국내 옥수수 품종 및 계통의 미숙배 배양으로부터 Yellowish Friable Embryogenic 캘러스 (YFEC) 생산과 식물체 재생

조미애,박윤옥,김진석,박기진,민황기,유장렬,최필선,Cho Mi-Ae,Park Yun-Ok,Kim Jin-Suck,Park Ki-Jin,Min Hwang-Ki,Liu Jang-Ryol,Choi Pil-Son 한국식물생명공학회 2005 식물생명공학회지 Vol.32 No.2

국내 옥수수 3품종 (두메찰, 미백찰, 흑점찰)과 5 계통(HW1, KL103, HW3, HW4, KW7)의 미숙배를 1 mg/L 2,4-D, 25 mM proline, 100 mg/L casamino acid, 3 mM MES, 1.7 mg/L $AgNO_3$, Eriksson's vitamin 및 20 g/L sucrose가 첨가된 MS배지 (SEM)에 5주 동안 배양하였다. 각 계통 및 품종의 체세포배 발생 빈도는 HW1 (45.20%), KL103 (5.75%), HW3 (37.20%), HW4 (30.10%), KW70 (55.20%), 미백찰 (18.74%), 흑점찰 (22.41%), 두메찰 (36.72%)이었으며, 모델 품종인 Hi II type에서는 10% 이하였다. Hi II계통에서 형성되는 type II캘러스와 같은 노란색의 부드러운 배발생캘러스 (yellowish friable embryogenic callus, YFEC)는 오직 HW3와 흑점찰 품종에서 형성되었으며, 반면 다른 품종 및 계통에서는 late-embryo단계의 단단한 체세포배가 직접 발생되거나 형태적으로 비정상 모양을 갖는 단단하고 팽창된 체세포배가 발생 되었다. 노란색의 부드러운 배발생캘러스 (yellowish friable embryogenic callus, YFEC)는 동일배지에서 빠르게 증식 되었고 6개월 이상 배발생 능이 유지 되었으며, 1차 재분화 배지와 2차 재분화배지에 옮겼을 때 모두 식물체로 전환 되었다. 그러나 단단한 노란색의 배발생캘러스와 비정상 형태의 체세포배는 동일배지에서 매우 느리게 증식되었고, 재분화 배지에서 낮은 식물체 전환율 (25%)을 보였다. 따라서 본 연구로부터 선발된 HW3와 흑점찰은 향후 국내 옥수수 유전자원을 이용한 형질전환 시스템 개발연구에 이용 될 수 있을 것으로 예상된다. Immature embryos of 3 cultivars (Du Me Chal, Mi Baek Chal, Heug Jeom Chal) and 5 genotypes (HW1, KL103, HW3, HW4, KW7) were cultured on medium containing MS salts, Eriksson's vitamins, 1 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, 25 mM proline, 100 mg/L casamino acid, 3 mM MES, 1.7 mg/L $AgNO_3$ and 20 g/L sucrose (SIM). Frequency of somatic embryo formation on explant of immature embryos showed in HW1 (45.20%), KL103 (5.75%), HW3 (37.20%), HW4 (30.10%), KW70 (55.20%), Mi Baek Chal (18.74%), Heug Jeom Chal (22.41%), Du Me Chal (36.72%) and Hi II type (<10%), respectively. Yellowish friable embryogenic callus (YFEC) such as type II callus of Hi II genotype only produced from the HW3 and Heug Jeom Chal, whereas other cultivars and genotypes were directly formed somatic embryos with late-embryonic stages or expanded yellowish compact somatic embryo with morphological abnormality. The yellowish friable embryogenic callus (YFEC) could be proliferated on the same medium, which were maintained embryogenic capacity for 6 months over. Upon transfer to first regeneration and second regeneration medium, somatic embryos converted to plantlets at a frequency of approximately 100%. However, the expanded somatic embryos with abnormal morphology were slowly proliferated when subcultured on the same medium, and some of them were degenerated or converted to plantlets at a frequency of approximately 25%. Accordingly, The Heug Jeom Chal and HW3 genotype will be further used for development of high frequency transformation system in domestic maize germplasm.

