경구용 장티푸스백신 Salmonella typhi 균주 Ty 21a

정성균,정대균 경희대학교식량자원개발연구소 2007 硏究論文集 Vol.24 No.-

장티푸스를 일으키는 원인 균은 Samonella typhi이다. 이 장티푸스균은 1880년 Eberth(Germanier, 1972)에 의해 환자의 장간 림프절 (mesenteric lymph nodes)에서 처음으로 발견되었으며, 1884년 Gaffky에 의해 처음으로 분리되었다. Samonella typhi는 그람음성의 운동성이 있는 박테리아로 장내세균과(Enterobacteriaceae) 군에 속한다. 이 균은 발효를 할 수 있다는 점과 3가지 종류의 표면 항원 구조에 의해 다른 Salmolnella 종과는 구별되어진다. 3가지 항원은 H, O, Vi으로 H 항원은 flagellar 구조를 하고 있다. O항원의 특이성은 세포벽의 lipopolysaccharide를 구성하고 있는 다당류의 당 성분에 기인한다. O 항원이 결여된 Salmonella는 이 항원을 가진 균에 비해 훨씬 덜 독성을 가지기 때문에 O 항원은 Salmonella가 병원성이 되게 하는데 중요한 요소이다. Vi 항원은 Enterobacteriaceae 중 소수만이 함유하는 가장 바깥의 다당류 층을 구성한다. S. typhi의 Vi 항원은 N-acetylgalactosaminuronic acid로만 구성된 homopolymer이다. Vi 항원은 생쥐에서의 병원성과 연관되어 있고 S. typhi 면역성을 부여하기도 한다. 그러나 사람에서도 Vi가 독성을 유발하는지는 분명치 않다.

B형 간염바이러스 항원 preS 및 S부위가 안정적으로 발현되는 CHO세포주 선별

정성균,한만덕,정대균 경희대학교식량자원개발연구소 2007 硏究論文集 Vol.26 No.1

In order to develop vaccines against HBV, 10 different plasmids expressing various regions of hepatitis B surface antigen (HBsAg) were constructed, first. Then, CHO cells were transfected with the plasmids and examined their HBsAg expression levels. We then established CHO transfectants expressing dhfr and HBsAg using pIEsp2878-dhfr plasmid and treated them with methotrexate (MTX). Finally, we selected IY-CHO-2 and IY-CHO-11 cell lines showing the amplified expression of HBsAg containing pre-S2 and S region. These cell lines expressed expected correct size (about 1 kb in lengte) of HBsAg mRNA.

