국내에서 분리된 G형 간염바이러스 NS-5 Region 염기서열의 계통학적 분석

지영미(Young Mee Jee),김기순(Ki Soon Kim),천두성(Doo Sung Cheon),박정구(Jeong Koo Park),강영화(Young Hwa Kang),이윤성(Yoon Sung Lee),정윤석(Yoon Suk Chung),김지은(Ji Eun Kim) 대한바이러스학회 1999 Journal of Bacteriology and Virology Vol.29 No.1

We examined the hepatitis G virus infections among 227 Koreans who were healthy or were suspected of hepatitis and determined the phylogenetic relationship based on a part of the NS-5 region of 5 positive samples. Viral RNA was extracted from sera and cDNA was synthesized and subsequently amplified by RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) or RT-nested PCR using random hexamer and NS-5 specific primers (470-20-1-77F, 470-20-1-211R, HGVNESTFO, HGVNESTRE). Five positives were found to belong to samples of patients showing symptoms of viral hepatitis. Primers used for PCR or nested PCR were derived from the NS-5 region. On the other hand, no amplification was detected using primers derived from the 5'-NCR (G-146F, G-401R). We performed TA cloning and sequencing of 5 amplified fragments, and their sequences were compared with those of foreign isolates of HGV. The phylogenetic analysis using MegAlign programme of DNAstar has shown that the Korean isolates are clustered on the phylogenetic tree. In summary, we confirmed the hepatitis G virus infection in 5 cases out of 12 patients showing the symptoms of viral hepatitis. The phylogenetic analysis of sequences of 5 amplified fragments showed that their relations to each other were closer than those to the foreign HGV isolates reported.

급성 위장관염에 병발하는 양성 무열성 경련 소아 환자의 대변에서 검출된 바이러스 및 유전자형 분석 연구

양혜란,지영미,고재성,서정기,Yang, Hye-Ran,Jee, Young-Mee,Ko, Jae-Sung,Seo, Jeong-Kee 대한소아소화기영양학회 2009 Pediatric gastroenterology, hepatology & nutrition Vol.12 No.2

