Role of Prostaglandin E in Modulating Immune Response in Lymph Nodes Draining the Uterus during the Implantation Period in Rats

조혜성,유경자,김창미,Cho, Hye-Seong,Ryu, Kyung-Za,Kim, Chang-Mee The Korean Society of Pharmacology 1989 대한약리학잡지 Vol.25 No.1

본 교실의 연구결과에 의하면 토끼와 흰쥐에서 수정란 착상시기에 peripheral lymphocyte와 thymocyte의 활성도가 저하될 뿐만 아니라 착상기간중 생성되는 prostaglandin E(PGE)의 생리적인 농도로도 peripheral lymphocyte와 thymocyte의 활성도가 억제되었다. 그러므로 본 연구에서는 흰쥐의 착상시기에 전신적인 면역기능 뿐만 아니라 국소적으로 DLN lymphocyte의 활성도가 억제되는지를 관찰하고 PGE가 어떠한 기전으로 모체의 면역기능을 억제하는가를 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 흰쥐의 착상시기에 DLN lymphocyte의 활성도가 임신하기 않은 흰쥐의 DLN lymphocyte에 비하여 통계적으로 유의하지는 않으나 저하되었으며 이러한 저하현상은 100% 흰쥐에서 관찰되었다. 2. 착상시기의 DLN lymphocyte에 prostaglandin 합성억제제인 indomethacin(ID)를 처리하면 DLN lymphocyte의 활성도가 통계적으로 유의하게 증가하였다. 그러나 임신하지 않은 흰쥐의 DLN lymphocyte의 활성도는 증가되어 있으나 $PGE_2$를 전처리하면 DLN lymphocyte의 활성도가 유의하게 억제되며 $PGE_2$를 전처치한 후 ID를 처리하면 DLN lymphocyte의 활성도가 $PGE_2$로 전처치하지 않고 ID를 처리한 경우에 비하여 유의하게 증가하였다. 그러나 $PGE_2$ 대신estradiol, progesterone 및 hCG를 전처치하였을 경우에는 ID 처리로 DLN lymphocyte의 활성도가 증가하지 않았다. 3. 임신하지 많은 흰쥐의 DLN lymphocyte에 $PGE_2$를 전처리하면 PGE-producing cell이 유도되어 PGE 생성이 증가하는지를 확인하기 위하여 $PGE_2$를 전처리하고 Con A를 처리한 후 배양액의 PGE를 정량한 결과 PGE를 전처리하지 않은 DLN lymphocyte에 비하여 유의하게 PGE 생성이 증가하였다. 이상의 결과로 보아 흰쥐의 착상시기에는 모체의 DLN lymphocyte의 활성도가 저하되며, 특히 PCE는 PGE-producing cell을 유도함으로써 착상시기의 모체의 면역기능에 영향을 주는 것으로 생각된다. In our previous studies, it was found that activities of maternal peripheral lymphocytes and thymocytes were depressed during the implantation period in rats and rabbits. This study was therefore attempted to clarify further this immunosuppression locally by determining lymphocyte response in lymph nodes draining the uterus (DLN) and to elucidate the mechanism by which prostaglandin E (PGE) modulates immune response during the implantation process in rats. As compared with non-pregnant rats, the response of DLN lymphocytes to concanavalin A (Con A) was depressed during the implantation period in 100% of rats studied. The activity of DLN lymphocytes depressed on day 8 of pregnancy was, however, restored partially by the treatment of indomethacin (ID), indicating that prostaglandin (PG) might be one of factors responsible for immunomodulation during the process of implantation. DLN lymphocyte activity in non-pregnant rats was suppressed if PGE was pre-treated prior to Con A and this suppression was partially restored by the treatment of ID. Furthermore, DLN lymphocytes pre-treated with PGE produced PGE in vitro and this PGE production was blocked by the treatment of ID, suggesting that PGE induced PGE-producing cells. However, the pretreatment of estradiol, progesterone, and hCG at doses enough to suppress lymphocyte activity was ineffective in inducing PGE-producing cells. From these results, it is suggested that PGE induces PGE-producing suppressor cells, thereby increasing PGE concentration and PGE in turn depresses maternal local immune response as well as systemic immune response during the implantation period in rats.