B형 간염바이러스 항원 preS 및 S부위가 포함된 동물세포 발현벡터의 제작

정성균,윤미숙,정대균 경희대학교식량자원개발연구소 2007 硏究論文集 Vol.26 No.1

현재까지 혈장유래 백신이나 재 조합 DNA 기술을 이용한 백신이 HBV 감염을 우수하게 억제하였음에도 불구하고, 성 관련 질병이나 마약중독 환자의 경우 낮은 면역력을 나타내며, HLA haplotype 유전자의 이상으로 인하여 T 세포 면역 반응이 활성화 되지 않는 환자들에게는 제한적인 면역능이 확인되고 있다. 이와 같은 문제점을 해결하기 위하여 기존에 사용하던 S 항원에 Pre S1이나 Pre S2 항원을 첨가하는 새로운 백신 개발에 많은 연구가 진행되고 있다. Pre S2 항원은 HBV 비리온의 표면에 존재하는 표면 단백질이며(Heermann 등, 1984) human serum albumin과 결합 한 후(Krone 등, 1990) 간세포의 표면에 존재하는 human serum albumin receptor를 통하여 HBV를 간세포에 결합시키는 역할을 한다(Pontisso 등, 1989). 또한 pre S2 항원은 현재 S 항원 a 결정자의 HBV의 subtype 별 아미노산 차이에 의한 B 세포 관련 면역성 차이를 극복할 수 있어 heterologous strain의 감염에 따른 비 면역성의 문제를 극복 할 수 있다. 이와 같은 pre S2 항원의 특징을 근거로 하여 본 연구에서는 pre S2와 S 항원을 백신으로 사용하고자 발현벡터인 pIEspHBVS2-dhfr을 제작하였다. 일반적으로 포유동물 세포주에서 고 농도의 단백질을 발현시키기 위한 방법으로 2가지 구별된 벡터를 사용한다. 그 중 하나는 cytotoxic drug인 methotrexate(MTX)와 반응하여 유전자가 증폭되는 dihydrofolate reductase 유전자(dhfr)을 포함하는 발현 벡터를 사용하는 것이며, 다른 하나는 chromatin structure을 조절하는 요소인 matrix attachment regions(MARs)와 scaffold attachment regions(SAR)을 사용하여 높은 transcriptional 활성을 나타내는 유전적 환경을 제공함으로써 유전자 발현을 증가시키는 벡터를 사용하는 것이다(Raju 등, 2001). 또한 포유동물세포에서 외래 유전자 발현의 최대화는 프로모터의 세기와 연관이 있음으로, 우수한 프로모터를 사용하는 것이 가장 필수적이다. 이런 이유로 본 연구에서는 HBsAg유전자 증폭을 위하여 dihydrofolate reductase 유전자(dhfr)와 다양한 포유동물세포에서 강력한 프로모터로 알려져 있는 HCMV immediate-early enhancer promotor를 사용하였다(Kim 등, 2002). 따라서 본 연구에서 제작된 발현벡터인 pIEspHBVS2-dhfr은 dhfr 유전자가 발현시키고자 하는 HBsAg 유전자와 동일한 벡터 내에 존재함으로 이 벡터를 포유동물세포주인 CHO 세포에 형질 전환 시 동시에 CHO 세포 내로 도입되고 또한 염색체 DNA상의 동일 위치에 삽입되게 되어 동시 발현함에 따라 dhfr 선별배지에서 선별된 dhfr 양성 세포주들 모두는 고농도의 HBsAg 단백질을 발현할 것으로 사료된다. A new mammalian cell expression vector for HBsAg, preS and S, was constructed using HCMV imediate early enhancer promoter. In order to develop vaccines against HBV, 10 different plasmids expressing various regions of hepatitis B surface antigen (HBsAg) were constructed. In order to amplify the HBsAg expression, we inserted dihydrofolate reductase (dhfr) gene into the plasmid containing nucleotide 2878 to 846 of HBV genome (pIEsp2878-dhfr).

폐장암에서 p53과 PCNA 표출에 관한 연구

김대중,양승하,정도영,강상균,김의한 순천향의학연구소 1997 Journal of Soonchunhyang Medical Science Vol.3 No.1

To observe the expression of p53 protein and PCNA in lung carcinomas and to evaluate the correlationship between the two results, the author has been carried out immunohistochemical staining with mononuclear antibodies against p53 and PCNA. 64 cases of lung carcinomas used consist of 32 cases of squamous cell carcinomas, 18 cases of adenocarcinomas and 14 cases of small cell carcinomas, respectively. 1. p53 protein expression was seen in 16 cases out of 32 (50%) in squamous cell carcinoma, 7 cases out of 18 (39%) in adenocarcinoma and 10 cases out of 14 (71%) in small cell carcinoma. The positive rate of p53 is highest in small cell carcinoma. 2. p53 staining degrees showed that 3+ in 75% of squamous cell carcinoma, 1+ in 58% of adenocarcinoma and 1+ in 50% in small cell carcinma. were observed. The tumor cell composing of squamous cell carcinoma showed most strong staining to p53 protien. 3. PCNA labelling index showed higher index in p53(+) cases than p53(-) cases. The PCNA index of squamous cell carcinoma was highest and adenocarcinoma and small cell carcinoma in order. Above findings suggested that the PCNA index was related to p53 protein in tumor cells, but the PCNA index appeared to be influenced by the p53 protein content in tumor cells than whether the p53 protien was or not. So the growth rate of squamous cell carcinoma appeared to be most rapid than adenocarcinoma and small cell carcinoma.