국내 딸기 재배품종의 잎절편 배양으로부터 고빈도 식물체 재생

조미애,최규명,고석민,민성란,정화지,유장렬,최필선,Cho Mi-Ae,Choi Kyu-Myeong,Ko Suck-Min,Min Sung-Ran,Chung Hwa-Ji,Liu Jang-Ryol,Choi Pil-Son 한국식물생명공학회 2005 식물생명공학회지 Vol.32 No.3

To develop a high efficiency plant regeneration system from in vitro cultures of strawberry, cv. Yeobong, petiole and leaf explants were cultured on MS basal medium containing a combination of 0.5 mg/L IBA and 3.2 mg/L kinetin or zeatin or benzyl amino purine (BAP) for 6 weeks, and leaf explants with dark pretreatment for a week ($T_1$), 2 weeks ($T_2$), and 4 weeks ($T_3$) were cultured on medium supplemented with 0.5 mg/L IBA and 3.2 mg/L zeatin under 16 hr photoperiod for 6 weeks. Shoot organogenesis was observed from the greenish calli containing minimal anthocyanin formed at proximal cutting edges of the leaf explant (57%) when cultured adaxial side on the medium, whereas was directly formed from a cutting edges of petiole explant (6.3%). Frequency of callus formation and shoot organogenesis at large size of leaf explant ($1.0{\sim}1.5\;cm^2$) was higher than small size ($0.5{\sim}1.0\;cm^2$), and dark pretreatment significantly improved the frequency of leaf explants that produced calli and shoots. The maximum frequency (87%) for shoot organogenesis was obtained from the leaf explants that transferred to a 16 hr photoperiod condition after the initial 4 weeks dark period. The improved frequency (87%) in comparision with control without dark pretreatment (27%). When the shoots were transferred to 1/2 MS basal medium, formed roots with 20 d of culture. The rooted plants were subsequently transferred to the pots and to the field. 딸기 기내배양으로부터 고빈도 식물체재생 방법을 개발하기 위하여 여봉딸기의 잎과 엽병절편을 0.5 mg/L IBA와 3.2 mg/L kinetin, BAP, zeatin을 각각 조합 첨가한 MS배지에서, 그리고 1주, 2주, 4주동안 암 전처리한 잎 절편을 0.5 mg/L IBA와 3.2 mg/L zeatin이 첨가된 배지에서 6주동안 16시간 광주기 조건으로 배양하였다. 신초 발생은 잎을 adaxial상태로 치상하였을때 절단부위로부터 안토시아닌 색소를 함유한 녹색 캘러스로부터 유도되었고 (57.0%), 엽병의 경우 절단부위로부터 직접 발생되었다(6.3%). 캘러스와 신초발생율은 잎 절편 크기가 클수록 ($1.0{\sim}1.5\;cm^2$) 높았으며, 암 전처리는 그 발생율을 점차 증가시켜 4주동안 암 전처리한 후 16시간 광조건으로 옮겼을 때 가장 높은 발생율 (87.0%)을 얻을 수 있었다. 이러한 shoot발생율 (87%)은 암 전처리를 하지 않은 대조군 (27%) 에 비하여 현저하게 증가된 것이다. 신초를 분리하여 1/2 MS기본배지에 옮겨20동안 배양하였을 때 뿌리가 발생되었으며, 이때 소식물체를 토양에 옮겨 순화시켰다.

