Simultaneous Detection of Seven Phosphoproteins in a Single Lysate Sample during Oocyte Maturation Process

윤세진,김윤선,김경화,윤태기,이우식,이경아,Yoon, Se-Jin,Kim, Yun-Sun,Kim, Kyeoung-Hwa,Yoon, Tae-Ki,Lee, Woo-Sik,Lee, Kyung-Ah The Korean Society for Reproductive Medicine 2009 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.36 No.3

목 적: 단백질 인산화는 세포신호전달에 매우 중요한 현상으로서, 수많은 조절인자들이 난자성숙에 관여하게 된다. 그러나 이들 중에서 어떤 단백질이 인산화되어 난자성숙을 조절하는지는 잘 알려져 있지 않다. 따라서 체세포의 신호전달과정에서 인산화를 통해 중요한 기능을 한다고 알려져 있는 일곱 가지 단백질들이 생쥐의 난자성숙과정에서 어떻게 인산화 되고 있는지 알아보고자 한 개 샘플에서 일곱 개의 변화를 한꺼번에 측정할 수 있는 bead-based multiplex phosphorylation assay를 이용하여 본 연구를 수행하였다. 연구방법: ICR 생쥐에 PMSG를 주사하고 46시간 후에 cumulus-oocyte complex (COCs) 형태로 미성숙 난자를 채취한 후 체외배양 하면서, 배양 2시간 후에 GVBD를, 배양 8시간 후에 MI을, 배양 16시간 후에 MII 단계의 난자를 얻었고 체내에서 배란한 MII 단계의 난자는 수란관에서 얻었다. 각 단계의 난자를 100개씩 모아서 mitogen-activated protein kinase (MAPK)에 속하는 세가지 단백질인 ERK1/2, JNK, p38 MAPK와 Akt, GSK-$3{\alpha}/{\beta}$, $I{\kapa}B{\alpha}$, STAT3 등 총 일곱 단백질의 인산화를 Bio-Plex System을 이용하여 같은 시료에서 동시에 측정하였으며 세 번의 반복실험을 통하여 얻어진 결과를 통계적으로 분석하였다. 결 과: 생쥐의 난자성숙과정에서 측정된 일곱 가지 단백질 중에서 인산화가 현저히 증가하는 단백질로는 ERK1/2, JNK, p38 MAPK와 STAT3로서 미성숙 난자에 비해서 3배에서 20배까지 인산화되는 결과를 보였다. 반면에 GSK-$3{\alpha}/{\beta}$, $I{\kappa}B{\alpha}$의 인산화의 변화는 미약하였으며, Akt의 경우에는 변화가 전혀 없었다. 난자성숙 과정에서 분석 대상 단백질들의 인산화는 GVBD 단계에서 활성화되기 시작하여 MI에서 현저히 높게 증가하며 MII까지 높게 유지되었다. 결 론: 본 연구는 난자성숙과정에서 일곱 가지 단백질의 인산화를 동시에 측정한 최초의 보고로서 이 방법은 난자와 같이 적은 양의 시료에서의 여러 개의 단백질 인산화를 동시에 분석하는데 유용할 것으로 생각된다. 본 연구결과, 세 가지 MAPK 단백질인 ERK1/2, JNK, p38 MAPK 외에도 STAT3가 난자성숙에 있어서 매우 중요한 조절자로 생각되었다. 또한 Akt의 473번 serine기의 인산화는 난자성숙에 관여하지 않음을 알 수 있었다. Objective: Phosphorylation and dephosphorylation of proteins are important in regulating cellular signaling pathways. Bead-based multiplex phosphorylation assay was conducted to detect the phosphorylation of seven proteins to maximize the information obtained from a single lysate of stage-specific mouse oocytes at a time. Methods: Cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured for 2 h, 8 h, and 16 h, respectively to address phosphorylation status of seven target proteins during oocyte maturation process. We analyzed the changes in phosphorylation at germinal vesicle (GV, 0 h), germinal vesicle breakdown (GVBD, 2 h), metaphase I (MI, 8 h), and metaphase II (MII, 16 h in vitro or in vivo) mouse oocytes by using Bio-Plex phosphoprotein assay system. We chose seven target proteins, namely, three mitogen-activated protein kinases (MAPKs), ERK1/2, JNK, and p38 MAPK, and other 4 well known signaling molecules, Akt, GSK-$3{\alpha}/{\beta}$, $I{\kappa}B{\alpha}$, and STAT3 to measure their phosphorylation status. Western blot analysis and kinase inhibitor treatment for ERK1/2, JNK, and Akt during in vitro maturation of oocytes were conducted for the confirmation. Results: Phosphorylation of ERK1/2, JNK, p38 MAPK and STAT3 was increased over 3 folds up to 20 folds, while phosphorylation of the other three signal molecules, Akt, GSK-$3{\alpha}/{\beta}$, and $I{\kapa}B{\alpha}$ was less than 3 folds. All of these results except for Akt were statistically significant (p<0.05). Conclusion: This is the first report on the new and valuable method measuring many phosphoproteins simultaneously in one minute sample such as oocyte lysates. All of the three MAPKs, ERK1/2, JNK, and p38 MAPK are involved in the process of mouse oocyte maturation. In addition, STAT3 might be important regulator of oocyte maturation, while Akt phosphorylation at Serine 473 may not be involved in the regulation of oocyte maturation.

