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반성 열성 범저감마글로불린혈증 1가계 3환자의 Bruton's Tyrosine Kinase 유전자 변이 및 임상 양상
조은경,송창화,박정규,백영종,유혜영,이재호,황태주,국훈,Jo, Eun-Kyeong,Song, Chang-Hwa,Park, Jeong-Kyu,Baek, Young-Jong,Rhu, Hye-Young,Lee, Jae-Ho,Hwang, Tai-Ju,Kook, Hoon 대한소아청소년과학회 2002 Clinical and Experimental Pediatrics (CEP) Vol.45 No.2
목 적 : 본 연구에서는 임상적으로 XLA로 진단받고 현재 치료 중인 한가족 3명 환아의 가계를 대상으로 말초혈액 단핵구의 Btk 단백질 발현과 Btk 유전자 변이를 분석하고자 하였다. 방 법 : 환아 말초혈액 단핵구의 Btk 발현도를 항 Btk 항체를 이용한 유세포계측을 통해 분석하고 PCR-SSCP 및 직접 염기서열 분석에 의해 Btk 유전자 변이를 분석하였다. 결 과 : 유세포 계측 및 PCR-SSCP에 의하여 가계내의 환자 3명 및 보인자 4명을 확인하였으며 환아들의 단핵구의 Btk 발현도를 조사한 결과 2.7% 미만으로 건강인에 비해 매우 유의한 감소를 나타내었다. 유전자 변이 분석 결과 Btk 유전자 exon 3에서 점돌연변이($T{\rightarrow}C$)가 발견되어 61번째 아미노산의 치환이 일어난 과오돌연변이를 확인할 수 있었다. 동일한 유전형을 지닌 3명의 환아들은 임상적으로 매우 다양한 표현형을 나타내었다. 특히 환아들의 혈청 IgG level이 낮을수록 임상 양상은 심한 소견을 보였다. 결 론 : 본 연구 결과를 종합해 볼 때 임상적으로 XLA로 진단된 환아와 가족에 대한 항 Btk 항체를 이용한 유세포계측 및 PCR-SSCP 방법은 XLA 환아 및 보인자의 진단에 매우 유용하며 신속하게 적용될 수 있는 기법으로 생각된다. 또한 분자유전학 기법을 이용하여 환아의 유전자 변이를 검색한 결과 Btk의 PH 도메인 내 한개의 과오돌연변이를 검색하여 XLA를 최종 확진할 수 있었다. Purpose : X-linked agammaglobulinemia(XLA) is an immunodeficiency caused by abnormalities in Bruton's tyrosine kinase(Btk), and is characterized by a deficiency of peripheral blood B cells. We studied the cytoplasmic expression of Btk protein and analyzed the Btk gene in peripheral blood mononuclear cells from two siblings and one cousin with XLA, as well as additional family members. Methods : Btk protein expression was analyzed by flow cytometry. Isolation of the coding sequence of the Btk gene was performed by amplification using the reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) technique. Sequence alterations were screened by the single-stranded conformation polymorphism(SSCP) method and characterized by standard sequencing protocols. Results : Cytoplasmic expression of Btk protein in monocytes was not detected in three patients with XLA. In addition, Btk protein analysis clearly showed cellular mosaicism in monocytes from four obligate carriers, findings further supported by SSCP. A single base pair mutation(T to C) in Btk-exon three, which encodes the PH domain, was identified in four XLA patients. A diagnostic sequencing analysis was established to detect heterozygotic pattern in 4 carrier females. Furthermore, we found significant clinical heterogeneity in individuals with the same gene mutation. Conclusion : The implicating genetic alteration provided valuable clues to the pathogenesis of XLA in Korea and the flow cytometric analysis was suggested as a useful tool for rapid detection of XLA patients and carriers. The present study has identified a genetic mutation in the Btk coding region and demonstrated heterogeneity in clinical manifestations among patients with the same mutation. A flow cytometric analysis was found to be informative in establishing a deficiency of Btk protein in both patients and carriers and is recommended as a frontline procedure in the molecular diagnosis and work-up of XLA.
