RT-PCR 방법을 이용한 효과적인 감자 잎말림 바이러스의 검정

전재흥,정영희,최경화,김현순,오현우,박세원,정혁,Jeon, Jae-Heung,Joung, Young-Hee,Choi, Kyung-Hwa,Kim, Hyun-Soon,Oh, Hyun-Woo,Park, Se-Won,Joung, Hyouk 한국식물병리학회 1996 Plant Pathology Journal Vol.12 No.3

감자 잎말림 바이러스를 검정하기 위하여 ELISA 및 전자현미경에 의해 바이러스 감염이 확인된 기내 배양중인 감장의 줄기로부터 RT-PCR 분석을 수행하였다. 분리된 총 RNA들로부터 바이러스 cDNA를 합성하고 감자 잎말림 바이러스 외피단백질의 일부인 465bp를 특이하게 증폭하도록 고안한 두 primer를 사용하여 PCR 반응을 하였다. 증폭된 465pb의 DNA 절편의 염기서열을 분석한 결과 역시 감자 잎말림 바이러스임을 확인하였다. 바이러스 검정에 있어서 EL-ISA 방법과 RT-PCR 방법간의 민감도를 조사한 결과 RT-PCR 방법간의 민감도를 조사한 결과 RT-PCR 방법이 ELISA 방법보다 감자 잎말림 바이러스검정에 있어서보다 정확한 방법인 것으로 사료된다.

상온 및 방사선 경화 복합재 풍력 블레이드의 구조성능 비교

전재흥,김성준,신의섭,Jeon, Jae Heung,Kim, Sung Jun,Shin, Eui Sup 한국전산구조공학회 2012 한국전산구조공학회논문집 Vol.25 No.3

In this paper, cross-sectional stiffnesses, static stresses, and dynamic natural frequencies are analyzed to examine the structural performance of wind turbine composite blades. The material properties of composite materials are based on room-temperature and radiation curing processes. The cross-sectional stiffnesses of composite blades are calculated by applying a beam theory with solid-profile cross sections. The wind turbine blades are modeled with a finite element program, and static analyses are carried out to check the maximum displacement and stress of the blades. In addition, dynamic analyses are performed to predict the rotating natural frequencies of the composite blades including the effects of centrifugal force. By comparing these analysis results, mainly owing to the material properties of composite materials, an improvement in the structural performance of the blades according to the curing process is investigated. 본 논문에서는 상온 및 방사선 경화 복합재 풍력 블레이드의 구조성능을 비교하기 위하여 단면 강성, 정적응력 및 동적 고유 진동수를 해석하였다. 먼저 상온 및 방사선 경화공정에 의한 복합재료 시편의 탄성계수 등 물성 값을 적용하였다. 블레이드의 단면 강성 값은 고형 복합재료 보 이론을 적용하여 유한요소 적분법으로 계산하였다. 허브 체결부위를 포함한 소형 풍력 블레이드를 상용 유한요소 프로그램으로 모델링하여 최대 변위와 응력분포 등을 확인하였다. 또한, 풍력 블레이드의 회전속도에 따른 원심력 효과를 고려하여 고유 진동수 해석을 병행하였다. 이와 같은 일련의 해석결과를 상호 비교함으로써, 상온 및 방사선 경화 복합재료의 물성 값 차이에서 기인하는 풍력 블레이드의 구조성능 변화를 정량적으로 분석하였다.

항원 생산 기반으로서의 식물 연구

염정원,전재흥,정혁,김현순,Youm, Jung-Won,Jeon, Jae-Heung,Joung, Hyouk,Kim, Hyun-Soon 한국식물생명공학회 2010 식물생명공학회지 Vol.37 No.3

The expression of vaccine antigens in transgenic plants has the potential to provide a convenient, stable, safe approach for oral vaccination alternative to traditional parenteral vaccines. Over the past two decades, many different vaccine antigens expressed via the plant nuclear genome have elicited appropriate immunoglobulin responses and have conferred protection upon oral delivery. Up to date, efforts to produce antigen proteins in plants have focused on potato, tobacco, tomato, banana, and seed (maize, rice, soybean, etc). The choice of promoters affects transgene transcription, resulting in changes not only in concentration, but also in the stage tissue and cell specificity of its expression. Inclusion of mucosal adjuvants during immunization with the vaccine antigen has been an important step towards the success of plant-derived vaccines. In animal and Phase I clinical trials several plant-derived vaccine antigens have been found to be safe and induce sufficiently high immune response. Future areas of research should further characterize the induction of the mucosal immune response and appropriate dosage for delivery system of animal and human vaccines. This article reviews the current status of development in the area of the use of plant for the development of oral vaccines.

