K562세포의 apoptosis 유도에 미치는 저근백피의 효과

박혜련(Hae Ryoun Park),나문희(Mun Hee Na),윤용갑(Young Gab Yun),전병훈(Byung Hun Jeon),안원근(Won Gun An) 한의병리학회 2004 동의생리병리학회지 Vol.18 No.6

Chios Gum Mastic Induces Cell Cycle Arrest and Apoptosis in YD9 Human Oral Squamous Carcinoma Cells

Jae-Hyoun Park(박재현),Gyoo-Cheon Kim(김규천),Hyun-Ho Kwak(곽현호),In-Ryoung Kim(김인령),Seung-Eun Lee(이승은),Jin Chung(정진),Hae-Ryoun Park(박혜련),Sang-Hun Shin(신상훈),Soo-Hyun Choi(조수현),Chul-Hoon Kim(김철훈),Chang-Ok Nam( 대한체질인류학회 2008 대한체질인류학회지 Vol.21 No.1

식물인 Pistiacia lentiscus L. var. Chia.는 그리이스 키오스 섬의 남부지방에서만 서식하며, Chios gum mastic (CGM)으로 알려져 있는 수지를 만들어 낸다. Pistacia lentiscus 나무의 줄기와 잎에서 추출한 천연물질인 CGM은 과거 수세기 동안 지중해와 중동 지역 국가들에서 음식 첨가물과 치료약으로 광범히 하게 사용되어 왔었다. 본 연구는 사람구강편평상피암종세포(YD9 cells)에서 CGM의 세포독성과 성장억제 효과, 그리고 세포주기의 변형과 세포자멸사(apoptosis)에 대한 분자생물학적 기전을 알기 위해서 수행하였다. YD9 세포와 사람정상각화세포(HaCaT)의 생존률 측정은 MTT법을 시행하였고, YD9 세포의 성장억제를 확인하기 위해서는 clonogenic assay를 사용하였다. 세포자멸사가 유도되는 YD9 세포를 관찰하기 위해서 hoechst 염색법과 DNA 전기영동법을 사용하였다. 그리고 YD9 세포에 CGM을 적용한 후, Western blot 분석, 세포면역화학염색, 공점레이저주사현미경 검경, FACScan flow cytometry, 사립체막 전위변화, proteasome 활성도 측정 등을 시행하였다. CGM으로 처리된 YD9 세포는 용량 의존적인 세포 성장억제와 세포자멸사에 의한 세포죽음을 보였고, caspase-9, caspase-3, PARP 그리고 DFF45 (ICAD)의 파괴와 분절의 생성, DNA의 조각남, 핵 응축, 사립체막전위의 감소, Bax와 Bcl-2의 분율의 변화, cytochrome c의 사립체에서의 세포질로의 유리, AIF와 DFF40 (CAD)의 핵으로의 이동과 같은 세포자멸사 증거를 보였다. Flow cytometry 분석에서는 cyclin D1, cyclin D3, Cdk2 그리고 Cdk4의 발현의 감소와 p21<SUP>WAF1/CIP1</SUP>와 p53의 발현 증가와 관계있는 것으로 보여지는 G1 세포주기 정지를 보였다. 이러한 결과는 CGM이 세포주기 관련 단백질들의 변형을 유도한 G1 세포주기정지와 사립체와 caspase 경로를 통한 세포자멸사를 유도함을 명확하게 증명하고 있다. 이와 같은 강력한 세포주기 정지와 세포자멸사 유도능은 CGM이 사람구강편평세포암종의 새로운 치료전략으로서의 가능성을 높여 준다고 생각한다. Chios gum mastic (CGM) is obtained from the stem and leaves of Pistacia lentiscus trees and has been extensively used for centuries in Mediterranean and Middle Eastern countries, both as a dietary supplement and herbal remedy. This study was undertaken to examine in vitro effects of cytotoxicity and growth inhibition, and the molecular mechanism underlying modulation of cell cycle and induction of apoptosis in YD9 human oral squamous carcinoma cell line treated with CGM. The viability of YD9 cells and human normal keratinocyes (HaCaT cells), and the growth inhibition of YD9 cells were assessed by the MTT assay and clonogenic assay respectively. The hoechst staining and DNA electrophoresis were conducted to observe the YD9 cells undergoing apoptosis. YD9 cells were treated with CGM, and Western blotting, immunocytochemistry, confocal microscopy and FACScan flow cytometry were conducted. Mitochondrial membrane potential change and proteasome activity were measured. CGM treatment on YD9 cells resulted in a does-dependent inhibition of cell growth and induced apoptotic cell death. And tested YD9 cells showed several lines of apoptotic manifestation. Flow cytometric analysis revealed that CGM resulted in G1 arrest in cell cycle progression which was associated with decrease in the protein expression of cyclin D1, cyclin D3, Cdk2 and Cdk4, and increase in the protein expression of p21<SUP>WAF1/CIP1</SUP> and p53. These results demonstrate that CGM induces G1 the cell cycle arrest via the modulation of cell cycle-related proteins, and apoptosis via mitochondria and caspase pathway in YD9 cells, suggesting that CGM can be considered as a novel therapeutic strategy for human oral squamous cell carcinoma from its strong cell cycle arrest and apoptosis-inducing activity.

