Poster Ⅱ : Escherichia coli cells overproducing C5 protein the protein component of RNase P

최영내,이영훈 한국생화학분자생물학회 (구 한국생화학회) 1992 추계학술대회집 Vol.- No.-

시행정은 실현가능성 있는 계획부터 : 새로운 관광개발법제정토록 노력할 터

최영내 대한지방행정공제회 1970 도시문제 Vol.5 No.11

LC-MS/MS를 이용한 농산물 중 Chlormequat 분석법 개발 및 유효성 검증

최영내,이두식,김희재,김정년,김정복 한국식품영양과학회 2020 한국식품영양과학회지 Vol.49 No.1

Chlormequat is a two quaternary ammonium compound that is used widely as a pesticide for various plants. LC-MS/MS using WCX cartridges was used to identify and quantity the level of chlormequat in agricultural products with high sensitivity and specificity. A calibration curve was obtained from 10 ng/mL to 200 ng/mL with a satisfactory correlation coefficient of 0.999. The limit of detection and limit of quantitation for chlormequat in matrix the were 0.0002 mg/kg and 0.001 mg/kg. The recoveries of chlormequat from spiked samples at 50∼500 ng/mL ranged from 94.4 to 111.6% with a relative standard deviation between 1.7 to 4.5%. The measurement of uncertainty of the LC-MS/MS method developed for chlormequat was based on the analytical process and quantification. An analysis method that is easier and faster than the chlormequat analysis method of agricultural products in the Korean Food Standards Codex was developed. The analytical method of chlormequat in agricultural products by LC-MS/MS was established. 우리나라 식품의 기준 및 규격의 일반시험법에 수재된 chlormequat의 시험법에서는 물과 메탄올 혼합액으로 추출 한 용액을 강산성양이온교환수지로 정제 후 합성된 트리타트륨벤젠치오라이트 시약을 이용하여 GC-NPD 분석장비로 농산물 중 chlormequat을 분석하고 있다. 이 분석방법에 사용되는 트리타트륨벤젠치오라이트은 현재 시중에 판매되지 않고 있으며, 직접 합성해야 하고 그 시간도 최소 3일 이상으로 소요되는 어려움이 있다. 따라서 본 연구에서는 메탄올과 물을 이용하여 농산물에서 chlormequat 성분을 추출하고, WCX 카트리지를 이용한 정제방법을 이용하여 농산물 중 chlormequat의 분석법을 확립하였고 유효성 검증을 실시하였다. 시료 중의 chlormequat을 분석에 사용한 컬럼은 Scherzo SM-C18(4.6×150, 3 μm), 이동상은 10% ACN 함유 50 mM ammonium acetate, 2% acetic acid, oven 온도는 40°C, 유속은 0.3 mL/min으로 분석하였다. Mass 분석조건으로는 분석물질의 분자량은 m/z=122.1의 정량이온 m/z=58.1(38), 정성이온 m/z=63(29), positive 이온, ESI 이온모드를 이용하여 분석하였다. 직선성 확인을 위해 matrix를 적용한 표준용액 10, 20, 50, 100, 200 ng/ mL로 희석하여 LC-MS/MS에 분석하였고 그 결과 모든 결정계수(r2) 0.999 이상의 직선성을 확인하였다. 검량선 내 3가지 농도 10, 50, 100 ng/mL를 선정하여 일내와 일간의 정밀성 및 정확성 측정 결과 일내 정밀성은 3.3% 이하, 정확성은 94.8~102.9%로 확인되었으며, 일간 정밀성은 10.6% 이하, 정확성은 103.2~104.8%로 확인되었다. 시험법의 정밀성과 회수율 평가를 위해 농약 잔류허용기준(maximum residue limit=0.1 mg/kg)의 농도를 선정하여 chlormequat의 회수율 실험을 3가지 농도를 3반복으로 수행하여 94.4~ 111.6%의 회수율을 확인하였고, 상대표준편차는 4.5% 이하로 확인되었다. 검출한계는 0.0002 mg/kg, 정량한계는 0.001 mg/kg으로 측정되었다. 측정 불확도는 10.00±0.85 mg/kg(신뢰수준 95%, K=2)으로 확인되었다. 확립된 chlormequat 분석법을 적용하여 기존 분석법보다 단순한 시료 전처리법 개발을 통해 분석시간의 단축뿐 아니라 경제적 비용을 절감하였고, 개발된 분석법의 유효성 검증을 통해 정량분석이 가능하게 되었다. 이런 분석법 개발을 통해 잔류농약을 분석자뿐 아니라 기준규격 설정과 사후관리에 참고 자료가 될 수 있다고 판단된다.

