통상 림프구 아형 검사에서 면역노화 관련 T 세포 아형 표지자

원동일,송경은,서장수,이원길,이난영 대한진단검사의학회 2003 Annals of Laboratory Medicine Vol.23 No.3

배경 : 면역노화는 주로 T 세포의 변화에 의한다. 본 연구에서는 통상적으로 림프구 아형검사에 사용되는 항체를 이용하여 면역노화에 대한 실용적인 표지자를 찾아 내고자 하였다.방법 : 건강 젊은이군(평균 31.2± 2.9세)과, 환자 노인군(평균83.1± 3.8세)을 대상으로, 삼색 유세포분석을 하였으며, 두 군간CD4lo, CD4-CD8- double negative (DN), CD4 +CD8+ doublepositive (DP) T 세포를 비교하였고, DN, DP T 세포 측정 방법을 검토하였다.결과 : 두 군간 유의한 차이를 보이는 표지자는 DN, DP T 세포의 T 세포중 비율, DN T 세포 절대수, CD4 mean fluorescenceintensity이었다. DN T 세포 절대수가 가장 현저한 차이를 보였212 원동일송경은서장수 외 2인다. 계산에 의한 DN (cDN) T 세포와 직접 측정한 DN T 세포비율은 비교적 우수한 상관성이 있었으나(r= 0.921, P<10-26), 노인군에서 상관성이 감소하였다. CD4lo는 통계학적 유의수준에 이르지 못하였다. DP T 세포 측정시 이색법과 삼색법은 비교적 우수한 상관성이 있었다(r= 0.871, P<10-15). 각종 성인 질환군간비교에서 cDN T 세포는 질환에 관계없이 노인군에서만 유의하게 감소하였다(P<0.01).

신장 이식을 위한 HLA 교차시험에서 전혈 유세포분석법의 실험적 적용

원동일 대한진단검사의학회 2006 Annals of Laboratory Medicine Vol.26 No.1

서론 : 신장 이식을 위한 유세포분석법에 의한 HLA 교차시험(flow cytometry crossmatch, FCXM)에서 공여자 말초혈액에서 분리한 림프구가 사용된다. 본 연구에서는 FCXM에서 림프구분리 과정 없이 전혈을 이용하는 방법을 시도하여 보았다.방법 : 신장이식을 위한 T 세포 FCXM에서 20예(양성 5예 포함)를 대상으로, 단핵구를 분리하여 검사하는 방법(표준법)을 기준으로 전혈을 이용한 두 가지 변법을 비교하였다. 전혈을 이용하는 경우, 공여자 전혈과 과량의 수여자 혈청을 반응시킨 후 적혈구를 용혈(전혈용혈법)시키거나, 용혈시키지 않고 fluorescencesignal triggering 기법으로 T 세포의 신호를 수집(전혈법)하였다.결과 판정을 위하여 시험 혈청의 측정치를 음성 대조로 나눈 값,즉 평균형광강도비(MFI ratio)를 구하였다.결과 :표준법, 전혈용혈법, 전혈법에 의한 20예의 MFI 비는 각각 4.9±8.1, 5.4±9.7, 4.8±7.8로, 전혈용혈법과 전혈법 둘 다 표준법과 비교하여 유의한 차이가 없었다(각 P=0.313, 0.831, pa-ired t-test). 정성 판정은 1예를 제외한 모든 예에서 일치하였다.불일치한 1예는 전혈용혈법에서만 MFI 비 2.2의 약양성이었다.

