수술창에서 분리된 균주의 항생제 감수성

오양효,김영부,박영민,김민정,차미선,Oh, Yang-Hyo,Kim, Yung-Bu,Park, Young-Min,Kim, Min-Jung,Cha, Mi-Sun 한국생명과학회 1998 생명과학회지 Vol.8 No.1

Staphylococuus aureus and Escherichia coli is increasingly responsible for outbreaks of nosocomial infection around the world. Because serious infections due to these organisms currently necessiate use of non-$\beta$-lactam antimicrobial therapy and because strains is ofen resistant to many antimicrobial agents, infections with this organism are difficult to treat. Isolated strains from post operaton wounds of PNU hospital patient were tested for the antimicrobial susceptibility, resistant pattern and combined action to the 6 antibiotics. The minimal inhibitory concentraction of each antibiotic anc antibiotics combining in various ratios were measured by checkerboard dilution method. the synergism was determined through calculating the fractional inhibitory concentraction index (FICI). In case of S. aureus, 15 strains was shown to be highly sensitive to streptomycin and 13 strains to cephalothin. In case of E. coli, it is excellent senstitive 16 strains, sensitive 4 strains on cefoperazone, as like S. aureus, and thus the sensitive is most to be 66%. As the result of gaining MIC from S. aureus upon agar dilution method, MIC$_{50}$ was 8$\mu$g/ml, MIC$_{90}$ was 16$\mu$g/ml and thus the streptomycine is shown to be lowest. In case of E, coli, S. MIC$_{50}$ was 4$\mu$g/ml, MIC$_{90}$ was 16$\mu$g/ml, in streptomycin and thus is shown to be lower than S. aureus. As the result of comparing the resistance aspect of combining the antibiotics on S. aureus and E. coli, the resistant strain can be known to be reduced to the large range more than each 40% than combining with only aminoglycoside-series or cephalosporine-series. As the result of combining aminoglycoside-series, streptomycin and cephalothin or cefuroxime sensitive to S. aureus and E. coli in the above mentioned results, the increase or imporovement of effect is over 73% and 80%, respectively, thus the case od combining 2 antibiotics is shown to be better in the effect. Isolated strains from operating wounds were for the antimicrobial susceptibility. In case of S. aureus 15 strains was shown to be sensitive very much on streptomycin. In case of E. coli it is excellent sensitive 16 strains. As the results of combining aminoglycosides-series, streptomycin and cephalosporine series, cephalothin and cefuroxime, the increase or improvement of effect is over 73%, thus case of combining 2 antibiotics is shown to be better in the effect.

Escherichia coli의 부착인자 발현을 조절하는 유전물질과 부착인자의 동정 및 특성

오양효(Yang-Hyo Oh),김영부(Yung-Bu Kim),최귀전(Gui-Jeon Choi),김미경(Mi-Gyeong Kim),김민정(Min-Jung Kim) 大韓微生物學會 1992 大韓微生物學會誌 Vol.27 No.5

Epidemiological Studies on the Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Isolated from Clinical Samples

Yang-Hyo Oh(오양효),Min-Jung Kim(김민정) 대한의생명과학회 1999 Biomedical Science Letters Vol.5 No.2