GC-MS/MS를 이용한 원유 원료 중 농약 동시분석법 확립

최영내,신윤호,조황의,김정복,Young Nae Choi,Yoon ho Shin,Hwangeui Cho,Jung Bok Kim 한국식품위생안전성학회 2023 한국식품위생안전성학회지 Vol.38 No.6

본 연구에 선정된 농약성분은 사용목적에 따른 분류 기준으로 살충제에 해당되며, 유효성분 조성에 따른 분류의 경우 유기인계 농약성분 2가지, 농약 중 가장 범용적으로 사용되고 있는 피레스로이드 농약성분 3가지이다. 원유 중 5가지 농약성분인 chlorpyrifos, chlorpyrifos-methyl, cypermethrin, deltamethrin 및 permethrin 등은 시료와 분석물질의 특성을 고려하여 2그룹으로 나누어 시료전처리를 확립하였고 LLE와 카트리지를 이용하여 원유 중에 농약성분을 분석하였다. GC-MS/MS을 이용하였고 사용된 컬럼은 HP-5MS(30 m×0.25 mm ID, 0.25 ㎛)를 사용하였다. 검량선의 농도는 10-200 ng/mL이고, 각각의 분석물질의 결정계수(R²)가 0.997 이상으로 확인하였다. 정밀성과 정확성을 확인하기 위해 검량선 내 3가지 농도 선정하여 일내와 일간의 정밀성 및 정확성을 측정하였다. 5개의 분석물질의 일내 일간 정밀성은 10.3% 이하, 정확성은 100.9-117.5%의 범위로 확인되었다. 확립된 분석법의 회수율 측정을 위해 농약기준 규격의 잔류허용기준을 참고하여 가장 낮은 농도를 선정하였고 회수율은 86.1%-102.1%로 확인되었다. 물질의 검출한계 및 정량한계의 농도 범위는 37.5-125 ng/mL로 산출되었다. 측정 불확도를 산출하기 위해 설정된 불확도 요인을 설정하여 산출하였다. 그 결과 신뢰수준 95% k=2에서 chlorpyrifos 6.35±0.32 mg/kg, chlorpyrifos-methyl 6.20±0.17 mg/kg, cypermethrin 6.45±0.45 mg/kg, deltamethrin 6.28±0.20 mg/kg, permethrin 6.10±0.56 mg/kg 으로 불확도 값을 산출하여 원유 중 5가지 농약 성분의 유효성이 검증된 분석법을 확립하였다. 본 연구결과를 통해 원유 중 미량으로 잔류할 수 있는 농약성분의 검출이 가능한 것으로 나타났다. 본 연구결과는 기준규격 설정과 관리에 좋은 참고 자료가 될 것으로 판단된다. GC-MS/MS using liquid-liquid extraction (LLE) and C18 cartridges was used to identify and quantify levels of chlorpyrifos, chlorpyrifos-methyl, cypermethrin, deltamethrin and permethrin in bulk raw milk. A calibration curve spanning 10 ng/mL to 200 ng/mL was obtained with a satisfactory correlation coefficient of 0.99. The limits of detection (LOD) and limits of quantitation (LOQ) for chlorpyrifos, chlorpyrifos-methyl, cypermethrin, deltamethrin, and permethrin in the matrix ranged from 0.06 to 1.81 ng/mL and 0.19 to 6.04 ng/mL, respectively. The recoveries of 5 pesticides from spiked samples at 37.5-125 ng/mL ranged from 86.1 to 102.1%. The measurement of uncertainty of the GC-MS/MS method for these five pesticides was developed based on the analytical process and quantification. An analysis method that is easier and faster than the method specified in the Korean food standards codes for analyzing these five pesticides in raw material milk was developed. Moreover, the analytical method for chlorpyrifos, chlorpyrifos-methyl, cypermethrin, deltamethrin, and permethrin in bulk raw milk by GC-MS/MS was established.

Streptoalloteichus hindustanus ATCC 31219로부터 아미노글라이코사이드계 항생제에 내성을 지정하는 유전자의 클로닝 및 염기서열 결정

