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      • Anti-Progesterone Monoclonal Antibody에 대한 Anti-Idiotype 항체의 불임효과에 관한 연구

        윤도영,남경수,이희구,이홍수,최명자,최인성,김종배,정태화,Yoon, Do-Young,Nam, Kyung-Soo,Lee, Hee-Gu,Lee, Hong-Soo,Choi, Myung-Ja,Choe, In-Seong,Kim, Jong-Bae,Chung, Tai-Wha 생화학분자생물학회 1991 한국생화학회지 Vol.24 No.6

        프로제스테론에 대한 단일클론항체(15A)를 항원으로 토끼의 anti-idiotypic antibody(anti-Id)를 생산한 후 분리 정제하였다. 또한 단일클론성 anti-Id를 분비하는 세포주를 개발하기 위해 15A를 Balb/c 생쥐에 면역주사 하였다. 그 후 항체를 생산하는 B lymphocyte와 myeloma 세포를 융합시켜 하이브리도마 세포를 만든 뒤 이들 중 anti-Id를 생산하는 3종류의 클론(G2, G9, H6)을 선별하였다. Anti-Id의 효소 면역측정법은 horseradish peroxidase(HRP)를 활성화시킨 후, 15A와 반응시켜 만든 15A-HRP를 사용하였다. Anti-Id의 불임에 미치는 효과를 control과 비교하여 본 결과, control로서 anti-mouse IgG를 투여한 그룹은 임선율이 86.7%로 높게 나타났으나, progesterone-BSA를 투여한 후 그룹은 임신율이 30.4%로 임신이 억제되었고, anti-Id를 주사한 그룹은 임신율이 45.5%이었다. 이 때 각 그룹에 속한 개체들의 프로제스테론에 대한 항체농도를 측정한 결과는 각각 $0.25{\mu}g/ml$, $3,500{\pm}950{\mu}g/ml$, 그리고 $31.3{\pm}7.4{\mu}g/ml$로 나타났다. 또한 anti-Id를 주사한 경우 임신한 쥐들의 경우($10.1{\pm}1.3{\mu}g/ml$) 보다도 임신하지 않은 쥐들에서 프로제스테론에 대한 항체 농도가 $43.8{\pm}6.1{\mu}g/ml$로 4배가량 높게 나타났다. 이와 같은 결과에서 anti-Id를 주사한 쥐들의 그룹에서 프로제스테론에 대한 항체의 농도와 임신억제 효과는 상관관계가 있음을 알 수 있었다. 본 실험의 결과를 종합해 볼 때 anti-Id를 주사한 그룹의 쥐들이 progesterone-BSA를 능동면역한 그룹의 쥐들보다 임신율은 높게 나타났으나, control 그룹의 임신율 86.7%와 비교할 때 현저한 피임효과를 나타냄으로써 anti-Id를 피임백신으로 사용할 수 있는 가능성을 보여 주었다. The active immunization of progesterone produces high titer antibodies. However, the progesterone itself binds to the receptor sites and produces the side effect on the contraceptive activities of the antibodies. Therefore, the anti-idiotypic antibody (anti-Id) was studied whether it had the same effect as the active immunization of progesterone to prevent pregnancy or not. If it has antifertility effect, it could be utilized as a contraceptive vaccine. The passive immunization of antibody to mice was previously studied and found that anti-progesterone monoclonal antibody prevents pregnancy by degenerating the embryos in the oviduct and uterus (Yoon et al., 1989). The polyclonal anti-Id was obtained by immunizing anti-progesterone monoclonal antibody (15A) to rabbit and then purified using affinity column chromatography. Furthermore, three different clones (G2, G9, H6) of monoclonal anti-Ids have been raised against anti-progesterone monoclonal antibody. The relationships between the antifertility effects and anti-progesterone antibody level were studied by the active immunization of anti-Id and progesterone-BSA. The results showed that a higher antifertility effect was observed with progesterone-BSA immunization (70%) than with anti-Id immunization (55%). The plasma level of anti-progesterone was as high as $3,500{\mu}g/ml$ with progesterone-BSA immunization. The comparison study of the antibody levels between pregnant ($10{\mu}g/ml$) and non-pregnant mice ($44{\mu}g/ml$) after immunization with the anti-Id indicates that antibody formation at a certain level prevents pregnancy. However, the antibody level is not proportional to the antifertility effect in mice.

