소체의 네 종류로 분류하는 방법을 널리 사용하 고 있다. 비록 전자현미경을 이용하여 이를 더 세부적으로 분류하고자 하는 여러 시도가 있어왔지만, 아직 이들 각 아형에 대한 자세한 미세구조학적 특성 및 이러한 특성에 따른 세부적인 분류방법이 체계적으로 정립되어 있지 않은 실정이다. 본 연구는 투과전자현미경을 이용하여 Sprague-Dawley계 성체 웅성 흰쥐 가슴샘상피세포의 미세구조학적 특성을 자세히 관찰하고 이러한 미세구조학적 특성에 따라 가슴샘상피세포를 세분하고자 시도되었다. 본 연구결과 미세구조학적 특징에 따라 흰쥐 가슴샘상피세포를 8가지 아형으로 세분할 수 있었다. 제1형은 피막밑/사이 막옆/혈관주위에 위치하였으며, 제2형은 가슴샘겉질에 널리 분포하며 전자밀도가 매우 낮은 핵을 가지고 있었다. 제3형도 대부분 가슴샘겉질에 분포하고 있었으며, 제2형과 제4형 사이의 중간 정도의 미세구조학적 특성을 지니고 있었다. 제4형 은 주로 가슴샘겉질에 분포하고 있었으나 가끔 가슴샘속질에도 분포하였으며 세포질과 핵이 모두 높은 전자밀도를 가지 는 것이 특징적인 소견이었다. 제5~8형은 모두 가슴샘속질에 분포하였다. 제5형은 다소 미분화된 세포의 형태학적 특징 을 지녔고, 제6형은 다른 종류의 가슴샘상피세포보다 크기가 매우 컸으며 대부분 세포질내에 포도송이 모양의 액포집합 체를 포함하고 있었다. 제7형은 세포질 돌기가 매우 잘 발달하였으며 세포질돌기내에는 매우 잘 발달된 당김미세섬유를 함유하고 있는 것이 매우 특징적인 소견이었다. 제8형은 가슴샘소체를 형성하고 있는 가슴샘상피세포이었다. Sprague-Dawley계 흰쥐는 일반적으로 가장 널리 사용되고 있는 실험동물이기 때문에 본 연구의 결과는 향후 흰쥐 가 슴샘의 미세구조학적 연구에 중요한 참고자료가 될 뿐만 아니라, 나아가 흰쥐 가슴샘을 실험대상으로 하는 여러 형태학적 혹은 기능적 연구에도 중요한 기초자료를 제공해 줄 수 있을 것이다.

흰쥐 가슴샘 재생과정에서 CD70의 발현 특성

김성민(Sung-Min Kim),김미나(Mi-Na Kim),이희우(Hee-Woo Lee),김봉선(Bong-Seon Kim),김재봉(Jae-Bong Kim),윤 식(Sik Yoon) 대한해부학회 2006 Anatomy & Cell Biology Vol.39 No.6

CD70은 TNF superfamily에 속하는 제2형 막당단백질로써 주로 큰포식세포, 활성화된 T 세포 그리고 B 세포에서 발현된다. CD70은 T 및 B 세포와 NK 세포에서 주로 발현되는 TNF receptor superfamily에 속하는 CD27과 결합함으로써 면역반응 동안에 림프구의 증식, 분화, 성숙 그리고 이동을 조절한다. 본 연구에서는 흰쥐에 cyclophosphamide (CY)를 투여하여 가슴샘의 급성 퇴축을 유발시킨 후, 가슴샘 재생과정 동안에 면역조직화학, 이중면역형광조직화학 및 역전사 중합효소 연쇄반응법을 이용하여 CD70의 발현 특성을 관찰하였다. 역전사 중합효소 연쇄반응 분석 결과, 가슴샘속질수지상세포주, DC2.4 세포주 및 RAW264.7 세포주에서 CD70의 발현을 확인하였다. 면역조직화학염색 결과, 정상 및 재생중의 흰쥐 가슴샘에서는 CD70이 큰 포식세포에서 발현되었고, 이들은 주로 가슴샘겉질에 분포하였을 뿐만 아니라 가슴샘 재생과정 동안 CD70 양성반응 세포들의 수와 크기가 현저하게 증가하였다. 또한 재생중의 가슴샘으로부터 분리한 가슴샘세포와 가슴샘 바탕질세포에서 CD70 mRNA 발현이 정상 대조군에 비해 증가하는 것을 확인하였다. 따라서 본 연구의 결과는 가슴샘 재생과정 동안 CD70이 그 수용체인 CD27을 통해 가슴샘 재생에 중요한 역할을 수행할 것이라는 사실을 시사해준다 The thymus is the central lymphoid organ for development of bone marrow-derived precursor cells into mature T-cells. The thymic stroma provides the specialized microenvironment for the proliferation, differentiation, and maturation of the immature T-cells, thymocytes. The CD27 is a tumor necrosis factor (TNF) receptor family member whose expression is limited to cells of the lymphoid lineage. CD70, the ligand of CD27, is a TNF related trans-membrane protein induced upon activation on T and B cells, dendritic cells and macrophages. CD70/CD27 interaction plays a key role in T dependent B cell responses and is responsible for plasma cell differentiation. This study was performed to investigate the expression of CD70 during regeneration following acute involution induced by cyclophosphamide (CY) in the rat thymus using RT-PCR analysis and single and double immunohistochemistry. The results from RT-PCR analysis showed that CD70 is expressed in mouse thymic medullary interdigitating (IDC)-like cells (MDC), DC2.4 and Raw264.7 but not expressed in the mouse thymic epithelial cells (subcapsular/cortex epithelial cells, cortical epithelial cells and medullary epithelial cells). Interestingly, upregulation of CD70 expression was observed in the thymic stromal cells and thymocytes isolated from rat thymus during thymus regeneration. Furthermore, immunohistochemistry demonstrated that CD70 was mainly expressed in the ED1 positive macrophages predominantly in the thymic cortex both in the normal thymus and during thymus regeneration. In line with the data obtained by biochemical analysis, CD70 immunoreactive macrophages is increased both in number and in size during thymus regeneration. Thus, the results of the present study suggest that CD70 expressed on the thymic macrophages could play a role in the development of new T cells to replace T cells damaged by cyclophosphamide treatment during thymus regeneration.