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KIOM-79에 의한 p65 단백질의 핵내 이동 및 iNOS 발현 억제
김진숙(Jin-Sook Kim),장대식(Dae-Sik Jang),전영진(Young-Jin Jeon),유호진(Ho-Jin You),박경한(Kyeong Han Park),김 명(Jin Ming),문형윤(Hyung-Yoon Moon),윤상필(Sang-Pil Yoon),장인엽(In-Youb Chang) 대한해부학회 2006 Anatomy & Cell Biology Vol.39 No.2
후박 (Magnolia officinalis), 갈근 (Pueraria lobata), 감초 (Glycyrrhiza uralensis) 및 대극(Euphorbia pekinensis)은 염증성질병을 포함한 다양한 질병을 치료하기 위해 사용되었다. 본 실험에서는 각각의 천연물의 복합추출물인 KIOM-79가 큰포식세포에서 inducible NO synthase (iNOS) 유전자의 발현을 억제시키는 기전을 밝혀내기 위하여 면역형광염색, RT-PCR, electrophoretic mobility shift assay (EMSA) 등을 실시하였다. 면역형광염색 소견을 보면 RAW 264.7 세포에 lipopolysaccharide (LPS)에 의해 유도된 iNOS 단백질의 발현이 KIOM-79에 의해 억제되는 것을 알 수 있다. Western blot과 RT-PCR 분석에 의하면 KIOM-79가 LPS에 의한 iNOS의 발현을 억제함을 확인 할 수 있다. LPS와 KIOM-79를 처리한 RAW 264.7 세포에서 nuclear extract를 추출하여 EMSA로 분석한 결과, LPS에 의해 유도된 NF-κB/Rel의 DNA 결합이 KIOM-79에 의해 억제됨을 확인하였다. 면역형광염색 소견을 보면 NF-κB/Rel의 구성단백질 중의 하나인 p65단백질은 세포질에서 발현되고 있으며, LPS를 처리하면 p65가 핵으로 이동함을 알 수 있다. 이때 KIOM-79를 처리하면 LPS에 의한 p65의 핵 내 이동이 억제됨을 확인할 수 있다. 결론적으로, KIOM-79는 큰포식세포에 작용해 iNOS 유전자의 발현을 억제하며, 이러한 큰포식세포의 활성억제는 p65 단백질의 핵 내 이동 억제를 통해서 유도되는 것으로 사료된다. We demonstrate that KIOM-79, combined extracts isolated from Magnolia officinalis, Pueraria lobata, Glycyrrhiza uralensis, and Euphorbia pekinensis, inhibits LPS-induced expression of iNOS gene in RAW 264.7 cells. Treatment of RAW 264.7 cells with KIOM-79 inhibited LPS-stimulated nitric oxide production in a doserelated manner. Immunohisto-chemical staining of iNOS and RT-PCR analysis showed that the decrease of NO was due to the inhibition of iNOS gene expression. Immunostaining of p65 and EMSA showed that KIOM-79 inhibited NF-κ/Rel nuclear translocation and DNA binding, respectively. Collectively, this series of experiments indicates that KIOM inhibits iNOS gene expression by blocking NF-κ/Rel. Due to the critical role that NO release plays in mediating inflammatory responses, the inhibitory effects of KIOM-79 on iNOS suggest that KIOM-79 may represent a useful anti-inflammatory agent.
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