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Corynebacterium세균의 이종간 원형질체 융합에 의한 재조합주의 유전학적 분석과 L-glutamate 와 L-glutamine 생성
백선영,이혜경,최순영,김종욱,이세배,임번삼,민경희 한국산업미생물학회 1990 한국미생물·생명공학회지 Vol.18 No.3
자외선 조사와 NTG를 처리하여 Brevibacterium flavum 10AHR(arg his Rif^r)과 Corynebacterium glutamicum 11TS(trp Sm^r)의 돌연변이주를 분리하였다. B. flavum 10AHR과 C. glutamicum 11TS를 300㎍/㎖의 lysozyme으로 18시간 처리하여 원형질체를 형성하고, 융합시 30%의 PEG 6,000으로 처리하였을 때 가장 높은 3.7×10 exp(-6)의 융합빈도를 나타내었다. 재조합주의 유전적 분석결과 재조합주들은 FMM(Rif^r Sm^r), FA(Rif^r Sm^r arg), FH(Rif^r Sm^r his), FT(Rif^r Sm^r trp), FAH(Rif^r Sm^r arg his), FAT(Rif^r Sm^r arg trp), FAHT(Rif^r Sm^r arg his trp)으로 분류되었다. FAH에 속하는 균주들은 대부분 모균주에 비해 glutamate와 glutamine의 생산성이 월등히 증가하였으며, FAH1의 경우 glutamate 생성에 있어 모균주인 B. flavum 10AHR에 비해 12배, glutamine은 모균주인 C. glutamicum 11TS에 비해 2.6배 정도 생성이 현저히 증가하였다. 재조합주들의 효소활성을 측정해본 결과 glutamate와 glutamine의 생성량은 GDH와 GS의 활성도와 각각 관련이 있음을 알 수 있었다. For interspecific portoplast fusion, Brevibacterium flavum 10AHR(Rif^r arg his) and Corynebacterium glutamicum 11TS(Sm^r trp) were induced by UV and NTG treatment. The protoplast fusion frequency between B. flavum 10AHR and C. glutamicum 11TS was 3.7×10 exp(-6) with the lysozyme treatment(300㎍/㎖) for 18 hrs. Genotypes of recombinants were analized as FMM(Rif^r Sm^r), FA (Rif^r Sm^r arg), FH(Rif^r Sm^r his), FT(Rif^r Sm^r trp), FAH(Rif^r Sm^r arg trp), FAT(Rif^r Sm^r arg trp), and FAHT(Rif^r Sm^r arg his trp). FAH 1 produced 12 fold of glutamate production compared to parental type, B. flavum 10AHR. In glutamine productivity, it produced 2.6 fold to parental type, C. glutamicum 11TS. Production of glutamate or glutamine by recombinants was involved in the specific activities of glutamate dehydrogenase(GDH) and glutamine synthetase(GS), respectively.