배추의 배축절편으로부터 캘러스와 뿌리 발생을 통한 안정적 형질전환

조미애,김춘해,민성란,고석민,유장렬,최필선,Cho, Mi-Ae,Kim, Choon-Ae,Min, Sung-Ran,Ko, Suck-Min,Liu, Jang-Ryol,Choi, Pil-Son 한국식물생명공학회 2007 식물생명공학회지 Vol.34 No.2

'정상' 배추의 배축절편을 선발마커로서 paromomycin 저항 성유전자를 갖고 있는 pPTN290으로 각각 형질전환된 EHA101, LBA4404, GV3101균주와 공동배양한 후 갤러스유도배지에서 형질전환캘러스를 얻은 후, 뿌리유도배지에서 부정근을 그리고 신초유도배지에서 신초를 각각 순차적으로 유도하였다. 형질전환캘러스를 얻은 후, 뿌리유도배지에서 부정근을 그리고 신초유도배지에서 신초를 가각 순차적으로 유도하였다. 형질전환캘러스 형성은 Agrobacterium균주에 따라 차이가 있었으며, 특히 EHA101균주에 공동배양된 배축절편으로부터 최대 6.1%까지 얻어졌다. 또한 각각의 형질전환캘러스 클론으로부터 형질전환 부정근과 신초 발생은 EHA101균주에서 60.7%와 38.2%, LBA4404에서 8.3%와 0%, GV3101에서 20.5%와 85.7%까지 각각 얻을 수 있었다. 형질전환식물체는 특별한 형태적 이상 없이 온실에서 정상적으로 자라 $T_{2}$종자를 얻을 수 있었다. GUS방법으로 7개의 후대 유식물체를 분석한 결과 gus유전자가 안정적으로 발현하고 있음을 확인하였고, 배추 genome에 single 또는 multiple copy로 전달되고 있음을 추측할 수 있었다. Hypocotyl explants of Chinese cabbage (cvs. "Jeong Sang") produced transgenic calli on callus induction medium (MS salt, B5 vitamin, 5 mg/L acetosyringone, 1 mg/L 2,4-D, 3% sucrose, 400 mg/L cefotaxime, 100 mg/L paromomycin, pH 5.8) after cocultivation with strains of Agrobacterium tumefaciens (EHA101, LBA4404, GV3101) harboring the pPTN290 containing paromomycin-resistance gene as a selectable marker, and then they transferred to root induction medium (1/2MS salt, MS vitamins, 2% sucrose, 100 mg/L paromomycin, 100 mg/L cefotaxime, pH 5.8) and shoot induction medium (MS salt, B5 vitamin, 4 mg/L $AgNO_3$, 4 mg/L 6-benzyladenine, 3 mg/L alpha-naphthaleneacetic acid, 100 mg/L paromomycin, 100 mg/L cefotaxime, 3% sucrose, pH 5.8) in order. There was a significant difference in the frequency of transgenic calli depending on Agrobacterium strains. In particular, the highest frequency (6.1%) of transgenic calli was obtained from the hypocotyls cocultivated with EHA101 strains. Also, the frequency (%) of transgenic root and plants from each transgenic callus clone were obtained with 60.7% and 38.2% in EHA101, with 8.3% and 0% in LBA4404, with 20.5% and 85.7% in GV3101 strains, respectively. They were grown to maturity in a greenhouse and normally produced $T_2$ seeds. GUS histochemical assay for progeny ($T_2$) revealed that the transgenes was expressed in the plant genome, and progeny analysis from 7 independent transgenic events demonstrated that the transformants transmitted the transgene as a single or multiple functional locus.

국내 옥수수 순계주에서 CP4 5-Enol- Pyruvylshikimate-3- Phosphate Synthase 유전자의 발현

조미애,권석윤,김진석,이병규,문추연,최필선,Cho, Mi-Ae,Kwon, Suk-Yoon,Kim, Jin-Seog,Lee, Byoung-Kyu,Moon, Choo-Yeun,Choi, Pil-Son 한국식물생명공학회 2007 식물생명공학회지 Vol.34 No.4