김종우,한재진,최영내,엄준호,윤성준,현창구,서주원 한국산업미생물학회 1995 한국미생물·생명공학회지 Vol.23 No.4

Nebramycin 복합체를 생산하는 Stall. hindustanus ATCC 31219로부터 아미노글라이코사이드계 항생제(특히 kanamycin, apramycin에 대해 높은 내성(500 ㎍/㎖)을 보임)에 대해 다제내성을 나타내는 유전자를 cloning하였다. Cloning된 유전자의 염기서열을 결정한 결과 16S ribosomal RNA methylase인 KamA, KamB와 아미노산 서열이 63%와 80%로 매우 높은 상동성을 보였다. 따라서 clone된 유전자는 16S ribosomal RNA methylase 임을 알 수 있었다. Streptoalloteichus hindustanus ATCC 31219, a nebramycin complex producer, is similar to Streptomyeces tenebrarius in a viewpoint of resistance to a wide range of aminoglycoside antibiotics. S. tenebrarius has resistance mechanisms of 16s rRNA methylation and aminogycoside modification. However, it is not know whether resistance mechanisms of Stall. hindustanus are the same as in S. tenebrarius. Therefore, we tried to isolate resistance determinants from Stall. hindustanus. Two different types of aminoglycoside resistance determinants were isolated from Stall. hindustanus and expressed in Streptomyces lividans TK24. The apramycin resistance gene (amr) and the tobramycin resistance gene (tmr) isolated from Stall. hindustanus showed broad resistance spectrum against a dozen of aminoglycoside antibiotics. The complete nucleotide sequences of apramycin resistance gene (amr) were determined. The deduced amino acid sequence of the amr gene of Stall. hindustanus ATCC 31219 showed extensive sequence homology to the 16s rRNA methylase gene (kamB) of S. tenebrarius.

Sludge 시용에 다른 밭 토양의 물리성 변화

김성조,문광현,허종욱,정성윤,최영내,백승화 한국토양비료학회 2000 한국토양비료학회 학술발표회 초록집 Vol.2000 No.5

LC-MS/MS를 이용한 우유 중 농약 성분 동시 분석법 개발 및 유효성 검증

한유경(Yu Gyeong Han),최영내(Young Nae Choi),강경원(Gyeong Won Kang),김정년(Jung Nyen Kim),김정복(Jung Bok Kim) 한국식품영양과학회 2020 한국식품영양과학회지 Vol.49 No.8

해마다 연간 우유 소비량이 증가하는 우리나라의 경우, 유해물질 관리와 안전은 더욱 중요하다. 한국작물보호협회에서 자료에 의하면 2014~2018년 농약의 약제별 생산 및 출하 현황 중 살충제가 가장 많은 것으로 보고되어 있다. 카바메이트계 농약은 생물학적 효과가 좋아 살충제, 살균제 및 구충제 등 다양하게 사용되고 있다. 카바메이트계 농약은 일부는 높은 급성 독성을 가지고 있기 때문에 식품에 사용되는 것을 조심해야 하고, 일부 물질의 경우 발암물질을 발생시키고 돌연변이를 야기할 수 있다고 보고되었다. 본 연구에서는 다양한 카바메이트계 농약 중 국내에서 많이 사용되고 있는 살충제의 3가지 농약을 선정하여 우유 원료 중 bendiocarb, carbaryl과 carbofuran 등에 대한 효율적이고 효과적인 분석법을 개발하였고 유효성 검증을 실시하였다. 시료를 무수황산나트륨과 디클로로메탄을 넣고 진탕추출 후 탈수한 뒤 농축하였다. 이를 헥산과 헥산포화아세토니트릴을 이용하여 지방을 제거하고 C18 카트리지를 이용하여 정제 후 LCMS/MS에 주입하여 분석한 결과, bendiocarb, carbaryl 및 carbofuran의 표준원액을 blank를 이용하여 5~100 ng/mL 범위에서 결정계수(r2) 0.999 이상의 직선성을 확인하였다. Bendiocarb의 일내 정밀성은 4.0% 이하, 정확성은 96.2~103.9%, carbaryl의 정밀성은 4.3% 이하, 정확성은 96.9~104.5%, carbofuran의 정밀성은 5.3% 이하, 정확성은 90.9~109.1%로 확인되었고, bendiocarb의 일간 정밀성은 6.5% 이하, 정확성은 90.1~103.7%, carbaryl의 정밀성은 10.5% 이하, 정확성은 95.3~103.3%, carbofuran의 정밀성은 14.8% 이하, 정확성은 94.2~108.5%로 확인되었다. Bendiocarb, carbaryl 및 carbofuran의 평균 회수율은 103.6~110.7%였다. 이때 상대표준편차는 모두 4.9% 이하로 확인되었다. 3가지 성분 각각의 검출한계는 0.8~1.5 ng/mL, 정량한계는 3.0~6.0 ng/mL로 확인되었다. 측정불확도를 산출한 결과 bendiocarb는 14.17±0.82 ㎎/㎏, carbaryl은 14.34±0.91 ㎎/㎏, carbofuran은 14.28±0.79 ㎎/㎏(신뢰수준 95%, K=2)으로 나타났다. 따라서 본 연구에서는 우유 중 bendiocarb, carbaryl 및 carbofuran의 정성 및 정량분석을 위해 유효성이 검증된 동시 분석법을 확립함으로써 향후 우유 중 잔류물질 기준규격 설정 및 관리에 참고 자료가 될 수 있다고 판단된다. Carbamate pesticides are compounds obtained by the reaction of carbamic acid and amine. These pesticides are often used as insecticides and herbicides. Especially, bendiocarb, carbaryl and carbofuran are popular carbamate pesticides LC-MS/MS using liquid-liquid extraction (LLE) and C18 cartridges was used to identify and quantity the levels of bendiocarb, carbaryl and carbofuran in raw material milk with high sensitivity and specificity. A calibration curve was obtained from 5 to 100 ng/mL with a satisfactory correlation coefficient of 0.999. The limit of detection (LOD) and limit of quantitation (LOQ) for bendiocarb, carbaryl and carbofuran in the matrix were 0.8 ng/mL to 1.5 ng/mL and 3.0 ng/mL to 6.0 ng/mL, respectively. The recovery of the three pesticides from spiked samples at 15 ng/mL ranged from 103.6 to 110.7% with a relative standard deviation (RSD) between 4.6 to 4.9%. The measurement of uncertainty of the LC-MS/MS method developed for the three pesticides was based on the analytical process and quantification. Thus, the current study has established a fase and easy method for the analysis of bendiocarb, carbaryl and carbofuran in raw material milk by LC-MS/MS.

