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말기 신부전 환자에 있어서 TNF-α 유전자 다형성에 관한 연구
정경환 ( Jeong Gyeong Hwan ),이상호 ( Lee Sang Ho ),이영재 ( Lee Yeong Jae ),이태원 ( Lee Tae Won ),임천규 ( Im Cheon Gyu ),김명재 ( Kim Myeong Jae ),고관표 ( Go Gwan Pyo ),오승준 ( O Seung Jun ),우정택 ( U Jeong Taeg ),김성운 ( K 대한신장학회 2004 Kidney Research and Clinical Practice Vol.23 No.3
배경 : 만성 신장 질환의 진행과정에 면역학적 또는 염증 과정의 이상이 제시되고 있으며 이 중 cytokine의 중요성이 대두되고 있다. Cytokine의 하나인 TNF-α의 유전자 다형성이 TNF-α 분비에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 이에 저자들은 말기 신부전으로 진행된 당뇨병 환자와 정상 신기능의 당뇨병 환자를 중심으로 TNF-α 유전자 다형성을 분석하여 말기 신부전에 미치는 영향에 대해 알아보고자 본 연구를 계획하였다. 방법 : 말기 신부전 환자 257명과 정상 대조군 277명을 대상으로 하여 TNF-α 유전자형을 조사하고 임상 자료를 분석하였다. 당뇨병에서 TNF-α 유전자 다형성이 신부전 발생에 미치는 영향에 대해 알아보고자 당뇨병 진단 후 20년 이내에 말기 신부전으로 진행한 86명과 당뇨병 진단 후 15년이상 추적 관찰 결과 정상 신기능을 보인 92명을 비교하였다. 유전자 다형성은 대상군의 말초 혈액에서 genomic DNA를 분리한 후 PCR-RFLP를 통해 조사하였다. 결과 : 말기 신부전 환자군과 건강 대조군간의 연령별, 성별 구성에는 차이가 없었으며 당뇨병 환자 중 신부전 발생군과 정상 신기능 대조군 간에도 성별, 연령별 구성 및 당뇨병 유병 기간에도 유의한 차이는 없었다. TNF-α의 대립 유전자 빈도와 carriage rate를 비교해 보면 말기 신부전 환자군에서 건강 대조군에 비해 TNF2의 발현이 유의하게 낮게 관찰되었다 (p<0.05). 당뇨병 환자를 대상으로 관찰한 결과도 말기 신부전으로 진행한 군에서 정상 신기능을 보인 군에 비해 TNF2의 발현이 의미있게 낮았다. 결론 : 말기 신부전이 진행된 당뇨병 환자군의 TNF2 발현율이 정상 신기능을 갖는 당뇨병 대조군과 비교해 유의하게 낮게 관찰되어졌으며 다른 원인에 의한 말기 신부전 환자들에서도 유사한 결과를 얻었다. 그러나 말기 신부전 환자에서 TNF-α 유전자 다형성이 신부전 진행에 미치는 영향에 대해 밝히기 위해서는 다른 독립 인자의 보정과 보다 전향적인 추적 관찰이 필요할 것으로 여겨진다. Background: It is evident that cytokines play a role in the pathogenesis as well as the progression of renal diseases. The purpose of this study was to determine whether cytokine gene polymorphism is a marker of susceptibility to end-stage kidney failure (ESKF) in Korean populations. Methods : -308 G/A polymorphism of tumor necrosis factor- ? (TNF-?) gene was genotyped in 257 dialysis patients and 277 age-matched healthy controls, 86 NIDDM patients with kidney failure and 102 NIDDM controls without nephropathy. Results: We found a decreased frequency of TNF- ? allele 2 (TNF2, 2.9%) in ESKF patients compared to healthy controls (7.5%, p<0.05). We also found a decreased frequency of TNF-? allele 2 (TNF2, 2.3%) in NIDDM patients with kidney failure compared to NIDDM controls without nephropathy (7.6%, p<0.05). The carriage rate of TNF2 was significantly lower in NIDDM patients with kidney failure than in NIDDM controls without nephropathy (4.4% vs. 13.2%, p<0.05). In addition, allele frequency of TNF2 were remarkably different from those previously reported, indicating a significant ethnic difference. Conclusion : There is a significant ethnic difference in the polymorphism of TNF-? gene. The non-carriage TNF2 was more prevalent in the kidney failure group. But, we could not determine any association between the TNF- ? gene polymorphism and the development of kidney failure. (Korean J Nephrol 2004;23(3): 439-445)