임상가검물에서 생화학 검사와 항생제 감수성 검사를 통하여 45주의 Staphylococcu aureus를 분리하여 역학적 연구를 위한 형별 분류로써 항생제 감수성 검사, bacteriophage typing, 효소중합 연쇄반응 등을 실시하였으며, methicillin 내성과 관련이 있는 mecA 유전자를 검출 및 역학적 변별력이 있는 가변지역의 중합효소증폭반응을 실시하여, 약제 내성과 관련된 구조 유전자의 발현 양상을 비교하여 특정 유전자 배열의 상동성을 밝히고자 하였다. 45주의 Staphylococcus aureus중에서 mecA 유전자 양성주는 30주였으며, 그 중에서 26주가 methicillin에 내성을 보였다. 약제 내성양상에 따라 9개의 antibiogram으로 분류되었으며, SA6을 제외한 균주에서 penicillin, oxacillin, gentamicin 및 chloramphenicol에서는 높은 내성을 보였으며, SA13, SA14 및 SA27에서는 rifampin에 내성을 보였다. 27주에서 bacteriophage 형별 분류가 가능하였으며, lytic group Ⅲ가 12주로 가장 많았다. mecA 유전자와 mec관련 가변부위의 polymerase chain reaction을 실시한 결과 모든 methicillin resistant Staphylococcus aureus에서는 533 bp의 증폭 band가 관찰되었으나, methicillin 감수성 균주에서는 증폭된 band가 관찰되지 않았다. mec관련 가변부위의 polymerase chain reaction에서는 200 bp에서 600 bp사이에 분포하여 4개의 유형으로 분류되었으며, 410 bp인 C형이 10균주로 가장 많았다. C형 가변부의의 DNA sequence에서 40 bp가 반복되는 dru sequence를 관찰할 수 있었으며, 이러한 dru sequence는 4 unit가 직접적으로 중복됨을 알 수 있었다. A total of 45 Staphylococcus aureus strains from clinical samples were tested for the biochemical test and antibiotic susceptibility test. Forty-five S. aureus strains were subjected to the molecular epidemiological study by susceptiblity test, antibiogram, bacteriophage typing, polymerase chain reaction and mec-associated hypervariable region gene in order to detect of mecA gene which was one of the structural gene related to antibiotic resistant expression factors. Three of 15 mecA-negative S. aureus isolates were classified as oxacillin resistant despite borderline minimal inhibitory concentration values. Methicillin susceptiblities were completely consistent with PCR results for these strains. On the other hand, 4 of 30 mecA-positive isolates yielded results in the oxacillin and methicillin susceptibility tests which were discrepant from those of PCR analysis. Except for SA6, the methicillin resistant S. aureus strains tested were highly resistant to penicillin, oxacillin, gentamicin, and chloramphenicol. In the phage typing, 27 strains were typable. The lytic group Ⅲ was as many as 12 strains, and 7 of 12 were 75/83A/84 type. In the PCR of specific mecA gene probe with chromosomal DNA of 30 methicillin resistant S. aureus, the amplified DNA band of 533 bp was confirmed in 30 strains and not in methicillin sensitive S. aureus. The single amplified band of hypervariable region related to mec was investigated in all of 30 methicillin resistant S. aureus, but in methicillin sensitive S. aureus it was amplified. The size of PCR products was between 200 bp and 600 bp. Four units was directly repeated.

비브리오의 병원성 인자에 관한 연구 (pp.125-136)

오양효(Yang Hyo Oh ),박영민(Young Min Park),김민정(Min Jung Kim),차미선(Mi Sun Cha) 大韓微生物學會 1999 大韓微生物學會誌 Vol.34 No.2

비브리오의 병원성 인자에 관한 연구 (pp.513-518)

오양효(Yang Hyo Oh),김영부(Yung Bu Kim),박영민(Young Min Park),김민정(Min Jung Kim),차미선(Mi Sun Cha),김영희(Young Hee Kim),임은경(Eun Gyoung Lim) 大韓微生物學會 1999 大韓微生物學會誌 Vol.34 No.6

병원성 Escherichia coli의 부착잊자가 숙주에 미치는 영향

오양효(Yang-Hyo Oh),김영부(Yung-Bu Kim),김미경(Mi-Gyeong Kim),김민정(Min-Jung Kim),윤소겸(So-Gyem Yoon) 大韓微生物學會 1994 大韓微生物學會誌 Vol.29 No.5

Murine Transfer factor의 정제와 활성도의 시험관내 측정에 관한 연구

오양효(Yang Hyo Oh),김영부(Young Bu Kim),정민호(Min Ho Jeong),최귀전(Gui Jeon Choi),서수영(Yeong Seo) 大韓微生物學會 1990 大韓微生物學會誌 Vol.25 No.6

Polymerase Chain Reaction법 및 혈중항체를 이용한 Vero독소생성대장균의 검출

김영부(Yung-Bu Kim),오양효(Yang-Hyo Oh) 大韓微生物學會 1998 大韓微生物學會誌 Vol.33 No.1

Regulation of Gb3 Expression on Dendritic Cells

임석환,김기영,김형천,김영희,손용해,오양효,박영민,Lim, Suk-Hwan,Kim, Gi-Young,Kim, Hyung-Chun,Kim, Young-Hee,Son, Yong-Hae,Oh, Yang-Hyo,Park, Yeong-Min Korean Society of Life Science 2007 생명과학회지 Vol.17 No.4