Sludge 시용에 다른 밭 토양의 물리성 변화

김성조,문광현,허종욱,정성윤,최영내,백승화 한국토양비료학회 2000 한국토양비료학회 학술발표회 Vol.2000 No.-

QuEChERS법과 LC-MS/MS를 이용한 농산물 중 Fenpropimorph 시험법 개발 및 검증

이한솔,도정아,박지수,조성민,신혜선,장동은,최영내,정용현,이강봉 한국식품위생안전성학회 2019 한국식품위생안전성학회지 Vol.34 No.2

An analytical method was developed for the determination of fenpropimorph, a morpholine fun- gicide, in hulled rice, potato, soybean, mandarin and green pepper using QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) sample preparation and LC-MS/MS (liquid chromatography-tandem mass spectrometry). The QuEChERS extraction was performed with acetonitrile followed by addition of anhydrous magnesium sulfate and sodium chloride. After centrifugation, d-SPE (dispersive solid phase extraction) cleanup was conducted using anhy- drous magnesium sulfate, primary secondary amine sorbents and graphitized carbon black. The matrix-matched cali- bration curves were constructed using seven concentration levels, from 0.0025 to 0.25 mg/kg, and their correlation coefficient (R2) of five agricultural products were higher than 0.9899. The limits of detection (LOD) and quantifica- tion (LOQ) were 0.001 and 0.0025 mg/kg, respectively, and the limits of quantification for the analytical method were 0.01 mg/kg. Average recoveries spiked at three levels (LOQ, LOQ×10, LOQ×50, n=5) and were in the range of 90.9~110.5% with associated relative standard deviation values less than 5.7%. As a result of the inter-laboratory val- idation, the average recoveries between the two laboratories were 88.6~101.4% and the coefficient of variation was also below 15%. All optimized results were satisfied the criteria ranges requested in the Codex guidelines and Food Safety Evaluation Department guidelines. This study could serve as a reference for safety management relative to fen- propimorph residues in imported and domestic agricultural products.

LC-MS/MS를 이용한 농산물 중 살균제 Sedaxane의 잔류시험법 개발 및 검증

조성민,도정아,박신민,이한솔,박지수,신혜선,장동은,최영내,정용현,이강봉 한국식품위생안전성학회 2019 한국식품위생안전성학회지 Vol.34 No.1

An analytical method was developed for the determination of sedaxane in agricultural products using liquid chromatograph-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The samples were extracted with acetonitrile and partitioned with dichloromethane to remove the interference, and then purified by using silica SPE cartridges to clean up. The analytes were quantified and confirmed by using LC-MS/MS in positive ion mode using multiple reac-tion monitoring (MRM). The matrix-matched calibration curves were linear over the calibration ranges (0.001-0.25 µg/mL) into a blank extract with r2>0.99. For validation, recovery tests were carried out at three different con-centration levels (LOQ, 10LOQ, and 50LOQ, n=5) with five replicates performed at each level. The recoveries were ranged between 74.5 to 100.8% with relative standard deviations (RSDs) of less than 12.1% for all analytes. All values were consistent with the criteria ranges requested in the Codex guidelines (CAC/GL 40, 2003) and Food Safety Eval-uation Department guidelines (2016). The proposed analytical method was accurate, effective and sensitive for sedax-ane determination in agricultural commodities.