현실과 예술, 그 '사이'의 비평

윤세진(Yun, Se-Jin) 한국근현대미술사학회 2006 한국근현대미술사학 Vol.17 No.-

난자-난구세포 복합체에서 발현하는 Rpia 유전자의 종 특이적 발현

김윤선,윤세진,김은영,이경아,Kim, Yun-Sun,Yoon, Se-Jin,Kim, Eun-Young,Lee, Kyung-Ah 대한생식의학회 2007 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.34 No.2

목 적: 본 연구진은 선행연구를 통하여 생쥐의 미성숙 난자와 성숙 난자 사이에 차이 나게 발현하는 유전자(DEGs)의 목록을 보유하고 있는데, 그 중에서 pentose phosphate pathway (PPP)에 필수적 효소인 Ribose 5-phosphate isomerase A (Rpia)를 선택하여 본 연구를 수행하였다. 난자 성숙 과정에 관련된 Rpia의 기능을 알아보기 위한 기초연구로서 생쥐와 돼지의 난소에서 Rpia의 발현을 비교분석 하였다. 연구방법: 생쥐의 각 조직에서 11개의 MII-selective DEGs의 발현을 RT-PCR방법으로 확인하여 난소에서 강하게 발현하는 4개의 유전자를 선택하였고, 다시 이들 4개 유전자 중 난자에서 높게 발현하는 Rpia를 선택하여 생쥐 및 돼지의 난자, 난구세포, 과립세포에서의 발현을 비교분석 하였다. 돼지 Rpia 염기서열은 밝혀져 있지 않아 EST clustering 기법을 통해 동정하였다. 결 과: EST clustering 기법으로 찾아낸 돼지 Rpia 염기서열은 GenBank에 등록하였고 (Accession Number EF213106), 이를 근거로 primer를 작성하여 RT-PCR을 수행하였다. Rpia 유전자는 생쥐에서는 난자 특이적으로 발현하는 반면 돼지에서는 난자, 난구세포, 과립세포에서 모두 발현하는 차이점을 발견하였다. 결 론: 본 연구는 생쥐와 돼지의 난소에서 Rpia유전자 동정에 대한 첫 보고로서, 본 연구결과로부터 생쥐와 돼지의 COCs는 서로 다른 경로로 포도당의 대사가 일어나는 것을 알 수 있었다. 따라서 이와 같은 차이점이 두 종의 난자를 체외 배양할 때 나타나는 난자 성숙률의 차이를 가져오는 기전 중의 하나가 아닐까 추측된다. 난자 성숙을 조절하는 기전을 연구함과 동시에 체외에서 난자 성숙이 어려운 종의 최적의 IVM (in vitro maturation)조건을 찾기 위해서는 앞으로 난자와 주변세포의 포도당 대사과정에 미치는 Rpia의 기능에 대한 후속연구가 필요할 것으로 사료된다. Objective: We previously identified differentially expressed genes (DEGs) between germinal vesicle (GV) and metaphase II (MII) mouse oocyte. The present study was accomplished as a preliminary study to elucidate the role of ribose 5-phosphate isomerase A (Rpia), the essential enzyme of the pentose phosphate pathway (PPP), in oocyte maturation. We observed expression of Rpia in the mouse and porcine oocytes. Methods: Expression pattern of the 11 MII-selective DEGs in various tissues was evaluated using RT-PCR and selected 4 genes highly expressed in the ovary. According to the oocyte-selective expression profile, we selected Rpia as a target for this study. We identified the porcine Rpia sequence using EST clustering technique, since it is not yet registered in public databases. Results: The extended porcine Rpia nucleotide sequence was submitted and registered to GenBank (accession number EF213106). We prepared primers for porcine Rpia according to this sequence. In contrast to the oocyte-specific expression in the mouse, Rpia was expressed in porcine cumulus and granulosa cells as well as in oocytes. Conclusion: This is the first report on the characterization of the Rpia gene in the mouse and porcine ovarian cells. Results of the present study suggest that the mouse and porcine COCs employ different mechanism of glucose metabolism. Therefore, the different metabolic pathways during in vitro oocyte maturation (IVM) in different species may lead different maturation rates. It is required to study further regarding the role of Rpia in glucose metabolism of oocytes and follicular cell fore exploring the regulatory mechanism of oocyte maturation as well as for finding the finest culture conditions for in vitro maturation.