Depression of Maternal Immune Response during the Period of Implantation in Rabbits

조혜성,유경자,홍사석,Cho, Hye-Seong,Ryu, Kyung-Za,Hong, Sa-Suk The Korean Society of Pharmacology 1987 대한약리학잡지 Vol.23 No.2

본 실험에서는 가토에서 배반포가 자궁내막에 착상할 때, 모체의 면역기능의 변화를 알아보고, 착상시 관여하는 호르몬과 모체의 면역기능과의 연관성을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 임신 7일째 가토의 말초혈관 림프구에 concanavalin A를 처리하면, 임신하지 않은 가토의 림프구보다 훨씬 낮은 자극지수를 나타냄으로써 면역억제 현상이 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 2. 임신 7일 때의 혈청 progesterone농도인 11.56 ng/ml을 임신하지 않는 가토의 말초혈관 림프구에 처리하면, 억제현상을 나타내지 않았으나, Progesterone의 농도가 1000 ng/ml 이상에서는 농도에 비례하여 림프구의 활성도가 감소되었다. 3. 4.5 ng/ml${\sim}$4,500 ng/ml의 $PGF_{2{\alpha}}$는 concanavalin A처리시 림프구의 활성도에 별다른 영향을 끼치지 않았으나, PGE는 4.5 ng/ml${\sim}$4,500 ng/ml에서 농도에 비례하여 림프구의 활성도를 유의하게 감소시켰다. 그러나 임신 제 8일째의 말초혈관 림프구에 prostaglandin 합성 억제제인 indomethacin 0.1 또는 $1\;{\mu}g/ml$을 처리하면 억제되었던 림프구 활성도가 각각28%, 23% 증가되었다. 이상의 결과로 보아 토끼의 착상기간중 모체의 면역기능이 저하되며 PGE가 착상기간중 면역기능을 저하시키는 요소중 하나인 것으로 생각된다. We determined the maternal peripheral lymphocyte response to mitogen during the period of implantation and evaluated the effects of hormones, which are known to be involved in the process of implantation, on the lymphocyte activity in rabbits. As compared with peripheral lymphocyte activity in non-pregnant rabbits, lymphocyte activity was significantly depressed on days 6, 7 and 9 of pregnancy. Although concentrations of serum progesterone were gradually increased during the implantation period, progesterone did not inhibit lymphocyte activity at physiological concentration. Serum $PGF_{2{\alpha}}$ was significantly increased on day 7 while PGE was slightly increased. $PGF_{2{\alpha}}$ did not modify lymphocyte activity even with greater concentrations than physiological level. However, lymphocyte activity was significantly inhibited by PGE even with physiological doses. The treatment of indomethacin at doses of 0.1 or $1.0\;{\mu}g/ml$ tended to enhance lymphocyte response, which was depressed on day 8 of pregnancy, 28% or 23% respectively. Although in non-pregnant rabbit, enhancement of lymphocyte response was also shown after the treatment of indomethacin, this enhancement was much less than that in pregnant rabbits. These results strongly suggest that maternal immune response was depressed during the process of implantation and PGE might be one of factors for immunomodulation during this period.

초기 임신기간중 흰쥐의 자궁조직 분화와 Cyclic AMP 농도에 관하여

김성례,유경자,조완규,Kim, Sung-Rye,Ryu, Kyung-Za,Cho, Wan-Kyoo 대한생식의학회 1984 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.11 No.2