국내 옥수수 순계주에서 Agrobacterium 공동배양으로 CP4 5-Enol-pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (CP4 EPSPS) 유전자가 도입된 제초제저항성식물체를 개발하였다. 5개의 순계주 (HW1, KL103, HW3, HW4, HW7)의 미숙배를 Ubiquitin promoter-CP4 EPSPS 유전자와 CaMV35S promoter-nptII 유전자가 발현되도록 제조된 pCAMBIA2300 벡터를 C58C1 Agrobacterium에 형질전환하여 공동 배양하였다. 항생제로 paromomycin이 첨가된 배지에서 선발된 옥수수 형질전환체를 PCR, RT-PCR 및 Northern 분석을 통하여 유전자의 도입과 발현을 확인하였다. 또한 형질전환 식물체의 glyphosate 처리에 따른 shikimate 축적반응을 확인하였다. Paromomycin 저항성 캘러스 형성빈도는 옥수수 각 순계주 HW1, KL103, HW3, HW4, HW7에서 각각 0.37%, 0.03%, 2.20%, 2.37%, 0.81%로 나타났으며, PCR분석을 통하여 최종적으로 2개의 옥수수 순계주 (HW3, HW4)의 paromomycin 저항성 캘러스로부터 분화된 식물체에서 확인하였다. 이러한 형질전환체중에서 RT-PCR 및 Nothern blot 분석을 통하여 CP4 EPSPS 유전자가 발현되는 2개의 계통 (M266, M104) 을 선발하였고, shikimate 축적반응을 통하여 glyphosate에 대한 저항성을 갖는 계통 (M266)을 최종적으로 선발하였다. 이러한 결과는 국내 옥수수 순계주에서 제초제저항성을 갖는 옥수수 형질 전환체를 개발할 수 있음을 시사한다. This study was conducted to develop herbicide-resistance domestic maize plants by introducing the CP4 5-enol-pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (CP4 EPSPS) gene using Agrobacterium tumefaciens-mediated immature embryo transformation. Immature embryos of five genotypes (HW1, KL103, HW3, HW4, HW7) were co-cultivated with strains Agrobacterium tumefaciens (strain C58C1) containing the binary vector (pCAMBIA2300) carrying Ubiquitin promoter-CP4 EPSPS gene and Cauliflower mosaic virus 35S (CaMV35S) promoter-nptll gene conferring resistance to paromomycin as a selective agent. The presence and expression of CP4 EPSPS transgene were confirmed by PCR, RT-PCR and Northern blot analysis, respectively. Also, the resistance to glyphosate in the transgenic maize ($T_1$) was analyzed by shikimate accumulation assay. The frequency (%) of paromomycin-resistance callus was 0.37, 0.03, 2.20, 2.37, and 0.81% in pure lines HW1, KL103, HW3, HW4 and HW7, respectively. EPSP transgene sequences were amplified in putative transgenic plants that regenerated from paromomycin-resistance calli of two inbred lines (HW3, HW4). Of them, RT-PCR and Northern blot analyses revealed that the transgene was only expressed in two transgenic events (M266, M104) of HW4 inbred line, and a mild glyphosate resistance of transgenic event (M266) was confirmed by the lower shikimate accumulation in leaf segments. These results demonstrate that transgenic maize with herbicide-resistance traits in Korean genotype can be genetically obtained.

오이의 형질전환을 위반 선발마커로서 Glufosinate의 이용

조미애,송윤미,박윤옥,고석민,민성란,유장렬,최필선,Cho Mi-Ae,Song Yun-Mi,Park Yun-Ok,Ko Suck-Min,Min Sung-Ran,Liu Jang-Ryol,Choi Pil-Son 한국식물생명공학회 2005 식물생명공학회지 Vol.32 No.3