목 적: 로타바이러스, 노로바이러스, 아스트로바이러스, 장 아데노바이러스는 소아에서 급성 위장관염을 일으키는 주요 원인 바이러스이다. 일부 소아에서는 급성 위장관염 경과 중에 무열성 경련을 보이는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 급성 위장관염 및 급성 위장관염에 병발하는 양성 무열성 경련(BIS-MG) 소아 환자의 대변에서 검출한 바이러스와 바이러스 유전자형을 분석하고자 하였다. 방 법: 2004년 8월에서 2005년 7월까지 분당서울대병원 소아청소년과에 급성 위장관염으로 입원한 311명 소아 환자를 대상으로 하였다. 모든 대상 환자의 대변에서 로타바이러스, 노로바이러스, 아스트로바이러스, 아데노바이러스에 대한 검사를 실시하여 장염 원인 바이러스를 검출하였고, 217명의 소아에서 분자유전학적 검사에 의하여 각 바이러스의 유전자형을 분석하였다. 결 과: 급성 위장관염 소아 환아 217명(남아 121명, 여아 96명, 평균 연령 20.6${\pm}$15.4개월) 중에서 로타바이러스가 109명(50.2%), 노로바이러스가 28명(12.9%), 아데노바이러스가 13명(6.0%), 아스트로바이러스가 2명 (0.9%)에서 검출되었다. 로타바이러스의 유전자형 분석결과 P[8]G3가 36명, P[4]G2 21명, P[6]G4 10명, P[4]G4 9명, P[8]G9과 P[8]G1 6명, P[4]G3 4명, P[4]G93명, P[6]G2 2명이었다. 노로바이러스의 유전자형은 GII-4가 27명, GII-6 1명이었다. 16명의 소아가 급성 위장관염에 병발하는 양성 무열성 경련으로 진단되었으며, 로타바이러스가 13명, 노로바이러스가 2명에서 검출되었고, 나머지 1명은 아무런 바이러스도 발견되지 않았다. BIS-MG군에서 검출된 로타바이러스 유전자형은 P[8]G3 6명, P[4]G2 2명, P[4]G9 1명이었으며, 노로바이러스 유전자형은 2명 모두 GII-4였다. 결 론: 급성 위장관염에 병발하는 양성 무열성 경련을 보인 소아 환자의 대변에서 시행한 바이러스 분석결과 로타바이러스와 노로바이러스가 중요한 원인 바이러스였으며, 향후 이에 대한 지속적인 연구가 필요할 것이다. Purpose: Rotaviruses, noroviruses, astroviruses, and enteric adenoviruses cause acute gastroenteritis (AGE) in children. Some children with AGE have afebrile convulsions associated with viral gastroenteritis. The purpose of this study was to detect and genotype viruses from children with AGE or benign infantile seizures associated with mild gastroenteritis (BIS-MG). Methods: Between August 2004 and June 2005, 311 children with AGE were included. Four viral agents, including rotavirus, norovirus, astrovirus, and adenovirus, were analyzed from stool specimens of each patient using the latex agglutination method, enzyme immunoassay, and reverse transcriptase polymerase chain reaction. Genotyping of each virus was performed in 217 of the 311 children. Results: Among 217 children (male, 121; female, 96; mean age, 20.6${\pm}$15.4 months), rotavirus was detected in 109 (50.2%), norovirus in 28 (12.9%), adenovirus in 13 (6.0%), and astrovirus in 2 children (0.9%). Genotyping of rotavirus revealed positive results in 97 children; P[8]G3 in 36, P[4]G2 in 21, P[6]G4 in 10, P[4]G4 in 9, P[8]G9 in 6, P[8]G1 in 6, P[4]G3 in 4, P[4]G9 in 3, and P[6]G2 in 2. Genotyping of norovirus showed GII-4 in 27 of 28 children and GII-6 in 1 child. Sixteen children were diagnosed with BIS-MG. Rotavirus was detected in 13 of 16 children with BIS-MG, and norovirus in 2 children. Genotyping of rotavirus detected in children with BIS-MG revealed P[8]G3 in 6 children, P[4]G2 in 2 children, and P[4]G9 in 1 child. Conclusion: Analysis of viruses from stool specimens indicates that both rotavirus and norovirus are the main viruses related to BIS-MG in children.

인체 노로바이러스의 한국분리주 Hu/NLV/Gunpo/2006/KO의 분자생물학적 특성

정아용,윤상임,지영미,강윤성,이영민,Jeong, Ah-Yong,Yun, Sang-Im,Jee, Young-Mee,Kang, Yoon-Sung,Lee, Young-Min 한국미생물학회 2009 미생물학회지 Vol.45 No.2