임신직후 자궁조직은 난소 스테로이드 호르몬에 의하여 분화한다. 착상전 여러 단계에 있는 자궁조직내의 cAMP의 함량을 측정함으로서 cAMP와 호르몬과의 관계를 규명할 목적으로 흰쥐를 재료로 해서 본 실험을 행하였다. 임신제 2일에 난소를 제거하고 즉시, 제3, 또는 제 4일에 estradiol과 progesterone 을 각각 혹은 동시에 주사한 뒤 대조군인 정상임신군, 난소제거군, 난소제거후 호르몬주사군의 자궁조직에서 cAMP농도를 competitive protein-binding assay로 측정하여 이를 각각 비교하였다. 본 연구결과는 다음과 같았다. 정상임신군인 경우 자궁조직이 분화해 갈수록 자궁조직내 cAMP의 농도는 낮아지고 있다. 난소제거군에서는 임신기간이 길수록 자궁조직내의 cAMP농도가 높아진다. 난소제거후 progesterone 혹은 progesterone 과 estradiol을 주사한 실험군에서는 임신 제 6일이 되면 cAMP 농도가 정상임신군과 난소제거군의 중간수치를 보여준다. 한편, estradiol 단독주사인 경우는 임신제3, 제6일의 자궁조직내의 cAMP의 농도는 크게 감소한다. 이처럼 estradiol의 영향아래 세포분열등 분화가 왕성한 자궁조직에서는 cAMP 농도가 크게 낮아지지만 자궁조직의 분화가 억제된 상태에서는 cAMP의 농도가 반대로 높아진다. 난자, 배아 또는 여러 형태의 세포에서처럼 cAMP의 농도는 세포의 대사에 크게 영향을 주고 있다는 것을 알 수 있었다. It has been well known that ovarian steroids, estradiol and progesterone play an important role in the endometrial preparation for the implantation process. The present investigation was undertaken to correlate function of ovarian steroids with cAMP concentrations in uterine tissues of rat during the various stages of the preimplantation period. Rats ovariectomized on day 2 were treated with estradiol or/and progesterone on day 3 or on day 4 and cAMP concentrations in uterine tissues were determined by competitive protein - binding assay in control - and steroid treated - ovariectomized rats. The results obtained are as follows; 1. In control rats, cAMP concentrations in uterine tissues were decreased with preimplantation period proceeded whereas cAMP concentrations were increased and showed the highest levels on day 6 in ovariectomized rats. 2. In rats treated with progesterone only or progesterone with estradiol after ovariectomy, cAMP concentrations on day 6 were lower than those of ovariectomized control but higher than those of intact control rats while estradiol only treatment decreased cAMP concentrations on day 3 and day 6, compared with those from intact- and ovariectomized-controls. It is, therefore, concluded that the concentrations of cAMP in uterine tissues were lower in estrogen-treated rats than in ovariectomized rats, suggesting the involvement of cAMP in the regulation of uterine tissue differentiation.

Regulation of $LH{\beta}$ subunit mRNA by Ovarian Steroid in Ovariectomized Rats

김창미,박덕배,유경자,Kim, Chang-Mee,Park, Deok-Bae,Ryu, Kyung-Za The Korean Society of Pharmacology 1993 대한약리학잡지 Vol.29 No.2

난소호르몬에 의하여 황체형성호르몬(luteinizing hormone; LH) subunit의 유전자 발현이 어떻게 조절되는가를 조사하기 위하여 성숙한 흰쥐에서 난소를 제거하거나 또한 난소호르몬을 재 투여한 후 ${\alpha}$ 및 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 수준을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 난소를 제거한 후 시간이 경과함에 따라 혈중 LH 농도 및 뇌하수체 LH 함량이 급격히 증가하였다. 또한 난소제거 후 14일 후부터 ${\alpha}$ subunit mRNA 수준이 증가하기 시작하였으며, $LH{\beta}$ subunit mRNA 수준은 난소제거 후 1일부터 증가하기 시작하여 혈중 LH 농도와 같은 양상으로 증가하였다. 2. 난소제거 후 21일 경과후에 난소호르몬을 투여하였을때 난소제거로 증가된 혈중 LH 농도와 ${\alpha}$ 및 $LH{\beta}$ subunit mRNA 수준이 감소하였다. Estradiol을 1일간 투여하였을때 부터 혈중 LH 농도 및 ${\alpha}$와 $LH{\beta}$ subunit mRNA 수준이 감소하였으며, progesterone을 4일간 처리하였을때에 혈중 LH농도가 감소하였다. 3. Estrogen 길항제인 LY117018를 estradiol과 동시에 처리하거나, progesterone 길항제인 RU 456을 progesterone과 동시에 처리하였을때 estradiol과 porgesterone에 의하여 감소되었던 혈중 LH 농도 및 ${\alpha}$와 $LH{\beta}$ subunit mRNA 수준이 유의하게 회복되었다. 이상의 결과로 보아 LH 분비에 있어서 $LH{\beta}$ subunit mRHA 수준의 변화가 속도결정단계 (rate limiting step)인 것으로 보이며, 난소홀몬은 ${\alpha}$ 및 $LH{\beta}$ subunit mRNA 수준을 조절하므로써 pretranslation 단계에서 LH 생합성을 조절하는 것으로 생각된다. Pituitary LH release has been known to be regulated by the hypothalamic gonadotropin releasing hormone (GnRH) and the gonadal steroid hormones. In addition, neurotransmitters and neuropeptides are actively involved in the control of LH secretion. The alteration in LH release might reflect changes in biosynthesis and/or posttranslational processing of LH. However, little is known about the mechanism by which biosynthesis of LH subunits is regulated, especially at the level of transcription. In order to investigate if ovarian steroid hormones regulate the LH subunit gene expression, ${\alpha}\;and\;LH{\beta}$ steady state mRNA levels were determined in anterior pituitaries of ovariectomized rats. Serum LH concentrations and pituitary LH concentrations were increased markedly with time after ovariectomy. ${\alpha}\;and\;LH{\beta}$ subunit mRNA levels after ovariectomy were increased in a parallel manner with serum LH concentrations and pituitary LH contents, the rise in $LH{\beta}$ subunit mRNA levels being more prominent than the rise in ${\alpha}\;subunit$ mRNA. ${\alpha}\;and\;LH{\beta}$ subunit mRNA levels in ovariectomized rats were negatively regulated by the continuous treatment of ovarian steriod hormones for $1{\sim}4\;days$ and $LH{\beta}\;subunit$ mRNA seemed to be more sensitive to negative feedback of estradiol than progesterone. Treatment of estrogen antagonist, LY117018 or progesterone antagonist, RU486 significantly restroed LH subunit mRNA levels as well as LH release which were suppressed by estradiol or progesterone treatment. These results suggest that ovarian steroids negatively regulate the LH synthesis at the pretranslational level by modulating the steady state levels of ${\alpha}\;and\;LH{\beta}\;subunit$ mRNA and $LH{\beta}\;subunit$ mRNA seemed to be more sensitive to negative feedback action of estradiol than progesterone.