감자의 잎 절편 배양시 몇 가지 배지의 첨가물이 식물체 재분화에 미치는 영향

최경화,전재흥,김현순,정영희,정혁,Choi, Kyung-Hwa,Jeon, Jae-Heung,Kim, Hyun-Soon,Jung, Young-Hee,Jung, Hyuk 한국식물생명공학회 1997 식물생명공학회지 Vol.24 No.1

몇 가지 종류의 배지첨가물이 재분화가 어려운 것으로 알려져 있는 감자 애틀란틱품종의 잎 절편 배양시 shoot 형성에 미치는 영향을 조사하였다. 카세인 가수분해물은 2 g/L 농도가 재분화에 효과적이었으며 AgNO$_3$는 10-20 $\mu$M농도에서 재분화가 잘되었고 잎 절편도 갈변되지 않고 푸르게 유지되었는데 이것은 AgNO$_3$가 에틸렌 발생을 효과적으로 억제했기 때문으로 생각된다. Sucrose는 3%보다 낮은 농도에서 shoot 유기가 효과적이었고 CuSO$_4$는 애틀란틱품종 감자 잎 절편으로부터 식물체 재분화에 영향을 주지 못하였다. The effects of several additives on plant regeneration were investigated from leaf disc culture of S. tuberosum cv. Atlantic which is known as poor in regeneration ability. The presence of 2 g/L casein hydrolysate significantly enhanced shoot regeneration. Addition of 10~20 $\mu$M $AgNO_3$, not only increased the frequency of shoot regeneration but also maintained the leaf disc green presumably by the inhibitory action of ethylene accumulation in vitro. Decrease of sucrose levels to below 3% significantly increased the degree of regeneration. The addition of CuSO$_4$had no effect on shoot regeneration.

RT-PCR 기법을 이용한 Lily Symptomless Virus의 검정

정영희,전재흥,최경화,김현순,정혁,Joung, Young-Hee,Jeon, Jae-Heung,Choi, Kyung-Hwa,Kim, Hyun-Soon,Joung, Hyouk 한국식물병리학회 1996 Plant Pathology Journal Vol.12 No.2

백합으로부터 total RNA를 분리하여 LSV 외피단백질 유전자의 551 bp에 해당하는 특정 염기서열을 증폭할 수 있는 primer로 RT-PCR를 수행하였다. 그 결과 Lilium oriental hybrid cvs. Miani, Marco Polo, Casablanca, Le Reve 품종에서 551 bp의 DNA 절편이 증폭되었고 이 절편의 염기서열을 분석한 결과 LSV외피단백질 유전자의 일부임을 확인할 수 있었다. 그러므로 RT-PCR 방법으로, 실험에 사용하 s4품종 모두 LSV에 감염되어 있음을 알 수 있었다.

Expression of Low Temperature Regulated Gene H28 in Solanum tuberosum L.

최경화,전재흥,김현순,정영희,정혁,양덕춘,Choi, Kyung-Hwa,Jeon, Jae-Heung,Kim, Hyun-Soon,Joung, Young-Hee,Joung, Hyouk,Yang, Deok-Chun 한국자원식물학회 1997 한국자원식물학회지 Vol.10 No.4

저온관련 유전자인 H28 유전자를 갖고 있는 Agrobacterium MP90균주를 Desiree와 Atlantie 감자 품종의 잎절편과 공동배양한 후 약 6-8주 후에 항생제가 첨가된 선발배지에서 multiple shoots를 얻을수 있었다. 선발된 형질전환체를 대상으로 PCR 방법을 이용한 NPT II 유전자와 H28를 확인한 결과 내한성유전자가 식물체의 genome에 안정적으로 삽입되었음을 확인하였고 northern blot 확인에 의하여 내한성 유전자가 발현됨을 확인하였다. Leaf dise explants of Solanum tuberosum cultivar. Desiree and Atlantic, were infected with a Agrobacterium MP90 strain containing chimeric gene construct, consisting of antibiotic and low temperature regulated gene (H28) for transformation. regenerated multiple shoots were selected on a medium containing kanamycin and carbenieillin after exposure to Agrobacterium. Both PCR analysis of NPT Ⅱ, H28 genes and northern blot analysis indicated that the genes coding for the enzyme were successfully integrated into the potato genome and could be expressed in potato plants.

Transient Erythropoietin Overexpression with Cucumber Mosaic Virus Suppressor 2b in Nicotiana benthamiana

문기범,전재흥,이우성,김현순 한국원예학회 2012 Horticulture, Environment, and Biotechnology Vol.53 No.5

Erythropoietin (EPO) is a glycoprotein hormone that regulates red blood cell formation in mammals. It also plays an important role in wound healing and the brain’s response to neuronal injury. Recombinant EPO has been produced in various hosts including Escherichia coli, insect cells, and yeast. Plant systems are also useful for the production of recombinant proteins. In this study, we used Nicotiana benthamiana for the production of recombinant human EPO (rhEPO) using an Agrobacterium-mediated transient expression system. We evaluated the effect of repeated agroinfiltration and Agrobacterium density on the rhEPO production. In addition, the rhEPO expression vector was coinfiltrated with a vector expressing cucumber mosaic virus suppressor 2b (CMV2b), which suppresses posttranscriptional gene silencing. We found that rhEPO expression was increased approximately 5.5-fold in N. benthamiana leaves coinfiltrated with CMV2b. In contrast, neither Agrobacterium density nor the number of infiltrations influenced rhEPO expression.