음영분석에 의한 내시경 영상의 3차원 형체 추정에 관한 연구

이태수,차은종,윤세진,Lee, Tae-Su,Cha, Eun-Jong,Yun, Se-Jin 대한의용생체공학회 1995 의공학회지 Vol.16 No.4

위내시경 영상의 음영을 분석하여 내부 벽면의 3차원적인 형체를 추정하는 새로운 기법을 제안하였다. 이를 위해 우선 내시경의 기기적인 특성을 분석한 다음, 진단 대상이 되는 위벽면 자체의 특성으로 인해 내시경 영상의 특성을 분석하였다. 이를 사전정보로 하고, Horn의 변분법을 도입하여 반복적인 음영분석 알고리즘을 구현하였다. 알고리즘의 타당성 여부를 증명하기 위하여 위모형에서 획득한 $512{\times}512$ 영상 중에서 $256{\times}320$을 대상으로 해서, 시뮬레이션을 수행하였다. 이때 Lagraniginan multiplier의 값이 0.3일 경우 알고리즘의 수렴성 및 전체오차 특성이 가장 좋았으며, 가장 정확한 위벽면의 재구성이 이루어짐을 보였다. A new numerical method estimated three dimensional shape of the internal surface of the stomach by analyzing the shading data of endoscopic image. First analyzed was the inherent instrumentational characteristics of the endoscope system, followed by the analysis of the stomach surface properties, both of which affected the imaging properties. We employed these prior informations to implement the iterative algorithm of shading analysis based on Hom's variational approach. The present algorithm was validated by performing simulation on a $256{\times}320$ image data chosen from original $512{\times}512$ image of the stomach surface model. The best 3-dimensional estimation of the surface was achieved with the Lagrangian multiplier, of 0.3, when the algorithm best converged showing minimal estimation error.

급성 췌장염에 의한 공장경색 및 천공

채지영 ( Chae Ji Yeong ),윤수인 ( Yun Su In ),배상석 ( Bae Sang Seog ),채희복 ( Chae Hui Bog ),박선미 ( Park Seon Mi ),윤세진 ( Yun Se Jin ),박진우 ( Park Jin U ),배일헌 ( Bae Il Heon ),김석형 ( Kim Seog Hyeong ),송형근 ( Song Hye 대한소화기학회 2004 대한소화기학회지 Vol.43 No.2