Infection with Shiga-like toxin (SLT)-producing Escherichia coli causes a spectrum of illnesses with high morbidity and mortality. Host mediators play an important role in the pathogenesis of SLT-I toxicity. We here investigated the effect of SLT-I on tumor necrosis $factor-{\alpha}\;(TNF-{\alpha})$ production, effect of $TNF-{\alpha}$ on glycolipid globotriaosyleramide (Gb3) expression, and relationship between Gb3 level and differential susceptibility of cells to SLT-I. In this study, we observed that detectable levels of $TNF-{\alpha}$ are produced 6 hrs after induction and continued to increase during 48 hrs by SLT-I. It was also found that Vero cells and dendritic cells expressed high levels of Gb3, 83% and 68%, respectively, and that macrophages had a low level of Gb3 (29%) and showed refractory to cytotoxicity against SLT-I. Vero cells and dendritic cells expressing high levels of Gb3 were highly susceptible to SLT-I. furthermore, macrophages showed a resistance to SLT-I cytotoxicity, despite the fact that Gb3 expression was enhanced. These results suggest that the expression of Gb3 is necessary, but not sufficient to confer sensitivity of macrophages to SLT-I and further underpin the important role of SLT-I and its receptor, Gb3, in the pathogenesis of E. coli O157 infection. Shiga-like toxin(SLT)을 생산하는 Esherichia coli에 의한 감염은 설사, 출혈성 대장염(hemorrhagic colitis) 및 용혈성 요독 증후군(hemolytic uremic syndrome)을 특징으로 하며, 특히 5세 이하의 소아에게서 심각한 결과를 초래한다. SLT-I의 병인으로는 다양한 숙주 매개 인자들이 알려져 있다. 본 연구에서는 E. coli 0157:H7(ATCC 43890)로 부터 정제한 SLT-I이 포유동물 세포들에 대한 세포독성과 종양괴사인자(tumor necrosis $factor-{\alpha},\;TNF-{\alpha}$)의 생산에 미치는 효과를 측정하였으며, SLT-I의 수용체인 glycolipid globotriaosylceramide(Gb3)의 발현과 SLT-I의 세포독성의 관계를 규명하고자 하였다. SLT-I 과 SLT-I B를 순수분리 정제하고 SLT-I B-FLTC 접합체를 제조하여 vero 세포, 대식세포 및 수지상세포를 대상으로 세포독성능을 측정하고 세포독성능의 차이가 SLT-I의 수용체인 Gb3의 발현과 상관관계가 있는지를 Flow cyotmetry로 분석하였다. 또한 대식세포의 종양괴사인자 생산능은 ELISA법으로 시행하였다. SLT-I은 대식세포(Raw264.7)로부터 $TNF-{\alpha}$의 생산을 증가시켰다. 연구 대상 세포 중 SLT-I에 감수성을 나타낸 Vero 세포와 수지상세포(dendritic cells)는 Gb3 발현이 각각 83%와 68%로 높았으며, 29%의 낮은 Gb3 발현을 보인 Raw264.7 세포는 감수성을 보이지 않았다. 따라서 위의 결과로부터 SLT-I에 감수성을 보이지 않은 Raw264.7세포를 대상으로 Gb3 발현 정도와 SLT-I의 세포독성의 관계를 규명하고자 Gb3의 발현을 증가시킨 후 SLT-I의 세포독성을 재차 평가하였다. 이 결과 $TNF-{\alpha}$의 처리에 의하여 6 hrs에 Gb3의 발현이 정점(43.5%)에 이르렀으며 36 hrs에 정상 수준(25.0%)으로 환원되었다. 그러나, Gb3의 발현이 증가함에도 불구하고 SLT-I의 세포독성에는 변화가 관찰되지 않았다. 따라서, SLT-I에 의한 세포독성은 세포의 종류에 따라서 다르며 또한, Gb3의 발현정도에만 의존적이지는 않을 것으로 생각된다. 이와 같은 결과는 E. coli 0157의 감염증 병인 연구에 있어 SLT-I과 Gb3의 발현의 상관관계에 대한 보다 심도 있는 연구가 필요함을 시사한다.

Relationship between Gb3 Expression and Cytotoxicity of Shiga-like Toxin I

임석환,김기영,김형천,김영희,손용해,오양효,박영민,Lim, Suk-Hwan,Kim, Gi-Young,Kim, Hyung-Chun,Kim, Young-Hee,Son, Yong-Hae,Oh, Yang-Hyo,Park, Yeong-Min The Korean Pediatric Society 2003 Clinical and Experimental Pediatrics (CEP) Vol.46 No.2