Regulation of Luteinizing Hormone Release and Subunit mRNA by GnRH and Ovarian Steroids in Cultured Anterior Pituitary Cells

김창미,박일선,유경자,Kim, Chang-Mee,Park, Il-Sun,Ryu, Kyung-Za The Korean Society of Pharmacology 1994 대한약리학잡지 Vol.30 No.1

흰쥐의 뇌하수체 전엽배양세포에 gonadotropin-releasing hormone (GnRH)을 처리하였을 때 시간이 경과함에 따라 GnRH농도에 비례하여 luteinizing hormone(LH)의 분비가 증가하였으며, 2시간까지 급격하게 증가하였다. 또한 GnRH를 처리하였을때 ${\alpha}$ subunit mRNA의 농도는 증가하지 않았으나 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도는 GnRH 농도에 비례하여 증가하였으며, GnRH 처리후 6시간 이후부터 유의하게 증가하였다. 특히 최종농도가 $2{\times}10^{-10}M$이 되도록 GnRH를 처리하였을 때 $LH{\beta}$ subunit mRNA 농도가 2.7배 정도 최대로 증가하였다. 또한 estradiol을 단독으로 또는 GnRH와 동시에 처리하였을때 LH분비가 증가하지 않았으나 progesterone을 GnRH와 동시에 처리하였을때 LH분비가 유의하게 증가하였다. 또한 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도는 estradiol및 progesterone을 단독으로 또는 GnRH와 동시에 처리하였을때 난소호르몬 농도에 의존적으로 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도가 증가하였다. Estradiol에 의한 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 증가양상은 estrogen 길항제인 LY117018에 의하여 유의하게 감소하였다. 이러한 결과로 보아 GnRH는 steady state $LH{\beta}$ subunit mRNA 농도에 영향을 미치므로써 LH분비 및 LH subunit 생합성을 조절하며 난소호르몬은 뇌하수체에 직접 작용하여 LH분비 및 LH subunit 생합성에 영향을 주는 것으로 보인다. The effects of gonadoropin-releasing hormone (GnRH) and ovarian steroid hormones on the release of luteinizing hormone (LH) and its subunit mRNA levels were investigated in anterior pituitary cells in culture. LH concentration was measured by a specific radioimmunoassay and mRNA levels of u and $LH{\beta}$ subunits by RNA slot blot hybridization assay. GnRH stimulated LH release in a dose-dependent manner from cultured pituitary cells. However, the basal LH release in the absence of GnRH was not changed during the course of 24h culture, strongly suggesting that release of LH is directly controlled by GnRH. The treatment of the pituitary cells with GnRH increased $LH{\beta}$ subunit mRNA levels in a dose-dependent manner, reaching the maximum with $2\;{\times}\;10^{-10}M$ GnRH while no significant increase in ${\alpha}$ subunit mRNA levels was observed after GnRH treatment. Estradiol did not augment GnRH-induced LH release while progesterone augmented GnRH-induced LH release in a dose-dependent manner at the level of pituitary. However, estradiol and progesterone increased basal and GnRH-induced $LH{\beta}$ subunit mRNA levels in a dose-dependent manner. The treatment of estrogen antagonist, LYI17018 blocked the effect of estradiol on GnRH-induced $LH{\beta}$ subunit mRNA levels in a dose-dependent manner while progesterone antagonist, Ru486 tended to block the effect of progesterone on GnRH-induced $LH{\beta}$ subunit mRNA levels. It is therefore suggested that GnRH Playa a major role in LH release and subunit biosynthesis by influencing the steady state $LH{\beta}$ subunit mRNA loves and ovarian steroid hormones modulate subunit biosynthesis via directly acting on pituitary gonadotropes.

