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돼지 신장의 Angiotensin I Converting Enzyme cDNA 클로닝
윤장호,윤주억,홍광원,Yoon, Jang-Ho,Yoon, Joo-Ok,Hong, Kwang-Won 한국응용생명화학회 2006 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.49 No.4
포유류의 조직에 널리 분포되어 있으며 혈압 조절에 중요한 역할을 하는 Angiotensin-converting enzyme(ACE)은 아연을 함유하는 dipeptidase로서 angiotensin I을 가수분해하여 강력한 혈압상승제인 angiotensin II를 생성하는 효소이다. 최근에 돼지의 난소에서 ACE 활성이 측정되었으며, 돼지의 신장에서 ACE 단백질이 분리되어 그 특성이 알려졌다. 그러나 돼지의 어떠한 ACE DNA 염기서열도 아직까지 보고 된 바는 없다. 그러므로 본 연구에서 reverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR)을 이용하여 돼지의 신장 ACE cDNA를 클로닝하고 그 염기서열을 분석하였다. ACE cDNA는 1309개의 아미노산으로 구성되어 있으며 그 분자량은 150kDa이다. 염기서열로부터 유추한 아미노산의 서열을 분석한 결과, N 말단의 33개 아미노산이 signal peptide 역할을 하는 것으로 보이며, C 말단 근처의 짧은 transmembrane 영역은 세포막에 anchor역할을 하는 것으로 보인다. 돼지 신장의 ACE에서 두 개의 매우 유사한 amino acid peptidase domain은 tandem duplication 되어 있으며, 각각의 domain은 다른 포유류의 체세포 ACE들과 마찬가지로 putative metal-binding site(His-Glu-Met-Gly-His)를 하나씩 가지고 있는 것으로 나타났다. 돼지 신장 ACE 서열과 인간, 토끼, 쥐 등과 같은 포유류의 ACE 아미노산 서열들과의 상동성 비교는 진화과정 중 두 domain이 매우 잘 보전되어 왔음을 보여주고 있다. Angiotensin converting enzyme(ACE) is a zinc-containing dipeptidase widely distributed in mammalian tissues and is thought to play a significant role in blood pressure regulation by hydrolyzing angiotensin I to the potent vasoconstrictor, angiotensin II. Recently, the presence of ACE in pig ovary was reported and the ACE from pig kidney was isolated and characterized. However no nucleotide sequence of the ACE gene from pig is yet known. We report here the cloning of the ACE cDNA from pig kidney by using the reverse transcriptase-polymerase chain reaction. The complete amino acid sequence deduced from the cDNA contains 1309 residues with a molecular mass of 150 kDa, beginning with a signal peptide of 33 amino acids. Amino acid sequence analysis showed that pig kidney ACE is also probably anchored by a short transmembrane domain located near the C-terminus. This protein contains a tandem duplication of the two homologous amino acid peptidase domain. Each of these two domains bears a putative metal-binding site (His-Glu-Met-Gly-His) identified in mammalian somatic ACE. The alignment of pig ACE amino acid sequence with human, rabbit, and mouse reveals that both two domains have been highly conserved during evolution.
경영혁신 응용플랫폼을 통한 혁신활동지원 환경조성 : IT기업 창업에 활용 가능한 사례연구
윤장호(Yoon, Jang-ho),김재윤(Kim, Jaeyun),이수현(Lee, Soo-Hyun) 한국창업학회 2021 한국창업학회지 Vol.16 No.1
본 연구에서는 국내기업의 특성에 최적화된 혁신활동지원체계를 수립하기 위하여 실행중심의 구체적인 방법론을 도출하며, IT기업에 적용한 사례를 제시한다. 이를 위하여 많은 기업들이 도입하였던 경영혁신기법들을 IT기업 관점에서 해석하고, 다양한 혁신기법들의 융합적 활용 관점에서 접근해 보고자 한다. 특히, 본 연구에서는 실무 경영활동을 중심으로 일상적인 경영혁신활동을 수행할 수 있도록 경영혁신 응용플랫폼(Management Innovation Application Platform)을 설계 및 제안하고, 제안한 응용플랫폼의 성과를 통계적으로 분석하였다. 본 연구결과는 혁신적인 IT 기업 창업의 혁신활동지원 환경 조성에 활용 가능하고, 창업관련 활동에 유용한 시사점을 제공할 수 있으며, 기업에 적합한 경영혁신시스템으로 발전시킬 수 있는 실증연구의 계기를 마련하는데 좋은 방법론으로 활용될 수 있을 것으로 기대한다. We propose a methodology focused on business activities and present a case result applied to IT enterprises for establishing an innovation activity support system optimized for the characteristics of an enterprise, To this end, we interpret the management innovation techniques introduced by many enterprises in the viewpoint of the IT enterprises and approach them from the perspective of combined usage of various innovation techniques. In particular, in this study, a Management Innovation Application Platform is designed and suggested to enable daily management innovation activities centered on practical management activities, and the performance of the proposed application platform was statistically analyzed. This research result is expected to be used as a good methodology for domestic enterprises to create an environment to support innovative IT start-ups, provide useful implications for start-up-related activities, and develop into a suitable management innovation system for enterprises.