만성골수성백혈병의 이형성(二型性) 아구성 발증기 1예

원동일,김백수,남정현,도윤정,권오헌,민유홍 대한임상병리학회 1992 대한임상병리학회지 Vol.12 No.3

HLA 교차시험에서 AHG-CDC의 유세포 측정: 예비연구

원동일 대한수혈학회 2010 大韓輸血學會誌 Vol.21 No.2

Background: For HLA crossmatch in organ transplantation, complement-dependent cytotoxicity (CDC) is a very useful methodology to detect donor-specific HLA antibodies and their complement fixing ability. In this preliminary pilot study, we investigated whether dead cells induced in anti-human globulin (AHG)-augmented CDC (AHG-CDC) reaction could be measured by flow cytometry (‘FC AHG-CDC’). Methods: This FC AHG-CDC measured the percentage of dead cells (% dead cells) after 7-aminoactinomycin D staining using 3 color flow cytometry. A total 45 flow cytometry crossmatch (FCXM) cases of 12 positives and 33 negatives were further tested using this FC AHG-CDC. Results: The % dead cells of FC AHG-CDC was significantly correlated with the mean fluorescent intensity ratio of FCXM (T cells: r=0.613, P=7.45×10-6; B cells: r=0.404, P=0.006). The positivity rate of FC AHG-CDC among FCXM positive cases was relatively high: 80% (8/10) for T cells and 75% (9/12) for B cells. The negativity rate of FC AHG-CDC among FCXM negative cases was 100% (35/35) for T cells and 91% (30/33)for B cells. Conclusion: In this pilot study, FC AHG-CDC could yield quantitative values, % dead cells, which was proportional to the level of complement-fixing cytotoxic antibodies against T and B cells, respectively, even without physical separation of cells or serial dilution of serum. (Korean J Blood Transfus 2010;21:122-131) 배경: 장기이식을 위한 HLA 교차시험에서 보체의존세포독성법(CDC)은 기증자특이 HLA 항체의 존재와 보체고정 능력을 평가하는데 매우유용한 방법이다. 본 예비연구에서는 anti-human globulin (AHG)-증강 CDC (AHG-CDC) 반응 유발후 죽은 세포를 유세포분석법(flow cytometry, FC)으로 측정할 수 있는지 조사하였다(‘FC AHGCDC’). 방법: 본 FC AHG-CDC는 삼색상 유세포분석법으로서, 7-aminoactinomycin D로 염색하여 죽은세포 비율(% dead cells)을 측정하였다. flow cytometry crossmatch (FCXM) 총 45예(양성 12예, 음성 33예)에서 FC AHG-CDC를 시행하여 비교하였다. 결과: FC AHG-CDC의 % dead cells는 FCXM의mean fluorescent intensity ratio와 유의한 상관관계가 있었다(T세포: r=0.613, P=7.45×10−6; B세포:r=0.404, P=0.006). FCXM 양성예중 FC AHG-CDC 양성률은 T, B세포 각각 80% (8/10), 75% (9/12)로비교적 높았다. FCXM 음성예중 FC AHG-CDC 음성률은 T, B세포 각각 100% (35/35), 91%(30/33)이었다. 결론: 본 예비연구에서, FC AHG-CDC는 T와 B 세포의 물리적 분리와 혈청 배수 희석 없이도 각세포에 대한 보체고정 세포독성 항체의 농도에비례하는 정량적인 측정치인 % dead cells을 얻을수 있었다.

항응고제 비의존성 응집소에 의한 위혈소판감소증

원동일,권오건,윤갑준 대한임상병리학회 1999 대한임상병리학회지 Vol.19 No.6

용혈지수를 이용한 용혈 간섭의 산술적 교정

원동일,진혜경,윤갑준 대한임상검사정도관리학회 2000 臨床檢査와 精度管理 Vol.22 No.1

Natural soluble human leukocyte antigen class I in donor serum neutralizes donor-specific HLA alloantibodies in recipient serum

원동일,Nan Young Lee,Jeong-Hoon Lim,한영석,Chan-Duck Kim,Seung Huh 대한혈액학회 2020 Blood Research Vol.55 No.2

BackgroundHuman leukocyte antigen (HLA) molecules are cell-bound but can be identified in a solu-ble form. These soluble HLA (sHLA) molecules have an immunomodulatory function. We investigated whether natural sHLA in donor serum can neutralize donor-specific HLA alloantibodies (DSAs) in recipient serum.MethodsNeutralizing effects of donor serum on DSAs in recipient serum were measured using inhibition assay principle of flow cytometric crossmatch (FCXM), performed using sera from 143 kidney transplant recipients and their donors. The adding of donor serum to recipient serum yielded lower mean fluorescence intensity (MFI) ratios (test/control) than when diluent was added [Roswell Park Memorial Institute (RPMI) or third-party serum], which was presumed to be caused by the neutralizing effects of sHLA.ResultsIn the recipient group with class I DSAs alone (N=14), donor serum addition to recipient serum resulted in lower T cell MFI ratios [2.25 (1.31‒32.51)] than those observed on RPMI addition [3.04 (1.33‒125.39), P<0.05]. In the recipient group with class II DSAs alone (N=27), donor serum addition showed no significant difference in B cell MFI ratios [5.03 (1.41‒103.53)] compared to diluent addition: RPMI [4.50 (1.34‒145.98)] or third-party serum [5.08 (1.44‒138.47)], P>0.05 for both.ConclusionUsing inhibition FCXM, we verified that natural sHLA class I in donor serum neutralizes DSAs in recipient serum. However, no neutralizing effects of sHLA class II were revealed in this study. These potentially beneficial effects of sHLA infused via blood-derived prod-ucts should be considered when desensitizing highly HLA-sensitized patients.