ELISA 및 RT-PCR 기법을 이용한 Potato virus S의 검정

김현순,전재흥,정혁,최경화,정영희,오현우 한국식물병리학회 1997 Plant Pathology Journal Vol.13 No.5

Stable Maintenance of Human Beta Amyloid in Transgenic Potato

염정원,전재흥,김희,김영호,정혁,김현순 한국원예학회 2008 Horticulture, Environment, and Biotechnology Vol.49 No.4

Beta amyloid (Aβ) is a potent oral immunogen with potential utility as a vaccine against Alzheimer’s disease (AD). Our previous work investigated the ability of a protein comprised of five tandem repeats of Aβ42(5Aβ42) to induce an immune response in a transgenic AD mouse model, and demonstrated that immunization with potato-derived 5Aβ42 reduced the Aβ burden as well as many of the AD-associated pathological features. To provide a potato-derived 5Aβ as vaccine material, the stable yield of 5Aβ protein through constant expression of introduced transgene is the most important factor. In the present study, we confirmed that the 5Aβ42 transgene were inherited and stably expressed in in vitro vegetative propagation over a period of 3 years without silencing. The 5Aβ42 protein, too, was expressed well without change of its antigenicity in transgenic potato. Stable storage conditions were vital in maintaining the stability of the potato-derived 5Aβ42 protein, and activity of the protein was not affected following up to three months’ storage at low temperature.

Rotavirus VP6 유전자의 감자식물체내로의 도입과 형질전환체의 발현분석

염정원,전재흥,정재열,이병찬,강원진,김미선,김철중,정혁,김현순,Youm, Jung-Won,Jeon, Jae-Heung,Jung, Jae-Yeol,Lee, Byoung-Chan,Kang, Won-Jin,Kim, Mi-Sun,Kim, Chul-Joong,Joung, Hyouk,Kim, Hyun-Soon 한국식물생명공학회 2002 식물생명공학회지 Vol.29 No.2

바이러스 설사병의 원인인 VP6유전자를 감자에 형질전환 시키기 위하여 CaMV 35S promoter와 kanamycin 항생제 내성을 갖는 식물발현벡터 pMBP-1에 subcloning하고, 이 재조합 벡터를 A. tumefaciens LBA4404에 도입시킨 후, freeze haw방법을 이용하여 감자에 형질전환 시켰다. 공동배양된 감자의 잎절편은 2,4-D가 2.0 mg/L첨가된 배지에서 2일간 배양 후, 0.01 mg/L NAA, 0.1 mg/L GA$_3$, 2.0 mg/L Zeatin, 100.0 mg/L kanamycin, 500.0 mg/L carbenicillin이 첨가된 선발배지에서 재분화시켰다. 이 때 유도된 신초는 100.0 mg/L의 kanamycin이 포함된 배지에 옮겨준 후, 왕성한 생육을 위해 MS 기본배지에서 다시 배양하였다. 기내배양시 외부유전자의 도입에 의한 외형적인 변화는 찾을 수 없었으며, 형질전환체는 NPT primer를 사용한 PCR방법으로 1차선별 하였다. DIG 표지된 probe를 이용하여 total RNA를 분석한 결과 개체별로 발현양의 차이는 있었으나, 95% 이상의 안정성을 보였고, genomic DNA를 추출해 Southern blot hybridization했을 경우 1~3개의 copy수를 보임으로써 형질전환 식물체에 외래유전자인 VP6유전자가 안정적으로 도입되었음이 확인되었다. A VP6 fragments was subcloned with BamHI in the binary pMBP-1 vector under Califlower Mosaic Virus (CaMV) 355 promoter and neomycin phosphotransferase II (npt II) gene. The recombinant binary vector was mobilized into Agrobacterium-tumefaciens LBA4404 by the freeze-thaw method and potato (Solanum tubensum L. cv Desiree) was transformed by modified leaf-disc cocultivation. Shoots were induced on MS medium with 0.01 mg/L NAA, 0.1 mg/L GA$_3$, 2.0 mg/L Zeatin, 100.0 mg/L kanamycin, 500.0 mg/L carbenicillin. In order to identify the copy number of VP6 into potato plant, total genomic DNA was isolated from transgenic potato and analysed by Southern blotting. Genomic DNA and total mRNA analysis demonstrated the incorporation of the foreign gene into the potato genome, as well as their transcription.