      • SCIESCOPUSKCI등재

        Anti - Progesterone Monoclonal Antibody 에 대한 Anti - Idiotype 항체의 불임효과에 관한 연구

        윤도영,남경수,이희구,이홍수,최명자,최인성,김종배,정태화 ( Do Young Yoon,Kyung Soo Nam,Hee Gu Lee,Hong Soo Lee,Myung Ja Choi,In Seong Choe,Jong Bae Kim,Tai Wha Chung ) 생화학분자생물학회 1991 BMB Reports Vol.24 No.6

        The active immunization of progesterone produces high titer antibodies. However, the progesterone itself binds to the receptor sites and produces the side effect on the contraceptive activities of the antibodies. Therefore, the anti-idiotypic antibody (anti-Id) was studied whether it had the same effect as the active immunization of progesterone to prevent pregnancy or not. If it has antifertility effect, it could be utilized as a contraceptive vaccine. The passive immunization of antibody to mice was previously studied and found that anti-progesterone monoclonal antibody prevents pregnancy by degenerating the embryos in the oviduct and uterus (Yoon et al., 1989). The polyclonal anti-Id was obtained by immunizing anti-progesterone monoclonal antibody (15A) to rabbit and then purified using affinity column chromatography. Furthermore, three different clones (G2, G9, H6) of monoclonal anti-Ids have been raised against anti-progesterone monoclonal antibody. The relationships between the antifertility effects and anti-progesterone antibody level were studied by the active immunization of anti-Id and progesterone-BSA. The results showed that a higher antifertility effect was observed with progesterone-BSA immunization (70%) than with anti-Id immunization (55%). The plasma level of anti-progesterone was as high as 3,500 ㎍/㎖ with progesterone-BSA immunization. The comparison study of the antibody levels between pregnant (10 ㎍/㎖) and non-pregnant mice (44 ㎍/㎖) after immunization with the anti-Id indicates that antibody formation at a certain level prevents pregnancy. However, the antibody level is not proportional to the antifertility effect in mice.

      • KCI등재

        수평 다공성유체층에서 이온의 물질전달에 대한 이중확산대류 효과

        윤도영,김민찬,최창균,Yoon Do-Young,Kim Min Chan,Choi Chang Kyun 한국전기화학회 1999 한국전기화학회지 Vol.2 No.2

        In the present study, buoyant force and its stabilizing effects in an electrostatic field were examined systematically in order to reduce the effect of natural convection with thermal stratification in a horizontal fluid-saturated porous layer. The correlation of ionic mass transport induced by double-diffusive convection in a horizontal porous layer has been derived theoretically. And the theoretical model was examined by electrochemical experiments. The theoretical correlation for mass transport which is satisfying Forchheimer's flow equation and based on the micro-turbulence model is derived as a function of soltual Darcy-Rayleigh number, thermal Darcy-Rayleigh number and Lewis number. In the experiment, the mass transport of copper ions in $CuSO_4-H_2SO_4$ solution is measured by electrochemical technique. By assembling theoretical correlation and experimental results, the mass transport correlation induced by double-diffusive convection is proposed as $$Sh=\frac{0.03054(Rs_D-LeRa_D)^{1/2}}{1-3.8788(Rs_D-LeRa_D)^{-1/10}}$$ The present correlation looks flirty reasonable with comparing experimental results, and very promising for the applications of its prototype into various systems involving heat transfer as well as mass transfer, in order to control the effects of natural convection effectively. 본 연구에서는 전기장에 의하여 유발되는 자연대류의 영향을 줄이기 위하여 수평 다공성 유체층에 열적 성충화를 유지하여 부력과 유체층의 안정화 효과를 체계적으로 조사하였다. 이를 위하여 수평 다공성 유체층에서 이중확산대류에 의한 물질전달 상관식을 이론적으로 유도하고, 전기화학 실험을 통하여 이론에 의한 모델을 보완하였다. 물질전달 상관식은 다공성 매질층에 대한 유동 방정식으로 Forchheimer모델을 사용하고 미세 난류 모델을 적용하여, 용질 및 열 Darcy-Rayleigh수와 Lewis 수로 유도하였다. 실험에서는 다공성매질에 포화된 황산구리황산용액내의 구리이온을 전기 화학적 방법을 통하여 확산 또는 자연대류에 의한 물질전달 실험을 수행하였다. 이론 및 실험적 해석 결과를 종합하면 다공성 매질 내에서 구리이온의 이중확산대류에 의한 물질전달 상관식은 다음과 같다. $$Sh=\frac{0.03054(Rs_D-LeRa_D)^{1/2}}{1-3.8788(Rs_D-LeRa_D)^{-1/10}}$$ 본 연구의 결과는 실험치와 잘 부합되었으며, 모델식의 원형은 열 및 물질전달계에서 자연대류의 영향을 효과적으로 제어할 수 있는 방안으로 활용될 수 있을 것이다.