Effects of Extracellular $Ca^{++}$ on PKC or cAMP-stimulated Increases in LH Release and $LH{\beta}$ Subunit mRNA Levels in Rat Anterior Pituitary Cells

박덕배,김창미,천민석,유경자,Park, Deok-Bae,Kim, Chang-Mee,Cheon, Min-Seok,Ryu, Kyung-Za The Korean Society of Pharmacology 1996 대한약리학잡지 Vol.32 No.3

We examined the effects of EGTA and verapamil on phorbol ester-and forskolin-stimulated LH releases and $LH{\beta}$ subunit mRNA levels in order to verify the role of extracellular $Ca^{++}$ on PKC- or cAMP-induced increases in LH release and $LH{\beta}$ subunit mRNA levels in cultured anterior pituitary cells of rat. Forskolin-stimulated $LH{\beta}$ subunit mRNA levels as well as LH release were all suppressed by prevention of $Ca^{++}$ mobilization from extracellular environment, after the treatment of EGTA as a $Ca^{++}$ chelator or verapamil as a $Ca^{++}$ channel blocker. PMA-stimulated $LH{\beta}$ subunit mRNA levels were also suppressed by the treatment of EGTA and verapamil, while PMA-induced LH release was not affected. From the present study, it is, therefore, suggested that PKC activation and cAMP elevation all stimulate $LH{\beta}$ subunit mRNA levels and these are extracellular $Ca^{++}$-dependent. However, LH releases by PKC activation and cAMP increase seem to be different each other. LH release by PKC activation is thought to be independent of extracellular $Ca^{++}$. On the other hand, cAMP stimulated-LH release is thought to be dependent on the entry of extracellular $Ca^{++}$. 흰쥐 뇌하수체 전엽배양세포에서 PKC나 cAMP에 의한 LH 분비와 $LH{\beta}$subunit mRNA 증가과정에서 세포외 $Ca^{++}$의 역할을 검증하기 위하여 phorbol ester와 forskolin에 의해 촉진된 LH 분비와 $LH{\beta}$ subunit mRNA 수준에 미치는 EGTA와 verapamil의 영향을 조사하였다. Forskolin에 의해 촉진된 LH 분비와 $LH{\beta}$ subunit mRNA 수준은 $Ca^{++}$ chelator인 EGTA나 $Ca^{++}$ 채널차단제인 verapamil의 처리로 세포외부로부터 $Ca^{++}$의 이동을 억제시켰을때 모두 감소하였다. PMA에 의해 유도된 LH 분비는 EGTA와 verapamil 처리에 의해 영향을 받지 않았으나 PMA에 의해 촉진된 $LH{\beta}$ subunit mRNA는 억제되었다. 따라서 본 연구에 의하면 PKC 활성화나 세포내 cAMP 농도 증가는 $LH{\beta}$ subunit mRNA 수준을 증가시키며 이러한 과정은 세포외 $Ca^{++}$ 의존적인 것으로 생각된다. 그러나 PKC 활성화나 cAMP 증가에 의한 세포외 $Ca^{++}$의 역할이 서로 다른 양상을 보인다. PKC 활성화에 의한 LH 분비는 세포외 $Ca^{++}$에 비의존적이나 cAMP에 의해 촉진된 LH 분비는 세포외 $Ca^{++}$ 유입의 영향을 받는 것으로 사료된다.