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조은경(Jo Eun-Kyeong) 독립기념관 한국독립운동연구소 2010 한국독립운동사연구 Vol.0 No.37
일제강점기 중국에서 활동하던 한국인 독립운동가들은 중일전쟁이 발발하자 한중연대투쟁을 전개하였다. 그들은 직접 중일전쟁에 참가하는 경우도 있었지만 후방에서 항일선전활동을 지원하면서 한중연대투쟁을 모색하였다. 그 대표적인 인물이 이두산이다. 이두산은 주로 문필과 강연 등 항일선전활동에 주력하였다. 1930년대 중국 광동성 광주에 자리 잡은 후 조선민족혁명당 등 좌파민족주의단체에서 활동하였고 1938년 10월 광주가 함락되자 광서성 오주와 계림을 거점으로 조선의용대 대본부에서 활동하며 중국인과 국제인사를 상대로 항일선전활동을 전개하였다. 중일전쟁의 장기화로 중일 양국의 정치선전공세가 치열해지는 가운데 이두산의 대표적인 항일선전활동은 『동방전우』의 발간이었다. 『동방전우』는 이두산이 1939년 1월 광서성 오주에서 설립한 동방전우사에서 창간되어 1942년 4월까지 3년 4개월 동안 32기까지 발간되었다. 잡지는 중국의 대일항전과 조선혁명 등을 중심으로 동방 피압박 약소민족의 해방 문제에 주목하고 중국주도의 동아시아 국제연대에 동참할 것을 촉구하였다. 각계인사들이 『동방전우』에 글을 기고하였지만 가장 많은 글을 기고한 사람은 이두산이었다. 그는 60여 편의 글을 게재하며 『동방전우』를 매개로 자신의 인식을 꾸준히 알리고자 하였다. 이두산은 후방에서 한중연대투쟁론을 선전하며 전방의 활동을 지원하였다. 그는 일제의 동아신질서론에 맞서 중국이 동아시아에서 중심지위를 가지고 있고 동아시아 각국은 중국과 공동운명체임을 밝혔다. 또한 중일전쟁이 장기화되면서 중국이 점차 우세한데 반해 일본은 열세해지고 있다고 선전하며 중국의 위상과 역량을 밝히고 중국주도의 국제연대에 동참할 것을 설득하였다. 한국에 대해서는 이미 한중연대투쟁을 전개하고 있으며 동아시아 국제연대를 선도하고 있음을 알리고자 하였다. 이를 위해 ‘한국인이 일제의 주구’라는 인식을 해소하고 일제의 식민통치실상과 한국인의 독립운동을 함께 소개하였다. 한중연대투쟁의 실례로 조선의용대의 활동을 적극 선전하였다. 또한 왕정위의 만주국 승인 등 정세변화에 대응하여 한중연대 투쟁의 강화를 보다 설득력 있게 선전하였다. 1940년에 들어서면서 일제가 ‘대동아공영권’을 제창하고 동남아 일대로 이른바 ‘남진정책’을 실시하자 동남아 약소민족과의 연대투쟁을 모색하였다. 특히 베트남과의 연대에 주목하였다. 이두산은 1940년 10월 베트남 독립운동가들이 자신의 활동근거지인 계림으로 모여들자 그들과 교류하며 『동방전우』에 그들의 주의선전을 게재하였다. 또한 베트남 독립운동에 대한 자신의 의견을 월남민족해방동맹회에 전달하였다. 이는 베트남 독립운동가들로부터 동조를 얻었고 한국 독립운동단체와의 연계를 제안받는 등 한월연대투쟁을 확대·강화하는데 토대가 되었다.