노로바이러스는 급성 위장염을 일으키는 Caliciviridae 과(family)에 속하는 바이러스로 유전자형이 매우 다양하다. 본 연구에서는 노로바이러스 국내분리주의 게놈 RNA로부터 3개의 open reading frame (ORF) 모두의 염기서열을 분석하고, 유전학적 계통분석을 통하여 분자생물학적 특성을 분석하였다. 본 연구에 사용된 노로바이러스(Hu/NLV/Gunpo/2006/KO)는 바이러스성 식중독, 장염 증세를 보이는 2세 여아 가검물로부터 분리되었다. 역전사반응과 PCR 증폭을 통해서 바이러스의 게놈 RNA를 3개의 중첩되는 cDNA 단편으로 합성하였으며, 합성된 cDNA를 염기서열 분석에 직접 사용하였다. 시퀀싱 결과 Hu/NLV/Gunpo/2006/KO는 3개의 ORF (ORF1, 5,100 bp; ORF2, 1,647 bp; ORF3, 765 bp)로 구성되어 있음을 알 수 있었다. 35개의 노로바이러스 국외 분리주와 비교한 결과, ORF1은 ORF2 또는 ORF3에 비해서 상대적으로 염기의 변이율이 낮았으며, 특히 ORF2와 ORF3의 C-말단 부위에서 높은 변이율을 관찰하였다. 유전학적 계통도를 분석한 결과, Hu/NLV/Gunpo/2006/KO는 genogroup II 에 속하며, Saitama U1, Gifu'96, Mc37, Vietnam 026과 같은 클러스터를 형성하는 것을 알 수 있었다. 본 연구를 통하여 노로바이러스 Hu/NLV/Gunpo/2006/KO의 3개의 ORF 염기서열을 모두 밝힘으로써, 앞으로 노로바이러스의 검출법 개발과 유전학적 상관관계뿐 아니라, 유전자의 기능 분석과 관련된 기초연구에 중요한 기초자료를 제공할 수 있을 것으로 기대한다. Norovirus (NV) with a variety of genotypes, a member of the family Caliciviridae, causes acute nonbacterial gastroenteritis in humans. We determined the nucleotide sequence of three open reading frames (ORFs) of a NV Korean strain and characterized the genetic relationship with others. The Korean strain designated Hu/NLV/Gunpo/2006/KO was isolated from the stool specimen of a 2-year-old female suffering from gastroenteritis. By performing reverse transcription and PCR amplification, three overlapping cDNAs were synthesized and used for direct sequencing. We found that like other NVs, this strain contains three ORFs: ORF1, 5,100 bp; ORF2, 1,647 bp; ORF3, 765 bp. Of 35 NVs, ORF1 had a level of genetic diversity lower than ORF2 and ORF3, of which the C-termini of the ORF2 and ORF3 showed a relatively high degree of genetic diversity. Phylogenetic analyses indicated that the Korean strain belonged to genogroup II, with Saitama U1, Gifu'96, Mc37, and Vietnam 026 being formed a single genetic cluster. The nucleotide sequence information of three ORFs of a NV Korean isolate will be useful not only for the development of a diagnostic tool and understanding of genetic relationship, but also provide important basic information for the functional analysis of their gene products.

Development of a simple and sensitive method to detect enteric viruses from oysters

정은영,제회복,전홍기,윤재득,지영미,천두성,조해월,장경립,Chung, Eun-Young,Je, Hee-Bok,Jun, Hong-Ki,Yoon, Jae-Deuk,Jee, Young-Mee,Cheon, Doo-Sung,Cho, Hae-Wol,Jang, Kyung-Lib Korean Society of Life Science 2002 생명과학회지 Vol.12 No.1

Development of a rapid method possessing the requisite sensitivity and specificity for virus monitoring is necessary for protection of the shellfish-consuming public. Oysters tissue usually contains virus particles in relatively small concentrations along with various other substances that can interfere with detection steps. Therefore, the critical point concerning the detection of viruses in shellfish tissues resides in the processing of samples. The current study demonstrated the possibility of purifying small amounts of virus particles at the interface of a 10/50% sucrose gradient after a single round of sucrose gradient ultracentrifugation. We could detect HAV and poliovirus simultaneously from oyster tissues by using two different sets of primer. Furthermore, the method showed a high level of virus recovery rate (>95%) as determined by plaque assays of the final samples. Taken the advantages of the simple and sensitive methods, it was possible to detect 2 pfu of HAV in 5 g of oyster digestive tissues within 24h. 굴 소비자의 보호를 위해서는 매우 민감하고 특이적으로 바이러스를 모니터링할 수 있는 신속진단법의 개발이 필수적이다. 굴 조직은 흔히 비교적 소량의 바이러스와 검출단계를 방해할 수 있는 다른 물질들을 함께 함유한다. 따라서 굴으로부터 바이러스의 검출에서 가장 중요한 과정은 시료의 가공단계이다. 본 연구에 의하면 한번의 sucrose 구배 초원심분리에 의하여 10%와 50% 사이에서 소량의 바이러스를 분리할 수 있음을 제시하였다. 우리는 두 종류의 primer 세트를 이용하여 HAV와 poliovirus를 동시에 굴 조직으로부터 검출할 수 있었다. 또한, 이 방법은 높은(>95%) 바이러스 회수율을 나타내었다. 이 방법은 24시간이내에 5 g의 굴조직으로부터 2 pfu의 HAV를 검출할 수 있을 정도로 신속하고 민감한 검사법이다.