E. coli에 의한 1세 미만 요로 감염의 치료에 방광요관역류가 미치는 영향

김형대,이상윤,이균우,정현기 고신대학교의과대학 2006 고신대학교 의과대학 학술지 Vol.21 No.2

Background : Vesicoureteral reflux(VUR) is the major cause of urinary tract infection(UTI) in children. The study was done to confirm the influence of vesicoureteral reflux on treatment of urinary tract infection. Methods : One hundred seventy one patients below 1 year old diagnosed with UTI by Escherichia. coli (E. coli) in the Department of Pediatrics, Dae-Dong Hospital from January, 2001 to December, 2005 were retrospectively enrolled to analyze relevant information obtained from medical record, including hematologic and urine analysis, renal ultrasonography, 99mTc-DMSA renal scan, antimicrobial susceptibilities and response of treatment, comparing two group of absence and presence of VUR. Results: Leukocytosis and decreased Hemoglobin level was predominent and the rate of bacteriuria and nitrite positivity were 84.1% and 40.4% respectively. Renal ultrasonography didn't contribute to the prognostication of VUR. Presentation of photopenic area in 99mTc-DMSA renal scan was related to VUR and the severity of VUR was significantly correlated with renal scar formation(P<0.05). Average count of administrated intravenous cefotaxime for treatment of UTI was 2.4 times until afebril state, 9.6 times until loss of pyuria and 2.2 times until no growth of Escherichia. coli in urine. Conclusion : There was no differentiations in WBC count, Hb level, urine analysis and response of treatment estimated by count of administrated intravenous cefotaxime until afebrile state, loss of pyuria and no growth of E. coli in urine between the group of absence and presence of VUR.

Saccharomyces cerevisiae에서 Clostridium thermocellum Endoglucanase 유전자의 구성적 발현

남수완,정대균,정봉현 동의대학교 기초과학연구소 1998 基礎科學硏究論文集 Vol.8 No.1

To develop an effective and powerful yeast probiotics, Saccharomyces cerevisiae strains producing cellulolytic enzymes were genetically engineered. We constructed two plasmids in which the endoglucanase A gene, celA, of Clostridium thermocellum was connected in frame with ADH1 or GAPDH promoter. These plasmids were transformed into various S. cerevisiae host strains, and then the cell growth, expression level and plasmid stability between the transformed yeast cells were examined in the flask culture. The difference in genetic background of host strains did affect significantly the cell growth and expression level of endoglucanase. Based on the higher levels of cell growth(5.4∼5.9 g-DCW/L) and plasmid stability(79∼85%), three host cells(YNN27, 2805 and SEY2102) and ADH1 promoter were selected as optimal host-vector systems for the constitutive expression of celA. The recombinant yeast produced about 200 unit/L of endoglucanase as a growth-associated manner in the batch fermentation, due to the increased cell growth of 11∼13 g-DCW/L. In addition, 25∼38% and 53∼64% of the endoglucanase activity were detected in the culture medium and periplasmic space, respectively. These results indicate that the signal sequence of celA functioned well in S. cerevisiae cells and the recombinant yeast cells can be employed for the production of probiotics.

CC Chemokine CKβ8의 발현 조절 물질 탐색 및 저해활성 물질 분석

김탁용,이태훈,백남인,정대균,김지영 경희대학교식량자원개발연구소 2005 硏究論文集 Vol.24 No.-

CKβ8은 CC 케모카인의 부류에 속하는 사이토카인의 일종으로, 단핵구, 호염구, 호산구, T 림프구, 자연살해세포, 수지상세포 등의 화학주성물질로 작용하는 것으로 알려져 있다. CKβ8은 염증반응 및 혈관신생 등과 같은 여러 가지 생체 반응에 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 본 논문에서는 사람 CKβ8 유전자의 전사저해 물질을 선별하기 위하여 CKβ8/Luc 유전자를 발현하는 세포주를 확립하였다. CKβ8 유전자의 전사시작점에서 -299 부터 +10 프로모터 부위를 PCR에 의해 얻은 다음 포유세포 발현 플라스미드에 클로닝하였다. CKβ8/Lvc 유전자는 U937 세포내에서 PMA에 의해 10배 이상 발현이 증가한다. CKβ8/Luc 발현 U937 세포주는 식물 추출물에서 전사 저해제를 탐색하는데 이용되었다. 46 개의 식물 추출물 중에서 6개가 90% 이상 CKβ8/Luc의 전사를 저해하였다. 이들 물질에 대해 세포 독성 실험을 수행한 결과 그 중 한 개만이 세포 독성이 거의 없는 것으로 나타났다. 이 추출물은 붉나무에서 얻은 추출물이며 이 식물 추출물은 염증관련 질환에 대한 가능성이 있는 치료제로 이용될 수도 있을 것으로 추측된다. Ckβ8 belongs to a family of CC chemokines, which is known to act as a chemoattractant for monocytes, basophils, eosinophils, T lymphocytes, NK cells, and dendritic cells. CKβ8 is known to play roles in various biological processes such as inflammation and angiogenesis. In the present study, we developed U937 cell line expressing CKβ8/Luciferase fusion gene for screening of transcriptional inhibitors for human CKβ8 gene. Genomic sequences that contain CKβ8 promoter region from 299 to+10 nucleotide from the transcription start site was amplified by PCR and cloned into mammalian episomal plasmid. The CKβ8/Luc fusion plasmid was introduced into human promonocytic U937 cells and selected for stable U937 cells expressing the fused reporter gene. The expression of the fusion gene was induced by more than 10 folds upon treatment of phorbol myristate acetate. The stable U937 transfectant cells were used for searching transcriptional inhibitors for human CKβ8 gene from plant extracts. Among 46 plant extracts tested, six extracts exerted more than 90% inhibition of PMA-induced CKβ8 transcription. Cytotoxic tests demonstrated that one of extracts, which was extracted from Rhus chinensis Mill, had little cytotoxic effect. The extract may be used for developing a potential therapeutic agent for inflammatory diseases.