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조은경(Jo, Eun-Kyeong) 한국웰니스학회 2023 한국웰니스학회지 Vol.18 No.1
본 연구는 심리운동이 지적장애중학생의 놀이자발성에 미치는 영향을 알아보는데 목적이 있다. 연구 대상은 G시에 소재한 재활병원과 E시에 소재한 장애인 복지관을 이용하는 지적장애중학생 14명을 선정하였으며, 연구대상 14명 중 실험집단 7명과 통제집단 7명을 집단 간 동질성에서 차이가 없는 학생들로 배치하였고, 주 1회, 총 24회기 실시하였다. 사전·사후 검정을 위해 비모수 검정 Wilcoxon 부호순위검정을 실시하여 놀이자발성의 변화와 놀이자발성의 하위 요인인 신체적 자발성, 사회적 자발성, 인지적 자발성, 유희적 자발성 및 유머 감각의 변화를 알아보았다. 연구 결과, 심리운동이 지적장애중학생의 놀이자발성과 놀이자발성의 하위요인인 신체적 자발성, 사회적 자발성, 인지적 자발성, 유희적 자발성, 유머 감각에서 유의미한 변화가 나타나 긍정적인 효과성이 시사되었으며, 추후 심리운동관련 교육과 연구의 기초자료로 활용될 것으로 기대된다. The purpose of this study is to find out the effects of Psychomotorik on the spontaneity play in middle school students with intellectual disabilities. Fourteen middle school students with intellectual disabilities who use rehabilitation hospitals in G city and disabled welfare centers in E city were selected. Among the 14 subjects of the study, 7 in the experimental group and 7 in the control group were assigned as students with no difference in homogeneity between the groups, and a total of 24 sessions were held once a week. Nonparametric Wilcoxon signed-rank tests were conducted for pre-post-test, and examined changes in physical spontaneity and social spontaneity, cognitive spontaneity, playful spontaneity and sense of humor, which were sub-factors of play spontaneity. As a result of the study, the Psychomotorik had significant changes in play spontaneity and physical spontaneity, social spontaneity, cognitive spontaneity, playful spontaneity and sense of humor, which were sub-factors of play spontaneity, in middle school students with intellectual disabilities, suggesting positive effectiveness. And it is expected to be used as a basic data for psychological exercise education and research.
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결핵균 PPD, 30-kDa 및 TSP 항원에 의한 치료전 폐결핵환자 말초혈액 단핵구의 IL-12 및 TNF-α 생성능
송창화,조은경,이지숙,김대수,임재현,김운옥,남현희,김화중,백태현,박정규,Song, Chang-Hwa,Jo, Eun-Kyeong,Lee, Ji-Suk,Kim, Dae-Su,Lim, Jae-Hyun,Kim, Un-Ok,Nam, Hyeon-Hui,Kim, Hwa-Jung,Paik, Tae-Hyun,Park, Jeong-Kyu 대한면역학회 2001 Immune Network Vol.1 No.3
To determine if initial infection with Mycobacterium tuberculosis changes the balance of cytokines between T cells and macrophages, we evaluated interferon (IFN)-${\gamma}$), interleukin-12 (IL)-12, and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ productions by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 15 untreated active pulmonary tuberculosis (TB) patients and 12 healthy tuberculin reactors (HTR). Freshly isolated PBMC were stimulated with Triton X-100 solubilized protein (TSP), 30-kDa or purified protein derivatives (PPD) antigen for 6, 18 and 96 hours. IL-12 p40 production by antigen-stimulated PBMC from TB patients was significantly decreased compared with that in HTR. In addition, IFN-${\gamma}$ production was significantly depressed in TB patients than that in HTR at a 96-hr stimulation. However, TNF-${\alpha}$ production was significantly higher in antigen-stimulated PBMC from TB than that of HTR. A pronounced increase in IFN-${\gamma}$ protein followed neutralization of IL-10 in early TB patients. However, neutralization of TNF-${\alpha}$ did not significantly alter IFN-${\gamma}$ induction in PBMC from TB patients. There were no significantly differences in the cytokine productions among three proteins, TSP, 30-kDa or PPD antigen. These results indicate that development of TB may be strongly associated with dysregulated productions of IL-12, IFN-${\gamma}$ and TNF-${\alpha}$, during the initial immune responses to M. tuberculosis. Further understanding of operative cytokine networks during human immune cell responses to protein antigens of M. tuberculosis may improve strategies for vaccine development.