Modulation of Uterine Phospholipase $A_2$ Activity by Estradiol During the Delayed Implantation Process in Rats

윤미정,김창미,최임순,유경자,Yoon, Mi-Chung,Kim, Chang-Mee,Choe, Rim-Soon,Ryu, Kyung-Za The Korean Society of Pharmacology 1991 대한약리학잡지 Vol.27 No.2

본 연구에서는 흰쥐의 수정란 착상시기에 estradiol이 prostaglandins(PGs) 합성의 전구체인 arachidonic acid를 생성하는데 관여하는 phospholipase $A_2(PLA_2)$의 활성도를 조절하므로써 PGs의 합성을 촉진하는가를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 자궁의 $PLA_2$ 활성도는 수정란이 착상하는 시기인 임신 제 5일에 증가되었으며, 비착상부위에서보다는 착상부위에서 더 높은 것으로 나타났다. Delayed implantation model에서, $PLA_2$ 활성도는 estradiol을 투여한 지 11시간후에 증가되었으며, dbcAMP를 투여한지 8시간후에 증가되었다. 또한 estradiol을 투여하기 2시간전에 phosphodiesterase inhibitor인 theophylline을 투여하면 estradiol만 투여한것에 비하여 $PLA_2$ 활성도가 증가되었다. Estradiol 또는 dbcAMP와 함께 indomethacin을 투여하면 자궁의 PGs합성은 억제되었으나 $PLA_2$ 활성도에는 영향을 주지않았다. 이상의 결과로 보아 흰쥐의 착상시기에 estradiol은 cAMP를 매개로하여 자궁의 $PLA_2$ 활성도를 촉진하므로써 PGs의 합성을 증가시키는 것으로 생각된다. The present study was performed to determine whether estradiol, via cAMP mediation, induces prostaglandin synthesis by modulating phospholipase $A_2$ activity which hydrolyzes phospholipids into arachidonic acids, a precursor for prostaglandin synthesis, during the implantation process in rats. Uterine phospholipase $A_2$ activity was elevated on day 5 of pregnancy when implantation normally occurs in rats. Moreover, phospholipase $A_2$ activity was higher in the implant sites than in the non-implant sites of uterus on day 6. In delayed implantation model, phospholipase $A_2$ activity was increased at 12 hrs after estradiol administration and at 8 hrs after dbcAMP administration. In addition, higher activity of phospholipase $A_2$ was induced by the treatment of estradiol plus theophylline, compared with estradiol-only treated group. The simultaneous treatment of indomethacin with estradiol or dbcAMP did not alter phospholipase $A_2$ activity compared with estradiol or dbcAMP-only treated group although significant suppression was observed in uterine PGE and $PGF_{2{\alpha}}$ concentrations. These results suggest that estradiol or cAMP stimulates uterine phospholipase $A_2$ activity, thereby increasing prostaglandin synthesis during the implantation process in rats.

cAMP Mediation in Estradiol-induced Uterine Prostaglandin Synthesis During the Delayed Implantation Process in Rats

윤미정,김창미,최임순,유경자,Yoon, Mi-Chung,Kim, Chang-Mee,Choe, Rim-Soon,Ryu, Kyung-Za The Korean Society of Pharmacology 1991 대한약리학잡지 Vol.27 No.2