측두하악관절에서의 골관절염 유도 동물모델 비교연구

유선녕,이영철,박혜련,유미현,전혜미,김광연,김상헌,옥수민,고명연,안용우,안순철,정성희,Yu, Sun-Nyoung,Yi, Young-Chul,Park, Hae-Ryoun,Ryu, Mi-Heon,Jeon, Hye-Mi,Kim, Kwang-Youn,Kim, Sang-Hun,Ok, Soo-Min,Ko, Myung-Yun,Ahn, Yong-Woo,Ahn, Soon- 대한안면통증구강내과학회 2011 Journal of Oral Medicine and Pain Vol.36 No.4

Osteoarthritis in patients with temporomandibular disorders(TMDs) induces pain, limitation of mouth opening, occlusal problems, and most commonly affects their life quality. Control method and progressive process of osteoarthritis are being extensively researched. The researchers focus on histologic changes, synovial changes, muscular and ligamental changes and observed reaction to pain. Therefore most of them developed the animal model for osteoarthritis in TMD patients. In this study, we applied several methods which induces osteoarthritis of temporomandibular joint(TMJ) in rats or mice. For locally induce osteoarthritis in TMJ, Monosodium iodoacetate(MIA) or interleukin-$1{\alpha}$(IL-$1{\alpha}$) were injected into TMJ joint space for 5 or 3 weeks. Other groups are chosen for osteoarthritis under systemic control including hormonal changes and aging. To observe cellular change, increased collagen, degenerative bony destruction and distribution of proteoglycans (PGs), safranin-O staining and Masson's trichrome staining were used.

사상성 곰팡이 (Monascus sp.) 유래 항암 물질의 탐색

신영민(Yeong-Min Sin),박혜련(Hae Ryoun Park),안원근(Won Gun An) 한의병리학회 2005 동의생리병리학회지 Vol.19 No.3

구강 편평세포 암종에서의 CD44 발현

박상준(Sang Jun Park),박혜련(Hae Ryoun Park),김규천(Gyoo Cheon Kim),박봉수(Bong Soo Park),김태규(Tae Kyu Kim) 대한구강악안면외과학회 2000 대한구강악안면외과학회지 Vol.26 No.2

The cell surface glycoprotein CD44 is a kind of adhesion molecule, which binds hyaluronic acid, type I collagen and fibronectin. Although there have been numerous reports on the expression and the function of CD44 in lymphocytes and macrophages, very little is known about its distribution and definite role in epithelial tissue, especially in oral epithelial one. The present study was performed to investigate the distribution and expression of the CD44 in human gingiva and squamous cell carcinoma(SCC) arising in human gingiva. And the authors compared CD44 expression with histopathologic grade of SCC. The results were as follows: 1. The CD44 was strongly expressed in granular, spinous and basal layers of normal marginal and attached gingiva, in spinous and basal layers of normal sulcular gingiva, and in all epithelial layers of normal junctional gingiva. 2. In SCC of gingiva, the CD44 was expressed in all but one case. In most of the cases the CD44 was expressed at cell membrane and the degree of expression was relatively strong. 3. In low-grade SCC of gingiva, the CD44 was strongly expressed, especially at the basal and spinous layers of abundantly keratinized cancer nests. In high-grade SCC of gingiva, the CD44 expression tended to be weak but was strong at cells showing individual keratinization. This study suggest that the CD44 expression of normal and cancerous gingival epithelium is associated with the degree of proliferation and differentiation of epithelial cells.