조골세포수 MC3T3-E1 세포기능에 대한 갑상선 호르몬의 영향
윤현구 ( Yun Hyeon Gu ),우정택 ( U Jeong Taeg ),김진우 ( Kim Jin U ),김영설 ( Kim Yeong Seol ),김광원 ( Kim Gwang Won ),최영길 ( Choe Yeong Gil ),서광식 ( Seo Gwang Sig ) 대한내과학회 1993 대한내과학회지 Vol.44 No.1
연구배경 : 갑상선호르몬은 골격계 성장, 발달 및 대사에 중요한 영향을 미치며 조골세포 및 파골세포를 모두 자극하는 것으로 알려졌으나, 골형성에 미치는 직접적인 영향은 아직 확실히 규명되어 있지않다. 본 연구에서는 조골세포의 특성을 지닌 조골세포주 MC3T3-E1를 이용하여 T_3를 여러 농도로 첨가하여 DNA 합성, 교원질합성 및 Ⅰ형 교원질 mRNA 발현능 비교와 부갑상선호르몬에 대한 cAMP 반응을 측정하여 T3의 조골세포에 미치는 영향을 비교하였다. 방법 : 10% FBS(fetal bovine serum)이 첨가된 aMEM으로 배양한 후 0.1% FBS와 여러 농도의 T3를 첨가하였다. DNA 합성은 [^3H] thymidine incorporation과 교원질합성은 [^3H] proline incorporation을 이용하여 관찰하였으며, Ⅰ형 교원질 mRNA 발현능은 Northern blot 분석하였다. 결과 : 부갑성호르몬에 대한 조골세포의 반응 증가를 확인하였으며, Northern blot을 이용한 Ⅰ형 교원질 mRNA의 크기는 6.4kb로 발현됨을 관찰하였다. T_3를 세포배지에 첨가하여 DNA 합성과 교원질합성 비율은 농도증가에 따라 유의한 차이가 없었다. T_3에 의한 Ⅰ형 교원질 mRNA 발현은 농도 변화에 따른 유의한 차이가 없었다. 결론 : 조골세포주 MC3T3-EI 세포는 부갑성선호르몬의 자극에 cAMP의 증가 및 6.4kb의 Ⅰ형 교원질 mRNA 발현으로 조골세포의 특성이 관찰되어 골대사 연구에 유용한 세포로 생각된다. 이 세포를 이용한 연구에서 T_3는 MC3T3-E1 세포에 대해 DNA 합성, 교원질 합성비율 및 전사부위에 영향을 미치지 않았으나 갑상선 호르몬 농도와 노출시간을 달리한 추시가 필요할 것으로 생각된다. Background : Thyroid hormone appears to stimulate both the osteoclast and the osteoblast, but is direct effect on bone formation its not yet clear. This study was designed to investigate the effects of triiodothyronine(T_3) on DNA synthesis, collagen protein synthesis and type Ⅰ collagen transcript levels in osteoblastlike MC3T3-E1 cells. Methods : The cells used in the present experiments were found to be PTH-responsive in terms of cAMP formation. The cells were cultured in a-MEM supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and then changed to 0.1% FBS with various concentration of triiodothyronine. DNA synthesis was studied by examing effects on the incorporation of [^3H] thymidine into DNA, collagen synthesis was determined by studying into the incorporation of [^3H] proline into collagenase digestible protein (CDP) and noncollagen protein (NCP).Type Ⅰ collagen mRNA expression was studied by Northern blot analysis. Results : Northern blot analysis showed the presence of 6.4 kb type Ⅰ collagen transcript in control and T_3-treated cultures. From this study. There was no significant differences in DNA synthesis and percentage of collagen synthesized between T_3-treated cells and control. Northern blot analysis of T_3-treated cells, using a type Ⅰ a_2 collagen probe, revealed no significant changes in type Ⅰ collagen transcripts. Conclusion : In MC3T3-E1 cells, which responded to PTH by increasig cAMP formation, the presence of 6.4 kd type Ⅰ collagen transcript was found. Thus MC3T3-E1 cells are a useful model for the investigation of osteoblastic cells. Based on the data, T_3 exerted no significant effects on DNA, collagen synthesis and transcript levels in osteoblast like MC3T3-E1 cells.