인천지역의 로타바이러스 감염실태 및 유전자형 분포조사

이제만(Jea-Mann Lee),김혜영(Hye-young Kim),이미연(Mi-yeon Lee),이강범(Kang-bum Lee),천두성(Doo-Sung Cheon),지영미(Young-mee Jee) 대한미생물학회 2007 Journal of Bacteriology and Virology Vol.37 No.1

2002년 울산지역에서 유행한 무균성 뇌막염에 대한 임상적 고찰

김치관(Chi Kwan Kim),하태영(Tae Young Ha),이준화(Jun Hwa Lee),윤재득(Jae Deuk Yoon),김영돈(Young Don Kim),지영미(Young Mee Jee),박상규(Sang Kyu Park),정진영(Jin Young Jung) 대한소아신경학회 2003 대한소아신경학회지 Vol.11 No.2

목 적 : 2002년 울산지역에서는 무균성 뇌막염이 급속히 유행하여 많은 소아들이 입원하여 치료하였다. 이에 저자들은 울산에서 유행한 무균성 뇌막염의 임상 양상과 검사소견 및 원인을 파악하고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 2002년 5월부터 7월까지 울산대학교병원 소아과에 입원하여 무균성 뇌막염으로 진단받고 치료한 371명의 환자를 대상으로 성별, 나이, 임상증상에 대해 조사하였고 말초혈액 검사, 뇌척수액 검사를 시행하였으며 바이러스 배양검사는 뇌척수액, 분변을 채취하여 실시하였다. 결 과 : 1) 성별 분포는 남아 242례(65.2%), 여아 129례(34.8%)로 남녀비는 1.9:1로 남아에서 더 호발하였다. 2) 연령별 분포는 0-1세 미만군이 14례(3.8%), 1-5세군이 155례(41.8%), 6-10세군이 115례(31.0%), 11-15세군이 87례(23.5%)로 1-5세군에서 가장 많이 발생하였으며 평균 연령은 6.8±5.1세였다. 3) 임상증상은 발열 346례(93.3%), 두통 308례(83.0%), 구토 292례(78.7%), 복통 91례(24.5%) 순이었고 경부강직은 60례(16.2%)에서 보였으며 발열의 기간은 평균 3.2±1.8일이었다. 4) 말초혈액 검사상 백혈구 수는 평균 10,355±4,800/mm³였으며 CRP는 평균 0.96±1.67 mg/dL였다. 5) 뇌척수액 검사상 백혈수 수는 6-4,830/mm³으로 평균 212±385/mm³였으며 500/mm³ 미만이 88.4%로 대부분을 차지하였으며 다핵구가 평균 29.3±28.9%, 림프구가 평균 55.2±28.8%였다. 뇌척수액의 평균 단백은 37.0±18.9 mg/dL, 당은 68.3±17.6 mg/dL였다. 6) 장바이러스 배양 검사상 바이러스가 분리된 경우는 총 371례 중 67례(18.1%)였다. 이중 분변에서는 98례 중 39례(39.8%), 뇌척수액에서는 371례 중 34례(9.2%)에서 분리되었으며 배양 검사상 분리된 바이러스는 echovirus 6형이 10례, echovirus 9형이 15례, echovirus 11형이 4례, echovirus 13형이 18례, 분류되지 않은 enterovirus가 20례였다. 결 론 : 2002년 울산지역에서 유행한 무균성 뇌막염은 임상 양상이나 뇌척수액 검사소견 등이 지금까지 장바이러스에 의한 뇌막염에 대한 보고와 유사하였으며 원인 바이러스는 echovirus 6, echovirus 9, echovirus 11, echovirus 13, unclassified enterovirus 등이었다. Purpose : There occurred an explosive outbreak of aseptic meningitis in Ulsan, in the year of 2002. In this study, we report clinical manifestations, laboratory data and causative viruses of the outbreak. Methods : Were assessed 371 children with aseptic meningitis who were admitted to the Department of Pediatrics, Ulsan University Hospital in Ulsan between May and July, 2002. We reviewed the sex, age, clinical manifestations, peripheral blood examinations and CSF examinations of the patients. Virus isolation and serotype identification were performed by cell cultures of cerebrospinal fluid and stool. Results : The ratio of males to females was 1.9:1. The majority of aseptic meningitis occurred in children between 1 and 5 years of age with a mean age of 6.8±5.1 years. The clinical manifestations was fever, headache, vomiting, and abdominal pain and 16.2% of the patients developed neck stiffness. The mean duration of fever was 3.2 days. The mean value of peripheral blood leukocytes was 10,355±4,800/mm³ and the mean value of CRP was 0.96±1.67 mg/dL. Initial CSF findings revealed leukocytes 212±385/mm³, protein 37.0±18.9 mg/dL and glucose 68.3±17.6 mg/dL. Viruses were isolated 67(18.1%) out of 371 patients and the serotypes were echovirus 6 in 10 cases, echovirus 9 in 15 cases, echovirus 11 in 4 cases, echovirus 13 in 18 cases, and unclassified enterovirus in 20 cases. Conclusion : Aseptic meningitis was prevalent in Ulsan, in the year of 2002. The clinical manifestations and the laboratory findings of the patients were compatible with those of previous reports. The causative viruses were echovirus 6, echovirus 9, echovirus 11, echovirus 13 and unclassified enterovirus.