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국내 X-관련성 범저감마글로불린혈증 세가족에 대한 Bruton's Tyrosine Kinase 단백질 발현 및 유전자 변이 분석
송창화,조은경,박정규,김정수,홍수종,이재호,Song, Chang-Hwa,Jo, Eun-Kyeong,Park, Jeong-Kyu,Kim, Jung-Soo,Hong, Soo-Jong,Lee, Jae-Ho 대한소아청소년과학회 2002 Clinical and Experimental Pediatrics (CEP) Vol.45 No.3
목 적: 본 연구에서는 임상적으로 XLA로 진단받고 현재 치료 중인 국내 환아 세가족의 네명의 환아와 모친 등을 대상으로 말초혈액 단핵구의 Btk 단백질 발현과 Btk 유전자 변이를 분석하고자 하였다. 방 법: 말초혈액 단핵구의 Btk 발현도를 항 Btk 항체를 이용한 유세포측정을 통해 분석하고 직접 염기서열 분석에 의해 Btk 유전자 변이를 분석하였다. 결 과 : 환아들의 B 림프구의 발현은 2.1% 미만으로 정상인에 비해 매우 저하되어 있었으며 유세포 측정에 의한 환아 단핵구 유래 Btk 단백질 발현도 1.0% 이하로 정상인에 비해 매우 감소되었다. 유전자 변이 분석 결과 XLA 가족 1과 3에서는 각각 intron 18과 intron 1의 짜집기 공여 위치 부위에서 1개의 점 돌연변이가 발견되었으며 cDNA상 짜집기 오류 현상을 야기하였다. 그리고 XLA 가족 2의 경우 exon 10을 포함하는 980 bp의 유전자 결손(intron 9+191T부터 intron 10-215C까지)이 발견되었으며 세계적으로 처음 보고되는 새로운 유전자 변이였다. 또한 가족 2의 경우 가족 중 환아에서 만 Btk 단백질 결핍 및 유전자 변이를 진단하여 국내 XLA의 환아 중 최초의 산발적인 발병 양상을 확인하였다. 결 론: 본 연구 결과를 종합해 볼 때 임상적으로 XLA로 진단된 환아와 가족에 대한 항 Btk 항체를 이용한 유세포측정 방법은 XLA 환아 및 보인자의 진단에 매우 유용한 방법으로 생각된다. 또한 분자유전학 기법을 이용하여 Btk의 noncoding region을 포함한 광범위한 유전자 영역의 염기서열 분석을 시행한 결과 새로운 1개의 유전자 결손 및 2개의 점돌연변이에 의한 짜집기 오류를 확인하여 XLA를 최종 확진할 수 있었다. Purpose : X-linked agammaglobulinemia(XLA) is an immunodeficiency caused by abnormalities in Bruton's tyrosine kinase(Btk), and is characterized by a deficiency of peripheral blood B cells. We studied cytoplasmic expression of Btk protein and analyzed the Btk gene in peripheral blood mononuclear cells(PBMC) from three XLA families in Korea. Methods : Heparinized venous blood samples were collected from four XLA patients and additional family members in three unrelated XLA families. Mononuclear cells were separated from their blood and the intracellular Btk protein was characterized by a flow cytometry. The mutation analysis was performed using direct sequencing. Results : Cytoplasmic expression of Btk protein in monocytes was not detected in the patients with XLA. We observed a novel deletion and two point mutations within introns(intron 1 and intron 18) resulting in alternative splicings. In XLA family 2, a 980 bp deletion(from intron 9+191 T to intron 10-215 C) including exon 10 was found in patient P2. He was the only sporadic case in this study, because his mother and brother showed a normal Btk expression by flow cytometry. Conclusion : These identified genetic alterations support the molecular heterogeneity of Btk gene in XLA disease. Additionally, by means of flow cytometric analysis, we diagnosed three hypogammaglobulinemia patients as XLA. Advancements in diagnostic methods has facilitated a prompt and definite diagnosis of this disease.