Agrobacterium과 자엽절편의 공동배양으로 박과작물인 오이의 형질전환체를 생산하였다. 오이 배양재료는 "은침"의 자엽절편을 사용하였으며, reporter유전자로서 gus유전자와 선발표지로서 bar 또는 nptII유전자로 각각 제작된 pPTN289와 pPTN290벡터를 GV3101, LBA4404, EHA101에 형질전환하여 공동배양하였다. 형질전환빈도는 Agrobacterium의 종류에 따라 현저한 차이가 있었으며, 특히 사용한 균주중 EHA101에서 0.35%로 가장 높았다. 선발배지에서 형성된 오이 식물체중 제초제 저항성 (12개체)과 paromomycin 저항성 (3개체)을 얻었고, 이들 모두 gus양성반응 나타냈다. Southern분석에 의하여 오이 형질전환체의 genome에 gus유전자가 도입되어 있음을 확인 하였다. Agrobacterium tumefaciens-mediated cotyledonary explants transformation was used to produce transgenic cucumber. Cotyledonary explants of cucumber (c.v., Eunchim) were co-cultivated with strains Agrobaderium (LBA4404, GV3101, EHA101) containing the binary vector (pPTN289) carrying with CaMV 355 promoter-gus gene as reporter and NOS promoter-bar gene conferring resistance to glufosinate (herbicide Basta) as selectable marker. There was a significant difference in the transformation frequency depending Agrobacterium strains. The EHA101 of bacterial strains employed gave the maximum frequency (0.35%) for cucumber transformation. Histochemical gus and leaf painting assay showed that 15 individual lines were transgenic with the gus and bar gene. Southern blot analysis also revealed that the gus gene was successfully integrated into each genome of transgenic cucumber.

배추의 형질전환용 선발항생제로서 Paromomycin의 이용

조미애,민성란,고석민,유장렬,이준행,최필선,Cho, Mi-Ae,Min, Sung-Ran,Ko, Suck-Min,Liu, Jang-Ryol,Lee, Jun-Haeng,Choi, Pil-Son 한국식물생명공학회 2006 식물생명공학회지 Vol.33 No.4

정상' 배추와 '서울' 배추의 배축절편을 선발마커로서 hygromycin 저항성유전자를 갖고 있는 pCAMBIA1301와 paromomycin저항성유전자를 갖고 있는 pPTN290으로 각각 형질 전환된 LBA4404 또는 EHA101균주와 공동배양한 후 선발배지에서 배양하면서 형질전환체를 선발하였다. 형질전환빈도는 사용된 항생제와 품종에 따라서 현저하게 차이가 있었으며, 특히 paromomycin은 hygromycin보다 효과적이었고 정상 배추는 서울배추보다 양호하였다. 가장 높은 형질전환빈도는 (0.70%) 100mg/L paromomycin이 첨가된 선발배지에서 정상배추의배축을 배양할 경우 얻어졌다. GUS양성반응으로 확인 한 결과 정상배추에서 9개체와 서울배추에서 3개체를 각각 얻었으며, 온실에서 생장한 후 $T_1$종자를 수확하였다. $T_1$ 종자를 다시 발아시켜 유식물체를 얻은 후 GUS양성반응을 확인함으로서 외래유전자가 안정적으로 발현하고 있음을 확인하였다. Hypocotyl explants of Chinese cabbage (us. 'Jeong Sang' and 'Seoul') produced adventitious shoots on Murashige and Skoog (MS) basal medium supplemented with 4mg/L $AgNO_3$, 5 mg/L acetosyringone, 4 mg/L 6-benzyladenine and 3mg/L alpha-naphthaleneacetic acid (SI) after cocoultivation with strains of Agrobacterium tumefaciens (LBA4404) harboring the pCAMBIA1301 and the $_PPTN290$ containing hygromycin-resistance gene and paromomycin-resistance gene as a selectable marker genes, respectively. There was a significant difference in the frequency of transgenic plants depending on antibiotics and cultivars used. Paromomycin was better than hygromycin, and cultivar 'Jeong-sang' was higher than 'c.v. Seoul' in the frequency of transgenic plants. In particular, the highest frequency (0.70%) of transgenic plants was obtained from selection medium (SI) containing 100mg/L paromomycin in c.v., 'Jeong-sang' GUS positive response were obtained 9 plants and 3 plants from the cultivars, 'Jeong-sang' and 'Seoul', respectively. They were grown to maturity in a greenhouse and normally produced $T_1$ seeds. GUS histochemical assay for progeny $(T_1)$ revealed that the transgenes were expressed in the plant genome.

