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Lipopolysaccharide를 투여한 흰쥐 콩팥에서 iNOS 발현과 NADPH-diaphorase 활성의 비교
최재연(Jae youn Choi),이소영(So yeong Lee),차정호(Jung-ho Cha) 대한해부학회 2009 Anatomy & Cell Biology Vol.42 No.4
유도성 산화질소합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)는 다양한 생리작용에 관여함으로 많은 연구가 이루어져 있다. 그러나 형태학적 연구보고는 연구자에 따라 매우 달라서 iNOS의 발현에 대한 검토가 필요하다. 본 연구에서는 4개 회사(Chemicon, CH; Sigma, SI; Transduction Laboratorie, TL; Upstate, UP)의 iNOS 항체의 면역염색결과를 비교하고, 모든 아형의 NOS에 대한 염색이 가능한 NADPH-diaphrase에 대한 광학적 및 전자현미경적 효소조직화학법을 병용함으로써 iNOS 발현을 확인하고자 하였다. SD계 흰쥐에 LPS를 투여하고 iNOS의 발현을 유도하였다. LPS 투여군에서 NADPH-d 전자현미경적 효소조직화학법의 결과 반응산물의 위치가 세포질기질에 있는 세포와 사립체에 있는 세포로 구별되었다. 반응산물이 세포질기질에 있는 세포는 치밀반점, 내림가는세관(DTL), 주머니상피(CE) 및 사이질의 유주세포(WC)이며, 대부분 세뇨관의 세포에는 사립체에 반응산물이 위치하였다. LPS 투여군에서 DTL, CE 및 WC가 염색된 항체는 TL과 UP이나, 사립체에 반응산물이 있는 세뇨관세포도 일부 염색되었다. 본 실험의 결과로서 NDAPH-d 효소조직화학법을 병용하면 iNOS를 발현하는 세포를 정확하게 동정할 수 있을 것으로 생각된다. Inducible nitric oxide synthase(iNOS) has been known to be involved in the various physiological metabolim and has been attracting topic. However, there are extensive differences in the reports about the localization of iNOS expression. To resolve this discrepancy, we compared immunohistochemical data from four iNOS antibody produced by different company(Chemicon, CH; Sigma, SIl Transduction Laboratories, TL; Upstate, UP), and NADPH-diaphorase(NADPH-d) enzyme-histochemical results using light- and transmission electorn-microscope in the lipo-polysaccharide(LPS)-treated rat kidney. Electron microscopical examination revealed two different distribution of the NADPH-d reaction product. In the majority of NADPH-d reaction-positive cells, reaction depositions were restricted to the mitochondia, and in the cells of macula densa, descending thin limb(DTL), capsular epithelium(CE) and interstitial wandering cells(WC), NADPH-d positivities were found in the cytoplasm. In immunohistochemical results from LPS-treated animal, DTL, CE and WC were positively stained with TL and UP antibodied but with CH and SI antibodies. We conclude that NADPH-d histochemistry may be usefull for identifing the iNOS-positive cells morphologically.
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흰쥐 콩팥발생과정에서 interleukin-6와 그 수용체의 발현
이충범(Choong-Bum Lee),하유신(Ha-U Syn),조대행(Dae-Haeng Cho),최재연(Jae-Youn Choi),차정호(Jung-Ho Cha) 대한체질인류학회 2007 해부·생물인류학 (Anat Biol Anthropol) Vol.20 No.4
Interleukin-6 (IL-6)와 그 수용체는 신경발생조직에서 중요한 기능을 담당하는 것으로 알려져 있으나, 콩팥의 발생과정에서의 기능은 거의 보고된 바가 없다. 본 연구에서는 IL-6와 그 특이수용체인 IL-6R의 발현을 흰쥐의 발생중인 콩팥에서 조사하였다. 임신 16, 18 및 20일 태아와 출생후 1, 3, 7, 14일의 동물 및 성체의 콩팥을 사용하여 IL-6와 그 수용체의 발현을 면역조직화학법과 in situ hybridization 법으로 각각 관찰하였다. IL-6 단백질은 임신 16일의 태아에서 이미 발현되었으며, 요관싹과 사이조직의 중간엽세포를 포함하여 콩팥단위발생구역의 여러 발생단계의 콩팥단위 구조물에 강한 면역반응성을 보였다. 그러나 성숙된 사구체와 근위세관에서는 발현되지 않았다. 출생후의 동물에서도 콩팥단위발생구역에서의 발현양상은 태아의 것과 같았으며, 성숙된 콩팥세관에서는 원위세관과 집합세관에 강한 면역반응성이, 굵은오름세관에 매우 미약한 면역반응성이 관찰되었고, 이러한 양상은 성체에까지 계속되었다. IL-6R mRNA의 발현은 임신 16일의 태아에서 이미 관찰되며, 출생전 태아 콩팥에서의 발현부위는 IL-6의 것과 유사하였다. 출생후의 성숙된 콩팥단위에서의 IL-6R mRNA 발현은 원위세관, 굵은오름세관 및 집합세관에서 관찰되었으며, 근위세관에서는 S3 부분에서만 발현되었다. 본 연구의 결과로서 IL-6가 그 수용체를 통하여 콩팥단위발생의 초기과정에 관련되어 역할을 담당하고 있는 것으로 보여지며, 성숙된 콩팥에서도 IL-6 단백질과 그 수용체가 계속 발현되는 것으로 보아 일정한 기능을 담당할 것으로 생각된다. Interleukin-6 (IL-6) and its receptor are presumed to play important roles in the developing nervous system. However, little is known about their potential role(s) in the developing kidney. To investigate this, we have studied the expression of IL-6 and its receptor (IL-6R) in the developing rat kidney. Kidneys from 16- (F16), 18- and 20-day-old (F20) fetuses, 1- (P1), 3- (P3), 7- (P7) and 14-day-old (P14) pups, and adult rats were extracted. Renal expressions of IL-6 and its receptors were examined by immunohistochemistry and in situ hybridization respectively. Il-6 protein already appeared in F16. The early stage of renal development before birth, IL-6 showed strong immunoreactivity in the ureteric bud, metanephric mesenchymal cells (MMC) and developing glomerulus. The expression pattern of IL-6 in nephrogenic zone are very similar even after birth. In matured nephron after birth, IL-6 immunoreactivities were detected in distal tubules strongly, and collecting ducts moderately and thick ascending limb weekly. IL- 6R hybridization signals have also already appeared in 16-day old fetal kidney. Before birth, IL-6R mRNAs were expressed in ureteric bud, MMC and developing glomerulus. In the matured nephron after birth, IL-6R mRNA was expressed in the thick ascending limb, distal tubules, collecting ducts and S3 segment of proximal tubule. These results suggest that IL-6 and its receptor may be involved in regulation of nephron formation in nephrogenic zone of rat, and play a role in distal nephron including collecting duct after birth.
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