혈액투석 환자에게서 발생한 재생불량성 빈혈 1예

정지용,윤나라,강대웅,오종찬,장재현,선길홍,박경희,정종훈,김현리 朝鮮大學校 附設 醫學硏究所 2005 The Medical Journal of Chosun University Vol.30 No.1

Aplastic anemia is a disease characterized by pancytopenia in the peripheral blood and hypocellular bone marrow with the fatty infiltration. The causes of the acquired aplastic anemia were usually related to drugs and immune-related diseases. A 34-years old man was admitted due to general weakness. He has been going hemodialysis for 2 years because of end stage renal disease (ESRD) due to chronic glomerulonephritis. At admission, laboratory tests showed hemoglobin 6.2 g/dL, hematocrit 18.0 %, WBC 5,710mm (neutrophil 71.8%, lymphocyte 19.1%, monocyte 5.9%), reticulocyte 1.9%, platelet 93,000/mm, Fe 12.8 ug/dL, TIBC 204 ug/dL, ferritin 941.47 ng /ml, haptoglobin 0.72 g/L, vitamin B12 508.17 pmol/L, folate 24 ng/mL, total protein 6.54 g/dL, albumin 3.76 g/dL, Alk. pohsphatase 79 IU/L, AST 30.0 IU/L, ALT 39.7 IU/L, total bilirubin 0.57 mg/dl, BUN 79.4 mg/dl and creatinine 10.18 mg/dl. Peripheral blood smear showed the normocytic normochromic anemia with anisocytosis. Anemia was diagnosed but it was irresponsive to the recombinant human erythropoietin (EPO) and blood transfusion. In the bone marrow aspiration smear were there the hypoplastic myeloid and erythroid precursors. The bone marrow biopsy section showed the hypoplasia of all components (10-20%) and the fatty infiltration. We have experienced one case of the idiopathic aplastic anemia in a patient going through hemodialysis and we just report it with documentary records. 저자들은 혈액 투석 중인 환자에서 약물, 면역계 이상등의 원인을 발견할 수 없었음에도 재생 불량성 빈혈이 발생한 1예를 경험하여 문헌 고찰과 함께 보고하는 바이다.

상추(Lactuca sativa L.)의 ACAT 억제 Diterpenoid, Phytol : 식용 식물자원으로부터 활성물질의 탐색 Development of Biologically Active Compound from Edible Plant Sources

장태오,방면호,송명종,홍윤희,김지영,정대균,배동근,권병목,김영국,이현선,김인호,백남인 한국농화학회 2003 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.46 No.1

Saccharomyces cerevisiae에서 Trichoderma Endoglucanase의 발현과 분비

남수완,김병우,신동하,김재범,신지원,정대균,정춘수 동의대학교 기초과학연구소 1999 基礎科學硏究論文集 Vol.9 No.1

The endoglucanase gene, egl6, of Trichoderma sp. was connected with the yeast ADH1 promoter, and the resultant plasmid, pVT-C4, was introduced into three S. cerevisiae host strains (YNN27, 2805, and SEY2102). Among each 80 transformants, the cell growth and expression level of endoglucanase were compared in test-tube cultivation, and three respective transformants for each host cells showing the highest expression level and cell growth were selected. When three recombinant yeast cells were batchwise cultivated for 48 hr in flask, the total activities of endoglucanase expressed were about 1140 unit/1 with 2805/pVT-C4, 1020 unit/l with SEY2102/pVT-C4, and 590 unit/l with (YNN27/pVT-C4. Irrespective of host strain, about 80% of the expressed endoglucanase was detected in the extracellular medium. In addition, it was also found that the recombinant enzyme was secreted into the culture medium as two major forms of lightly and heavily glycosylated proteins.