Hyaluronic Acid에 대한 사람 뼈육종의 부착에 있어서 CD44의 역할

김규찬(Gyoo-Cheon Kim),황윤(Yoon Hwang),박혜련(Hae-Ryoun Park),조기진(Gi Jin Jo),정준영(Jun-Young Chung),유영현(Young-Hyun Yoo),박봉수(Bong-Soo Park) 대한체질인류학회 2001 해부·생물인류학 (Anat Biol Anthropol) Vol.14 No.4

뼈모세포는 분화과정 중에 몇몇 세포밖바탕질 분자들을 단계적으로 발현하며, 이러한 사실은 다양한 부착기작들이 뼈모세포의 분화와 뼈발생을 조정하고 있음을 암시한다. 세포밖바탕질 중의 하나인 hyaluronicacid (HA) 분자는 연골와 세포밖바탕질에 주로 분표하는 glycosaminoglycan (GAG) 후서 매우 큰 분자량을 가지고 있으며 용매와 결합하여 높은 정성을 나타내게 된다. 발생초기와 조직 분화 전의 몇몇 조직에서 세포밖바탕질의 주된 구조적 거대분자를 구생하며, 세포의 증식과 이동을 가능하게 한다. CD44는 HA 에 대한 주된 수용기로 알려져 있으며, 다양한 세포의 표면에서 필수 막 당단백질의 형태로 발현 된다. 세포뼈대인 가는 미세섬유 (actin filament) 와 세포밖바탕질사아에서 막통과신호전달 (transmembrane signalling) 의 가능이 있는 것으로도 알려져 있다. 본 실험에서는 뼈육종세포를 모델로 사용하여 이세포가 HA 에 대한 부착여부와 부착할 때 세포막에 존재하는 CD44 와 GAGs 의 관여여부, 그때 CD44 발현양상에 변화가 있는지를 알아보기 위하여 본 실험을 시행하였다. Has 는 HA 에 대하여 농도 의존적으로 부착하였으며, 부착한 후 180 분 경과 시에 세포의 약 90% 가 HA 에 부착하였다. CD44 와 hyaluronidase, genistein으로 Has 에 전처리 하였을 때 세포의 부착율은 현저하게 감소하였다. 그리고 HA 를 도포한 군에서 Has 는 HA 흉 도포하지 않은 군에 비해 훨씬 많은 CD44를 발현하였다. 이상의 결과를 고려하여 볼 때 Has 는 HA 에 대한 부착 친화성을 가지고 있었으며 이러한 부착에 있어서 세포막 단백질인 CD44 와 세포막에 존재하는 GAGs, 세포질에 존재하며 이차적으로 세포 신호전달계통에 참여하는 단백질인 tyrosine kinases 가 중요한 역할을 한다는 것을 설명하였다.

기저세포모반증후군과 관련된 악골의 다발성 치성각화낭종의 치험례

변준호(June Ho Byun),박성희(Seong Hee Park),김욱규(Uc Kyu Kim),박혜련(Hae Ryoun Park),정인교(In Kyo Chung) 대한구강악안면외과학회 2000 대한구강악안면외과학회지 Vol.26 No.3

The basal cell nevus syndrome is a well recognized entity, the major symptoms of which are basal cell nevi, multiple jaw cysts, skeletal anomalies, and ectopic calcification. The syndrome follows a hereditary pattern, which is characterized by a highly penetrant, autosomal dominant gene with multiple and variable effects. The patient often has a characteristic face, with frontal and temporoparietal bossing, which results in an increased cranial circumference. The eyes may appear widely separated, and 40 percent of patients have true ocular hypertelorism. Jaw cysts are one of the most constant features of the syndrome and are present in at least 75 percent of the patients. The cysts are odontogenic keratocysts and frequently multiple. Radiographically, the cysts in patients with basal cell nevus syndrome do not differ significantly from isolated keratocysts. The cysts in patients with this syndrome are often associated with the crowns of unerupted teeth; on radiographs they may mimic dentigerous cysts. We report a case of multiple odontogenic keratocysts associated with basal cell nevus syndrome with the literature of review.