목 적 : Shiga-like toxin (SLT)을 생산하는 Esherichia coli에 의한 감염은 설사, 출혈성 대장염(hemorrhagic colitis) 및 용혈성 요독 증후군(hemolytic uremic syndrome)을 특징으로 하며, 특히 5세 이하의 소아에게서 심각한 결과를 초래한다. SLT-I의 병인으로는 다양한 숙주 매개인자들이 알려져 있다. 본 연구에서는 E. coli 0157 : H7 (ATCC 43890)로부터 정제한 SLT-I이 포유동물 세포들에 대한 세포독성과 종양괴사인자(tumor necrosis factor-${\alpha}$; TNF-${\alpha}$)의 생산에 미치는 효과를 측정하였으며, SLT-I의 수용체인 glycolipid globotriaosylceramide (Gb3)의 발현과 SLT-I의 세포독성의 관계를 규명하고자 하였다. 방 법 : SLT-I과 SLT-I B를 순수분리 정제하고 SLT-I B-FLTC 접합체를 제조하여 vero 세포, 대식세포 및 수지상세포를 대상으로 세포독성능을 측정하고 세포독성능의 차이가 SLT-I의 수용체인 Gb3의 발현과 상관관계가 있는지를 Flow cyotmetry로 분석하였다. 또한 대식세포의 종양괴사인자 생산능은 ELISA법으로 시행하였다. 결 과 : SLT-I은 대식세포(Raw264.7)로부터 TNF-${\alpha}$의 생산을 증가시켰다. 연구 대상 세포 중 SLT-I에 감수성을 나타낸 Vero 세포와 수지상세포(dendritic cells)는 Gb3 발현이 각각 83%와 68%로 높았으며, 29%의 낮은 Gb3 발현을 보인 Raw264.7 세포는 감수성을 보이지 않았다. 따라서 위의 결과로부터 SLT-I에 감수성을 보이지 않은 Raw264.7 세포를 대상으로 Gb3 발현 정도와 SLT-I의 세포독성의 관계를 규명하고자 Gb3의 발현을 증가 시킨 후 SLT-I의 세포독성을 재차 평가하였다. 이 결과 TNF-${\alpha}$의 처리에 의하여 6 h에 Gb3의 발현이 정점(43.5%)에 이르렀으며 36 h에 정상 수준(25.0%)으로 환원되었다. 그러나, Gb3의 발현이 증가함에도 불구하고 SLT-I의 세포독성에는 변화가 관찰되지 않았다. 따라서, SLT-I에 의한 세포독성은 세포의 종류에 따라서 다르며 또한, Gb3의 발현정도에만 의존적이지는 않을 것으로 생각된다. 결 론 : 이와 같은 결과는 E. coli 0157의 감염증 병인 연구에 있어 SLT-I과 Gb3의 발현의 상관관계에 대한 보다 심도 있는 연구가 필요함을 시사한다. Purpose : Infection with Shiga-like toxin (SLT)-producing Escherichia coli, an emerging human pathogen found particularly in young children under 5 years of age, causes a spectrum of illnesses with high morbidity and mortality, ranging from diarrhea to hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome. Host mediators play an important role in the pathogenesis of SLT-I toxicity. The experiments described here were designed to investigate the effect of SLT-I on TNF-${\alpha}$ production and to understand the effect of TNF-${\alpha}$ on GB3 expression. We also further examine the relationship between the Gb3 level and the differential susceptibility of cells to the cytotoxic action of SLT-I. Methods : The effect of purified SLT-1 from E. coli O157 : H7 (ATCC 43890) on tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) production in Raw264.7 cells was investigated. Many mediators regulate endothelial cell membrane expression of the glycolipid globotriaosyleramide (Gb3), which serves as the toxin receptor, suggesting that the host response to the toxin or other bacterial products may contribute to pathogenesis by regulating target cell sensitivity to the toxins. Therefore, the relationships between Gb3 expression and cytotoxicity against SLT-I on three types of cells were evaluated. Results : Detectable levels of TNF-${\alpha}$ were produced as early as six hours after induction and continued to increase during 48 hours by SLT-I. It was also found that Vero cells and dendritic cells (DC2.4 cells) expressed high levels of Gb3, 83% and 68%, respectively, and that Raw264.7 cells had a low level of Gb3 (29%) and appeared refractory to cytotoxicity against SLT-I. Vero cells and DC2.4 cells expressing high levels of Gb3 were highly susceptible to SLT-I. Furthermore, macrophages showed a resistance to SLT-I cytotoxicity, despite the fact that Gb3 expression was enhanced. Conclusion : These results strongly suggest that the expression of Gb3 is necessary but not sufficient to confer sensitivity of macrophages to SLT-I and further underpin the important role of SLT-I and its Gb3 receptors in the pathogenesis of E. coli O157 infection.