본 연구에서는 흰쥐의 착상지연을 유도하여 착상기간동안 자궁조직내 prostaglandin (PG) 생합성이 어떠한 인자에 의해서 조절되는가를 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 흰쥐의 착상지연과정동안 estradiol을 처리하면 처리후 4시간만에 자궁조직내의 cAMP의 농도가 급격하게 증가하였다. PGE와 $PGF_2{\alpha}$의 농도는 estradiol을 처리한 후 12시간이 경과하였을때 증가하였으나 $PGF_2{\alpha}$의 증가는 통계적으로 유의하지는 않았다. 또한 indomethacin을 estradiol과 동시에 처리하면 estradiol 처리로 인한 PGE와 $PGF_2{\alpha}$의 농도 증가는 나타나지 않았으나 cAMP 농도는 증가하였다. dbcAMP를 처리하면 자궁내 PGE 및 $PGF_2{\alpha}$의 농도가 증가하기 시작하여 estradiol이 투여시에 비하여 4시간 빨리 8시간후에 최고치에 도달하였으며 phosphodiesterase inhibitor인 theophylline을 전처치하면 estradiol만 투여한 것에 비하여 자궁조직내 PGE 및 $PGF_2{\alpha}$의 농도가 유의하게 증가하였다. 이상의 결과로 보아 흰쥐의 착상지연과정동안 estradiol이 자궁의 prostaglandin 합성을 증가시키며 이러한 증가는 cAMP의 증가를 매개하는 것으로 생각된다. The present study was performed to elucidate the factors which modulate uterine prostaglandin synthesis during the implantation period in rats, by employing delayed implantation model. Administration of estradiol sharply increased uterine cAMP concentration 4 hrs later during the delayed implantation process. Concentrations of uterine PGE and $PGF_2{\alpha}$ were increased at 12 hrs after the estradiol treatment although an increase in $PGF_2{\alpha}$ was not statistically significant. The concomitant treatment of indomethacin with estradiol significantly suppressed estradiol-induced PGE and $PGF_2{\alpha}$ at 12 hrs, while uterine cAMP concentration was not suppressed. The treatment of dbcAMP without estradiol gradually increased uterine PGE and $PGF_2{\alpha}$ showing the maximum 8 hrs later, suggesting that cAMP minics estradiol effect on uterine prostaglandin synthesis during the implantation process. Furthermore, the pretreatment of theophylline, phosphodiesterase inhibitor, induced significantly greater concentrations of uterine PGE and $PGF_2{\alpha}$, compared with estradiol-only treated group. These results suggest that estradiol stimulates uterine prostaglandin synthesis and this process may be mediated by an elevation of cAMP during the delayed implantation process in rats.

Action Mechanism of Antiestrogens on Uterine Growth in Immature Rats

이중빈,윤미정,김창미,홍사석,유경자,Lee, Jung-Bin,Yoon, Mi-Chung,Kim, Chang-Mee,Hong, Sa-Suk,Ryu, Kyung-Za The Korean Society of Pharmacology 1990 대한약리학잡지 Vol.26 No.2

비스테로이드성 항에스트로젠제는 표적기관에서 estrogen 수용체와 상경적으로 결합하므로써 estrogen의 작용을 억제하는 것으로 알려져 있다. 비스테로이드성 항에스트로젠제는 대체로 triphenylethylene계로서 tamoxifen, clomiphene, LYl17018등이 있으며 표적기관에서 estrogen의 작용을 억제하기 때문에 estrogen과 관련된 질환을 치료하는데 이용되어 오고 있다. 본 연구에서는 생후 21-23일된 미성숙 흰쥐를 재료로 항에스트로젠제중 tamoxifen과 LY117018이 자궁세포 성장에 어떠한 영향을 미치며 어떠한 기전으로 estrogen의 작용을 길항하는지를 규명하고자, 항에스트로젠제가 estrogen작용의 중요 지포에 미치는 영향을 비교 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Tamoxifen과 LY117018은 자궁세포에서 estrogen의 영향이 없는 경우에는 estrogen agonist로, estrogen작용하에서는 estrogen antagonist로서 작용하였다. Estrogen 작용의 여러 가지 지표에 대해 tamoxifen이 LY117018보다 agonistic effect는 더 컸으나, antagonistic effect는 LY117018이 더 큰 것으로 나타났다. Estrogen 수용체에 대한 결합능은 LY117018이 estradiol보다는 약간 낮았으나 용량에 비례하여 estrogen 수용체와 결합하였다. 그러나 tamoxifen은 estrogen 수용체에 대한 결합이 아주 낮았다. Estrogen 수용체에 대한 binding affinity는 estradiol(100%), LY117018(77%), tamoxifen(6.3%) 순으로 나타났다. 항에스트로젠제의 생체내 투여는 estrogen 존재 유무에 따라 estrogen 수용체 농도에 agonist 또는 antagonist로 작용하였다. 항에스트로젠제의 단독투여는 progesterone 수용체 생성을 증가시키나, estrogen에 의하여 유도된 progesterone 수용체 생성을 억제하였다. 이상의 결과로 보아, tamoxifen과 LY117018은 estrogen유무에 따라 흰쥐 자궁세포에서 estrogen antagonist로서 뿐만 아니라 agonist로서도 작용함을 알 수 있다. 그러나 estrogen수용체와의 결합능력이 아주 낮은 tamoxifen은, 용량에 비례하여 estrogen수용체에 결합하므로써 작용하는 LY117018과는 다른 기전으로 작용하는 것으로 생각된다. In the present study, we examined the effects of tamoxifen and LY117018 on various parameters for the estrogenic actions in order to understand the mechanism by which tamoxifen and LY117018 act on the uterine cells in 21-23 day old immature rats. Tamoxifen and LY117018 stimulated uterine weight and uterine contents of DNA, protein, and peroxidase activity in the absence of estradiol while inhibited above parameters in the presence of estradiol. Both cytosolic and nuclear progesterone receptors were increased by the treatment of tamoxifen and LY117018 as well as estradiol, but estradiol-induced increase in the progesterone receptors were reduced by the treatment of antiestrogens. These effects were enhanced by the multiple injections of antiestrogens. It seemed that tamoxifen was more agonistic than LY117018 but less antagonistic than LY117018, judged by their effects on various parameters for the estrogenic action. The affinities of estradiol, tamoxifen, and LY117018 for the estrogen receptor were $0.17{\pm}0.01nM(100%)$, $1.10{\pm}0.01nM(6.3%)$, and $0.23{\pm}0.01nM(77%)$, respectively. Furthermore, LY117018 was the competitive ligand for the estrogen receptor in dose-related manner but tamoxifen was not. Following estradiol treatment, nuclear estrogen receptor was sharply increased by 1 h, reaching the maximum by 16 h, while tamoxifen and LY117018 slightly increased nuclear estrogen receptor by 1 h and then decreased thereafter. It is therefore concluded that LY117018 is a competitive antagonist for the estrogen receptor with less estrogenic activity, compared to tamoxifen with low affinity to the estrogen receptor, and tamoxifen may act through other binding site than the estrogen receptor.