Coxsackievirus B3 H3와 10A1 감염에 의한 마우스 심장 내에서의 유전자 변이 관찰

남재환(Jae-Hwan Nam),임병관(Byung-Kwan Lim),조영주(Young-Joo Cho),김대선(Dae-Sun Kim),김연정(Yeun-Jung Kim),정수영(Soo-Young Chung),지영미(Young-Mee Jee),전은석(Eun-Seok Jeon) 대한미생물학회 2006 Journal of Bacteriology and Virology Vol.36 No.2

G9 혈청형 사람 로타바이러스 분리 및 특성

이강범(Kang-Bum Lee),김진원(Jin-Won Kim),이선화(Sun-Wha Lee),천두성(Doo-Sung Cheon),지영미(Young-Mee Jee),강신영(Shien-Young Kang) 대한미생물학회 2007 Journal of Bacteriology and Virology Vol.37 No.4

우리나라 급성바이러스 간염의 실태: 역학, 임상 특성 및 바이러스학 특성과 심한 급성 B형간염 및 C형간염환자에서 항바이러스 치료의 효과(추계학술대회 초록집)

정숙향 ( Sook Hyang Jeong ),황성규 ( Seong Gyu Hwang ),박상종 ( Sang-Jong Park ),강숙경 ( Sook Kyung Kang ),지영미 ( Young Mee Jee ) 대한간학회 2006 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.12 No.5(S)

부산지역 무균성 뇌막염 원인 바이러스의 분리 및 동정 : 1998년을 중심으로

김영희,정영기,김기순,지영미,윤재득,김병준,구평태,민상기,정구영,김만수,조경순 동의대학교 기초과학연구소 2000 基礎科學硏究論文集 Vol.10 No.1

The incidence of aseptic meningitis infection is ensuing and threatening the health of children. Enteroviruses are the major agents of aseptic meningitis and identification of virus has been a clue to diagnosis and epidemiology. The outbreak of aseptic meningitis occurred in Pusan, 1998. Patients were concentrated from April through November. Children were more susceptible than adults. Among 306 cases of specimens from stool, throat swab tested, only 7.2% were positive on virus isolation, 12 cases from stool and 10 from throat, respectively. All isolated 7 serotypes of viruses represented cytopathic effect on cultured cells. Three types of echovirus 6, 25, 30 and coxsackievirus B2, B3, B4, B6 were identified by neutralizing anti body test. Isolated coxsackievirus and echovirus were observed by an electron microscope with negative staining.