      • Production, Purification and Characterization of Monoclonal Antibodies Specific to Progesterone

        윤도영,최상훈,최명자,최인성,정태화,Yoon, Do-Young,Choi, Sang-Hoon,Choi, Myung-Ja,Choe, In-Seong,Chung, Tai-Wha Korean Society for Biochemistry and Molecular Biol 1991 한국생화학회지 Vol.24 No.1

        Progesterone-$11{\alpha}$-hemisuccinate-BSA를 제조하여 Balb/c 생쥐에 주사하여 얻은 비장세포를 myeloma 세포와 융합하여 여러 가지 subtype 형태($IgG_1$, $IgG_{2a}$, $IgG_{2b}$, IgM)를 가진 항체를 분비하는 7개의 하이브리도마 세포주를 얻었다. 이들이 분비하는 항체들을 간단히 ammonium sulfate 침전법, Protein A-Sepharose 4B 등으로 분리정제하여 그 특성을 조사하였다. 그 결과 단일클론 항체가 18-44% 정도의 수률로 SDS-PAGE상에서 순수분리 되었음을 확인하였다. 이들 항체들의 affinity constant는 $5{\times}10^7-4{\times}10^8M^{-1}$ 정도였으며, 이들 항체들은 Progesterone-3-(O-carboxymethyloxime)-BSA를 면역원으로 하여 얻은 항체와 비교했을 때, 특이성과 다른 steroid 호르몬과 교차반응성 등이 클론에 따라 특이하게 나타났다. 특히 이들 항체 중 051-01 clone은 다른 clone에 비해 매우 빠른 성장을 보였으며, 항체의 양이 복수액의 전체 단백질의 38% 정도나 되어 titer level이 매우 높았으며, 방사면역측정법이나 효소면역측정법으로 반응성을 측정했을 때 그 감도가 매우 좋았다. Seven hybridoma cell lines, 051-01 ($IgG_1$), 051-02 ($IgG_{2b}$), 051-03 ($IgG_1$), 051-04 (IgM), 051-05 ($IgG_{2a}$), 051-06 (IgM), and 051-07 ($IgG_{2a}$) prodcing monoclonal antibodies against progesterone were established. Progesterone $11{\alpha}$-hemisuccinate-bovine serum albumin conjugate was prepared using carbodiimide and then used as an immunogen. Spleen cells of Balb/c mice immunized with the immunogen were fused with mouse myeloma (P3-X63-Ag8.653) cells. Hybridoma cells were screened by radioimmunoassay using $^3H$-progesterone. The clones 051-01, 051-03, and 051-05 were purified using protein A-Sepharose 4B affinity chromatography utilizing their subtype characteristics. The purity of the isolated IgG was identified by SDS-PAGE. The progesterone binding capacity of the 5 monoclonal antibodies ranged from 7 to 72 pmole/mg IgG and the affinity constant ranged from $5.0{\times}10^7\;M^{-1}$ to $4{\times}10^8\;M^{-1}$ by the Scatchard analysis method. Cross-reactivities of the monoclonal antibodies, 051-01 and 051-02 with other steroid hormones were compared. These antibody reactions were very specific to progesterone and sensitive in a competitive immunoassay.

      • SCIESCOPUSKCI등재

        프로제스테론 단일클론 항체의 생산과 정제 및 특성연구

        윤도영,최상훈,최명자,최인성,정태화 ( Do Young Yoon,Sang Hoon Choi,Myung Ja Choi,In Seong Choe,Tai Wha Chung ) 생화학분자생물학회 1991 BMB Reports Vol.24 No.1

        Seven hybridoma cell lines, 051-01 (IgG₁), 051-02 (IgG_(2b)), 051-03 (IgG₁,), 051-04 (IgM), 051-05 (IgG_(2a)), 051-06 (IgM), and 051-07 (IgG_(2a)) prodcing monoclonal antibodies against progesterone were established. Progesterone llα-hemisuccinate-bovine serum albumin conjugate was prepared using carbodiimide and then used as an immunogen. Spleen cells of Balb/c mice immunized with the immunogen were fused with mouse myeloma (P3-X63-Ag8.653) cells. Hybridoma cells were screened by radioimmunoassay using ³H-progesterone. The clones 051-01, 051-03, and 051-05 were purified using protein A-Sepharose 4B affinity chromatography utilizing their subtype characteristics. The purity of the isolated IgG was identified by SDS-PAGE. The progesterone binding capacity of the 5 monoclonal antibodies ranged from 7 to 72 pmole/㎎ IgG and the affinity constant ranged from 5.0×10^7 M^(-1) to 4×10^8 M^(-1) by the Scatchard analysis method. Cross-reactivities of the monoclonal antibodies, 051-01 and 051-02 with other steroid hormones were compared. These antibody reactions were very specific to progesterone and sensitive in a competitive immunoassay.

      • KCI등재

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