Agrobacterium tumefaciens 공동배양법을 이용한 옥수수 형질전환체 생산

조미애,박윤옥,김진석,박기진,민황기,유장렬,최필선,Cho Mi-Ae,Park Yun-Ok,Kim Jin-Suck,Park Ki-Jin,Min Hwang-Ki,Liu Jang-Ryol,Clemente Tom,Choi Pil-Son 한국식물생명공학회 2005 식물생명공학회지 Vol.32 No.2

옥수수 미숙배배양과 Agrobacterium tumefaciens공동배양법에 의해 형질전환체를 생산하였다. Hi II계통의 미숙배를 Ubiquitin 1 promoter-GUS유전자와 선발마커로서 nptII 유전자로 제작된 pPTN290벡터를 C58C1에 도입한 후 형질전환 균주로 사용하였다. 7개의 paromomycin저항성 배 발생캘러스를 얻었으며, GUS양성반응을 나타내는 7개의 독립적인 식물체를 얻었다. Southern분석법에 의하여 $T_1$세대 식물체로부터 nptII유전자가 안정적으로 도입되어 있음을 확인하였다. Agrobacterium tumefaciens-mediated immature embryo transformation was used to produce transgenic maize. Immature embryo of Hi II genotype were co-cultivated with strains Agrobacterium tumefaciens (C58C1) containing the binary vectors (pPTN290) carrying with Ubiquitin promoter-GUS gene as reporter gene and NOS promoter-nptll gene conferring resistance to paromomycin as selective agent. Seven embryogenic callus lines transformed showed the resistance in paromomycin antibiotics. Histochemical GUS assay showed that 7 individual lines transformed with the GUS gene were positive response among the transformants. Southern blot analysis revealed that the nptll gene segregated and expressed in their progeny.

Agrobacterium tumefaciens을 이용한 대두 형질전환체 개발

조미애,최동욱,유장렬,최필선,Cho, Mi-Ae,Choi, Dong-Woog,Liu, Jang-Ryol,Clemente Tom,Choi, Pil-Son 한국식물생명공학회 2004 식물생명공학회지 Vol.31 No.4

Agrobacterium과 자엽절 공동배양으로 대두 형질전환체를 생산하였다. 대두 배양재료는 3개의 품종과 1개의 genotype의 자엽절 절편을 사용하였으며, bar유전자와 GUS유전자로 제작된 pPTN289와 pCAMBIA3301벡터를 LBA4401, GV3101, EHA101, C58에 각각 형질전환하여 공동 배양하였고 모든 형질전환 방법은 약간 변형된 Zhang 등(1999)의 방법에 따라 수행하였다. 형질전환빈도는 아그로박테리움의 종류에 따라 현저한 차이가 있었으며, 특히 사용한 균주중 EHA101에서 3.6%로 최대치를 보였다. Glufosinate가 첨가된 선발배지에서 106개의 식물체를 얻었으며, 이중 Thorne에서 5개체, 1049에서 5개체, 백운콩에서 1개체 등 모두 11개로부터 GUS양성반응을 확인하였다. Southern분석과 basta검정법에 의하여 T1세대 식물체로부터 GUS유전자와 bar유전자가 발현되고 있음을 확인하였다. Agrobacterium tumefaciens-mediated cotyledonary node transformation was used to produce transgenic soybean. Cotyledonary node explants of three cultivars and one genotype were co-cultivated with strains Agrobacterium (LBA4404, GV3101, EHA101, C58) containing the binary vectors (pCAMBIA3301 and pPTN289) carrying with CaMV 35S promoter-GUS gene as reporter gene and NOS promoter-bar gene conferring resistance to glufosinate (herbicide Basta) as selectable marker. There was a significant difference in the transformation frequency depend on bacteria strain. The EHA101 strain of the bacterial strains employed gave the maximum efficiency (3.6%). One hundred-six lines transformed showed the resistance in glufosinate. Histochemical GUS assay showed that at least 11 plants transformed with the GUS gene were positive response. The soybean transformants were obtained from the Thorne (5 plants), 1049 (5 plants) and Bakun (1 plant), respectively. Southern blot analysis and leaf painting assay revealed that the GUS and bar gene segregated and expressed in their progeny.