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Hyper IgM Syndrome 환자에서 얻은 림프절 및 말초혈액 B세포의 특성
김동수,신경미,양우익,신전수,송창화,조은경,Kim, Dong Soo,Shin, Kyuong Mi,Yang, Woo Ick,Shin, Jeon-Soo,Song, Chang Hwa,Jo, Eun Kyeong 대한소아청소년과학회 2003 Clinical and Experimental Pediatrics (CEP) Vol.46 No.2
목 적 : Hyper IgM syndrome(HIGM)은 크게 세 부류로 나누는데, CD40L 분자의 돌연변이로 초래되며 X-linked로 유전되는 형태를 HIGM1이라고 하고, 상염색체성 열성 형태로 유전되면서 CD40L는 정상적으로 표현되는 형태로 activation-induced cytidine deaminase(AID) 유전자에 이상 때문에 오는 경우를 HIGM2로 분류하고 있다. 다른 한 부류는 X-linked HIGM 증후군의 매우 드문 한 형태로서 발한 저하성 외배엽 이형성증이 동반된 경우로, 이 질환은 전사인자인 nuclear factor ${\kappa}B$의 활성화에 관여하는 nuclear factor ${\kappa}B$ essential modulator를 coding하는 유전자의 돌연변이 때문에 오는 것으로 알려져 있다. 연구자들은 HIGM2와 유사하지만 AID 유전자에 변이는 없는 새로운 형태의 HIGM 환자의 말초 B세포를 이용하여 병인을 조사하고자 본 연구를 시도하였다. 방 법 : 환자의 말초혈액 단핵구를 분리하고, EBV로 immortalization을 시켜 Cycle TEST PLUS DNA Reagent kit를 이용하여 cell cycle을 분석하였다. 환자의 말초혈액 T 세포에서 CD40L의 표현을 immunostaining으로 알아보고, RNA를 추출하여 RT-PCR을 하고 direct sequencing을 통하여 CD40L 유전자의 돌연변이 부위를 찾아보았다. 아울러 AID 유전자의 돌연변이를 찾기 위하여 같은 방법으로 sequencing하고 조사하였다. 환자의 림프절을 병리학적인 검사를 시행하고 CD3, CD23, CD40, Fas-L, bcl-2, BAX의 표현을 알아보기 위하여 immunostaining을 실시하였다. 결 과: 림프절의 광학적 소견은 반응성 여포증식의 소견을 보였으며, 여포와 단구양 증식은 B-세포 표시인자인 L26에 양성을 보였고, 대부분의 형질세포는 IgM에 양성을 보였다. 여포는 CD40, Fas, BAX에 양성반응을 보이고, bcl-2와 Fas-L에 음성반응을 보였다. 말초혈액 B 림프구를 이용하여 cell cycle을 분석한 결과 정상(17.9%)에 비하여 G2/mitosis phase(M3 in figure)가 현저하게 감소(8.5%)되어 있는 양상을 보여주고 있으며, IL-4로 자극한 경우에는 정상인에서 보여주는 양상으로 회복되는 양상을 볼 수 있었다. 단핵수에서 CD40L의 표현은 정상이었고 CD40L 유전자에도 돌연변이는 발견할 수 없었으며, HuAID 유전자에도 돌연변이를 발견할 수 없었다. 결 론 : 환자의 말초혈액 B림프구를 통한 연구 결과, 기존에 보고 되어진 HIGM2 형태와 임상적으로는 비슷하지만, 정상적인 AID유전자를 보이고, G2/mitosis phase가 정상에 비하여 감소된, 새로운 형태의 HIGM이라고 여겨진다. Purpose : Hyper IgM syndrome(HIGM) is characterized by severe recurrent bacterial infections with decreased serum levels of IgG, IgA, and IgE but elevated IgM levels. Recently, it has been classified into three groups; HIGM1, HIGM2 and a rare form of HIGM. HIGM1 is a X-linked form of HIGM and has now been identified as a T-cell deficiency in which mutations occur in the gene that encodes the CD40 ligand molecule. HIGM2 is an autosomal recessive form of HIGM. Molecular studies have shown that the mutation of HIGM2 is in the gene that encodes activation-induced cytidine deaminase(AID). Recently, another rare form of X-linked HIGM syndrome associated with hypohydrotic ectodermal dysplasia has been identified. We encountered a patient with a varient form of HIGM2. To clarify the cause of this form of HIGM, we evaluated the peripheral B cells of this patient. Methods : The lymphocytes of the patient were prepared from peripheral blood. B cells were immortalized with the infection of EBV. Cell cycle analysis was done with the immortalized B cells of the patient. Peripheral mononuclear cells were stained with monoclonal anti-CD40L antibody. Total RNA was extracted from the peripheral mononuclear cells. After RT-PCR, direct sequencing for CD40L gene and HuAID gene were done. Immunostainings of a lymph node for CD3, CD23, CD40, Fas-L, bcl-2, BAX were done. Results : The peripheral B cells of this patient showed normal expression of CD40L molecule and normal sequencing of CD40L gene, and also normal sequencing of AID gene. Interestingly, the peripheral B cells of this patient showed a decreased population of G2/mitosis phase in cell cycles which recovered to normal with the stimulation of IL-4. Conclusion : We suspect that the cause of increased serum IgM in this patient may be from a decrease of G2/mitosis phase of the peripheral B cells, which may be from the decreased production or secretion of IL-4. Therefore, this may be a new form of HIGM.
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