Jejunal infarction as a complication of acute pancreatitis is not common and can not be well recognized. This jejunal infarction usually arises from the venous thrombosis rather than arterial thrombosis. Jejunal infarction results in bowel perforation or stenosis according to its extension of injury and progression rate. Pathologic findings of the involved jejunum show a segmental transmural infarction and mesenteric venous thrombotic occlusions. Early diagnosis should be made for better prognosis. We report a patient with jejunal infarction resulting perforation due to acute pancreatitis, in which the initial presenting symptoms were hematemesis and abdominal distention. (Korean J Gastroenterol 2004; 43:120-124)

턱관절 장애 자각증상 및 관련요인

김수경,김연주,남정민,박정선,심미연,윤세진,정은서,Kim, Soo-Kyung,Kim, Yeon-Ju,Nam, Jung-Min,Park, Jeong-Sun,Sim, Mi-Yeon,Yun, Se-Jin,Jung, Eun-Seo 한국치위생학회 2017 한국치위생학회지 Vol.17 No.4

Objectives: This study aims to prove that stress directly or indirectly affects the jaw joint disorders and provide basic data for developing oral health promotion program. Methods: The study was conducted by distributing a questionnaire survey to more than 350 people from December 30, 2016 to January 7, 2017. Among them, 336 copies were collected and 314 copies were utilized eventually, except Section 314, for the final analysis. Regression analysis was performed to investigate the factors affecting temporomandibular joint disorders. Results: As a result, academic achievement and stress were found to affect the temporomandibular joint disorders. The higher the level of education and stress, the higher the subjective symptoms of jaw joint disorder. Conclusions: Because stress affects temporomandibular joint disorders, it is necessary to find out the cause of stress not only for professional treatment but also for solution of temporomandibular disorder. Thus, stress level must be conisdred as influential factors in developing a jaw joint disease prevention program.

대한간학회지 제8차 춘계학술대회 초록집 : 구연 ; 알코올대사효소의 유전적 다형성이 알코올성 간경변의 발생과 음주습관에 미치는 영향

기주영 ( Gi Ju Yeong ),채희복 ( Chae Ui Bog ),윤세진 ( Yun Se Jin ),김헌 ( Kim Heon ) 대한간학회 2002 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.8 No.2(S)

제5차 대한간학회 춘계학술대회 초록집 : 포스터 토의 순서 ; 특발성 세균성 복막염에 대한 Cefotaxime 5일 요법과 10일 요법의 비교

채희복 ( Chae Hui Bog ),이정아 ( Lee Jeong A ),박선미 ( Park Seon Mi ),윤세진 ( Yun Se Jin ) 대한간학회 1999 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.5 No.1(S)

대간간학회지 제6차 춘계학술대회 초록집 : 포스터 발표 ; Lamivudine 8개월 이상 투여 환자에서 치료효과와 YMDD motif 돌연변이 검출

김미성 ( Kim Mi Seong ),채희복 ( Chae Hui Bog ),최기원 ( Choe Gi Won ),박선미 ( Park Seon Mi ),윤세진 ( Yun Se Jin ) 대한간학회 2000 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.6 No.1(S)

직장 종괴의 형태로 재발된 성숙 난소기형종

최기원 ( Choe Gi Won ),전원중 ( Jeon Won Jung ),채희복 ( Chae Hui Bog ),박선미 ( Park Seon Mi ),윤세진 ( Yun Se Jin ),신향미 ( Sin Hyang Mi ),성노현 ( Seong No Hyeon ),이상전 ( Lee Sang Jeon ) 대한소화기학회 2003 대한소화기학회지 Vol.42 No.3

Mature teratoma is the most common germ cell tumor of the ovary. The tumor is essentially a benign neoplasm and surgical resection of the tumor is the treatment of choice. Recurrence with colorectal involvement after surgical removal of the primary lesion is exceedingly rare and has not been reported in Korea. We present a 43-year-old patient with a rectal mass who had already undergone left oophorectomy due to mature cystic teratoma and right oophorectomy due to hemorrhagic corpus luteum. The rectal mass was composed of a mature teratoma tissue. We postulate that leakage of the tumor elements from the cyst wall led to peritoneal tumor implantation and invasion to the rectal wall. (Korean J Gastroenterol 2003;42:242-245)