저근백피 추출물이 유선암 세포에서의 신생혈관 형성에 미치는 영향

정지학(Ji Hak Jeong),윤용갑(Young Gab Yun),전병훈(Byung Hun Jeon),박혜련(Hae Ryoun Park),안원근(Won Gun An) 한의병리학회 2004 동의생리병리학회지 Vol.18 No.6

Apoptotic Effect of Co-Treatment with a Natural Product, Chios Gum Mastic, and a Synthetic Chenodeoxycholic Acid Derivative, HS-1200, on Human Osteosarcoma Cells

Ji-Hak Min(민지학),Min-Jeong Kim(김민정),In-Ryoung Kim(김인령),Seung-Eun Lee(이승은),Hyun-Ho Kwak(곽현호),Gyoo-Cheon Kim(김규천),Hae-Ryoun Park(박혜련),Sang-Hun Shin(신상훈),Chul-Hoon Kim(김철훈),Na-Young Jeong(정나영),Hongsuk Suh 대한체질인류학회 2008 대한체질인류학회지 Vol.21 No.2

Chios gum mastic(CGM)은 그리이스 지역에서만 서식하는 Pistacia lenticulus 나무의 줄기와 잎에서 추출한 수지상의 천연 추출물이다. 합성 chenodeoxycholic acid(CDCA) 유E씨가 여러 가지 암세포에 유도한 세포자멸사 연구들이 보고되어져 왔다. 본 연구는 천연물질인 CGM과 항성 CDCA 유도체인 HS-1200의 병용처리가 사람골육종세포에 효과적인 상승 세포자멸사 효과가 있는지를 알기 위해서 수행되었다. CDM과 HS-1200의 병용처리가 단독처리에 비해서 효과적인 세포생존율 감소가 있는지 확인하기 위해서 MIT법을 시행하였고, 세포자멸사의 유도와 증가를 확인하기 위해서 Hoechst 염색법과 DNA 전기영동법을 사용하였다. 병용처리 때, 세포자멸사에 관계하는 단백질의 발현 변화와 세포내에서의 이동을 밝혀내기 위해서 Western bot 분석과 면역형광염색법을 수행하였다. 더 나아가서 proteasome 활성도와 사립체막 전위 변화를 측정하였다. 병용처리 된 사람골육종세포는 단독처리 된 사람골육종세포에서 거의 관찰할 수 없었던 많은 핵 응축, DNA 조각남, 사립체막 전위와 proteasome 활성도의 감소, DNA 양의 감소, cytochrome c의 세포질로의 유리, AIF와 DFF40(CAD)의 핵으로의 이동, caspase-7, caspase-3 그리고 PARP의 활성화와 같은 세포자멸사 증거를 보였다. 24시간 동안 40㎍/mL CGM과 25μM HS-1200을 각기 단독처리 한 결과에서는 세포자멸사를 유도 못했으나, 병용처리한 결과에는 아주 탁월한 세포자멸사의 유도를 보였다. 이러한 병용처리 결과는 사람골육종의 새로운 치료적 전략으로 응용될 수 있다고 생각한다. Chios gum mastic (CGM) is a resinous exudate obtained from the stem and the main leaves of Pistacia lenticulus tree native to Mediterranean areas. Recently it reported that CGM induced apoptosis in a few cancer cells in vitro. It has been reported that the synthetic chenodeoxycholic acid (CDCA) derivatives showed apoptosis-inducing activity on various cancer cells in vitro. This study was undertaken to investigate the synergistic apoptotic effect of co-treatment with a natural product, CGM and a CDCA derivative, HS-1200 on human osteosarcoma (HOS) cells. To investigate whether the co-treatment of CGM and HS-1200 compared with each single treatment efficiently reduced the viability of HDS cells, MTT assay was conducted. Induction and augmentation of apoptosis were confirmed by DNA electrophoresis, Hoechst staining and DNA hypoploidy, Westen blot analysis and immuno-fluorescent staining were performed to study the alterations of the expression level and translocation of apoptosis-related proteins in co-treatment. Furthermore, proteasome activity and mitochondrial membrane potential (MMP) change were also assayed. In this study, HOS cells co-treated with CGM and HS-1200 showed several lines of apoptotic manifestation whereas each single treated HOS cells did not. Although the single treatment of 40 ㎍/㎖, CGM or 25 μM HS-1200 for 24 h did not induce apoptosis, the co-treatment of them induced prominently apoptosis. Therefore our data provide the possibility that combination therapy of CGM and HS-1200 could be considered as a novel therapeutic strategy for human osteosarcoma.

모반양 기저세포암종 증후군

박혜련,한영임,설미영,이선경 대한병리학회 1995 Journal of Pathology and Translational Medicine Vol.29 No.2