400km/h급 고속철도 인프라 기술의 직 · 간접편익 분석
윤장호(Jang-ho Yun),엄기영(Ki-young Eum),윤희택(Hee-Taek Yoon),류성찬(Seong-chan Ryu) 한국철도학회 2013 한국철도학회 학술발표대회논문집 Vol.2013 No.5
최근 연구개발의 경제성에 대한 정책적 관심이 증가하고 있다. 이러한 관심을 반영하여 일정규모 이상의 연구과제는 의무적으로 경제성 평가를 포함한 예비타당성 평가를 실시하도록 하고 있다. 본 연구는 국가연구개발사업으로 추진되는「400km/h급 고속철도 인프라 시범적용 기술개발」을 대상으로 직접편익과 간접편익을 추정하고 이를 바탕으로 경제성 분석을 실시하였다. 분석결과 고속철도 인프라 연구개발을 통한 직접편익의 경제적 가치는 약 835.6억원으로 추산되었다. 또한 간접편익도 약 643.8억원의 경제적 가치를 지니고 있는 것으로 추정되었다. 이러한 결과는 고속철도 인프라를 구성하는 다양한 세부 기술들의 가치를 종합적으로 고려하여 이루어진 분석이라는 점에서 큰 의미를 가진다. Political interest on Economic Feasibility has been increasing gradually. Reflected on this trend, recently, the feasibility study obligatorily including Economic Evaluation needs to be conducted. This study is to analyze economic effects with estimated direct and indirect benefits of “Development of infra Technology for 400 km/h High Speed Rail” which is the one of the National R&D projects. According to the analysis, the economic value of the direct benefits generated by researching and developing High Speed Rail Infrastructure amount to around $7.4 m. Also, in the case of the indirect one is worth around $5.7 m. In conclusion, based on the results from the study, We, obviously, can see and notice the crucial of the research on the area, Development of infra Technology for High Speed Rail.
대장균에서 Bacillus subtilis glutamyl-tRNA synthetase의 과발현 및 정제
오종신,윤장호,홍광원,Oh, Jong-Shin,Yoon, Jang-Ho,Hong, Kwang-Won 한국응용생명화학회 2002 한국농화학회지 Vol.45 No.4
Bacillus subtilis의 glutamyl-tRNA synthetase(GluRS)는 대장균에서 발현될 때 숙주세포의 $tRNA_1^{Gln}$에 glutamate를 잘못 아실화하여 독성을 나타내는 것으로 추정되고 있다. 이러한 B. subtilis GluRS를 대장균에서 과발현 시키기 위하여 B. subtilis 168 균주의 chromosomal DNA에서 GluRS의 유전자(gltX)를 PCR을 이용하여 증폭하고 T7 promoter에 의해 발현이 조절되는 pET11a expression vector에 클로닝하였다. 이 재조합된 pEBER plasmid DNA로 T7 RNA polymerase를 갖는 대장균 NovaBlue(DE3)에 형질전환하였다. 형질전환된 대장균에 IPTG를 처리하여 과량 생성된 GluRS 단백질은 ammonium sulfate 분별침전 후 EPLC를 이용한 Source Q column anion exchange chromatography, Superdex 200 column gel filtration, Mono Q column anion exchange chromatography로 정제하였다. 정제된 B. subtilis의 GluRS 분자량은 약 55 kDa이었으며 효소의 활성도는 조효소액에 비해 18배로 증가하였다. Expression of Bacillus subtilis glutamyl-tRNA synthetase (GluRS) in Escherichia coli is lethal for the host, probably because this enzyme misaminoacylates ${tRNA_l}^{Gln}$ with glutamate in vivo. In order to overexpress B. subtilis GluRS, encoded by the gltX gene, in E. coli, this gene was amplified from B. subtilis 168 chromosomal DNA using PCR method and the entire coding region was cloned into a pET11a expression vector so that it was expressed under the control or the T7 Promoter. The resulting recombinant pEBER plasmid was transformed into E. coli Novablue (DE3) bearing the T7 RNA polymerase gene for expression. After IPTG treatment, the overproduced enzyme was purified using ammonium sulfate fractionation, Source Q anion exchange chromatography, Superdex-200 gel filtration, and Mono Q anion exchange chromatography. The purified enzyme yielded 18-fold increase in specific activity over the crude cell extract and its molecular weight was approximately 55 kDa on SDS-PAGE.