Agrobacterium 공동 배양을 통한 자엽절 절편 배양으로부터 멜론 형질전환체 생산

조미애,송윤미,박윤옥,고석민,민성란,유장렬,이준행,최필선,Cho Mi-Ae,Song Yun-Mi,Park Yun-Ok,Ko Suck-Min,Min Sung-Ran,Liu Jang-Ryol,Lee Jun-Haeng,Choi Pil-Son 한국식물생명공학회 2005 식물생명공학회지 Vol.32 No.4

Agrobacterium과 자엽절 공동배양으로 대두 형질전환체를 생산하였다. 멜론 (슈피VIP품종)의 자엽절 절편은 선발 마커로서 bar와 reporter로서 gus유전자가 포함된 pPTN289 또는 선발마커로서 nptII유전자와 reporter로서 gus유전자로 제작된 pPTN290벡터를 LBA4401, GV3101, EHA101에 각각 형질전환하여 공동 배양하였다. 최대 형질전환빈도(0.16%)는 EHA101 (pPTN289)균주로 공동배양한 자엽절 절편을 glufosinate가 첨가된 선발배지에서 얻을 수 있었으며, 최종적으로 glufosinate저항성과 잎 ($T_0$), 화기 ($T_0$), 종자 ($T_1$) 및 유식물체 ($T_1$)에서 GUS양성반응을 나타내는 5개체를 얻었다. Southern분석에 의하여 GUS유전자가 멜론 genomic DNA에 도입되어 있음을 확인하였다. Agrobacterium tumefaciens-mediated cotyledonary-node explants transformation was used to produce transgenic melon. Cotyledonary-node explants of melon (Cucumis melo L. cv. Super VIP) were co-cultivated with Agrobacterium strains (LBA4404, GV3101, EHA101) containing the binary vector (pPTN289) carrying with CaMV 35S promoter-gus gene as reporter gene and NOS promoter-bar gene conferring resistance to glufosinate (herbicide Basta) as selective agent, and the binary vector (pPTN290) carrying with Ubiquitin promoter-GUS gene and NOS promoter-nptll gene conferring resistance to paromomycin as selective agent, respectively. The maximum transformation efficiency (0.12%) was only obtained from the cotyledonary-node explants co-cultivated with EHA101 strain (pPTN289) on selection medium with 5 mg/L glufosinate and not produced a transgenic melon from the cotyledon or cotyledonary-node co-cultivated with other strains. Finally, five plants transformed showed the resistance in glufosinate antibiotic and the GUS positive response in leaf ($T_0$), flower ($T_0$), seeds ($T_1$) and plantlet ($T_1$). Southern blot analysis revealed that the gus gene integrated into each genome of transgenic melon.

복숭아 ‘천중도백도’ 수확 후 상온 저장 중 에틸렌흡착제 처리 효과

조미애(Mi-Ae Cho),홍윤표(Yoon-Pyo Hong),임병선(Byeong-Sun Lim),최지원(Ji-Weon Choi),이은진(Eun-Jin Lee),정대성(Dae-Sung Chung) 한국원예학회 2012 한국원예학회 학술발표요지 Vol.2012 No.10