토끼의 착상기간 중 모체의 면역 억제 현상에 관한 연구

조혜성(Hye-seong Cho),유경자(Kyung-za Ryu),홍사석(Sa-Suk Hong) 대한약리학회 1987 대한약리학잡지 Vol.23 No.2

본 실험에서는 가토에서 배반포가 자궁내막에 착상할 때, 모체의 면역기능의 변화를 알아보고, 착상시 관여하는 호르몬과 모체의 면역기능과의 연관성을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 임신 7일째 가토의 말초혈관 림프구에 concanavalin A를 처리하면, 임신하지 않은 가토의 림프구보다 훨씬 낮은 자극지수를 나타냄으로써 면역억제 현상이 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 2. 임신 7일 때의 혈청 progesterone농도인 11.56 ng/ml을 임신하지 않는 가토의 말초혈관 림프구에 처리하면, 억제현상을 나타내지 않았으나, Progesterone의 농도가 1000 ng/ml 이상에서는 농도에 비례하여 림프구의 활성도가 감소되었다. 3. 4.5 ng/ml~4,500 ng/ml의 PGE_2α는 concanavalin A처리시 림프구의 활성도에 별다른 영향을 끼치지 않았으나, PGE는 4.5 ng/ml~4,500 ng/ml에서 농도에 비례하여 림프구의 활성도를 유의하게 감소시켰다. 그러나 임신 제 8일째의 말초혈관 림프구에 prostaglandin 합성 억제제인 indomethacin 0.1 또는 1μg/ml을 처리하면 억제되었던 림프구 활성도가 각각28%, 23% 증가되었다. 이상의 결과로 보아 토끼의 착상기간중 모체의 면역기능이 저하되며 PGE가 착상기간중 면역기능을 저하시키는 요소중 하나인 것으로 생각된다. We determined the maternal peripheral lymphocyte response to mitogen during the period of implantation and evaluated the effects of hormones, which are known to be involved in the process of implantation, on the lymphocyte activity in rabbits. As compared with peripheral lymphocyte activity in non-pregnant rabbits, lymphocyte activity was significantly depressed on days 6, 7 and 9 of pregnancy. Although concentrations of serum progesterone were gradually increased during the implantation period, progesterone did not inhibit lymphocyte activity at physiological concentration. Serum PGE_2α was significantly increased on day 7 while PGE was slightly increased. PGE_2α did not modify lymphocyte activity even with greater concentrations than physiological level. However, lymphocyte activity was significantly inhibited by PGE even with physiological doses. The treatment of indomethacin at doses of 0.1 or 1.0μg/ml tended to enhance lymphocyte response, which was depressed on day 8 of pregnancy, 28% or 23% respectively. Although in non-pregnant rabbit, enhancement of lymphocyte response was also shown after the treatment of indomethacin, this enhancement was much less than that in pregnant rabbits. These results strongly suggest that maternal immune response was depressed during the process of implantation and PGE might be one of factors for immunomodulation during this period.