호중구 기능의 노화에 따른 감소와 간편한 유세포분석법 고안

원동일,허운보,서장수 대한진단검사의학회 2005 Annals of Laboratory Medicine Vol.25 No.4

Background : We intended to confirm a decline in neutrophil function with aging and to devise a simple neutrophil function test protocol for use in a clinical setting. Reversely, the reliability of this protocol was to be verified by detectability of a decline in neutrophil function with aging. Methods : Whole blood samples from young (thirties, N=32) and old (sixties, N=32) healthy subjects were incubated with the 7-aminoactinomycin D stained Escherichia coli. The mixture was stained by dihydrorhodamine 123 as an oxidative probe. Two kinds of fluorescence were measured by flow cytometry. Results : Phagocytosis was declined with aging as indicated by a decrease in the percentage (form 28.2±9.5% to 21.9±10.9%, P<0.05) and the mean fluorescence intensity (MFI) ratio (from 1.67±0.27 to 1.51±0.27, P<0.05). Oxidative burst had a trend toward a decrease with aging, but the differences were not significant (percentage: from 35.3±13.2% to 32.1±14.1%, P=0.36; MFI ratio: from 5.26±3.23 to 5.08±3.55, P=0.84). Conclusions : The devised protocol in this study could detect a significant decline in neutrophil function with aging, and this protocol may be useful for the assessment of neutrophil function in a clinical setting 서론 : 본 연구에서는 노화에 따른 호중구 기능의 감소를 평가하고, 이를 위하여 실제 검사실에서 간편히 사용할 수 있는 호중구검사 술식을 고안하였으며, 이 술식의 신뢰성을 노화에 따른 호중구 기능의 감소를 검출할 수 있는지 여부로 검증하고자 하였다.방법 : 30대 건강한 32명의 젊은이군과 60대 건강한 32명의 노인군을 대상으로, 자극으로서 7-aminoactinomycin D 염색Es-cherichia coli를 사용하여 피검자의 전혈과 섞어 항온 후, oxida-tive probe로서 dihydrorhodamine 123을 사용하여 반응시킨 후,두 형광을 유세포분석법으로 측정하였다. 결과 : 포식작용은 노화에 따라 백분율(28.2± 9.5%에서 21.9±10.9%로, P<0.05)과 mean fluorescence intensity (MFI) ratio(1.67± 0.27%에서 1.51± 0.27%로, P<0.05) 분석 모두에서 유의하게 감소하였다. Oxidative burst는 노화에 따라 감소하는 경향이 있었으나, 그 차이가 유의하지 않았다(백분율: 35.3± 13.2%에서 32.1± 14.1%로, P=0.34; MFI ratio: 5.26 ± 3.23에서 5.08±3.55로, P=0.84). 결론 : 본 연구에서 고안한 술식으로 호중구 포식작용의 노화에 따른 유의한 감소를 검출할 수 있었고, 본 술식은 임상 검사실에서 환자를 대상으로 호중구 기능을 평가하는데 유용할 것으로 생각된다.

HLA 형별검사에서 상용 항혈청의 반응성

원동일,송재우,박기일,김현숙 대한임상병리학회 2000 대한임상병리학회지 Vol.20 No.5

Neutrophil oxidative burst as a diagnostic indicator of IgG-mediated anaphylaxis

원동일,김수정,이은희 대한혈액학회 2018 Blood Research Vol.53 No.4

BackgroundIgG-mediated anaphylaxis occurs after infusion of certain monoclonal antibody-based therapeutics. New in vitro tests are urgently needed to diagnose such reactions. We inves-tigated whether allergens trigger neutrophil oxidative burst (OB) and if neutrophil OB occurs due to allergen-specific IgG (sIgG).MethodsNeutrophil OB was measured by dihydrorhodamine 123 flow cytometry using a leuko-cyte suspension spiked with a very small patch of the allergen crude extract, Dermatophagoides farinae (Der f). The mean fluorescence intensity ratio of stimulated to unstimulated samples was calculated as the neutrophil oxidative index (NOI).ResultsThe Der f-specific NOI (Der f-sNOI) showed a time-dependent increase after Der f extract addition. At 15 min activation, higher Der f-sIgG levels were associated with lower Der f-sNOI values in 31 subjects (P<0.05). This inverse relationship occurs due to the initial blocking effect of free Der f-sIgG. Additionally, neutrophil OB was nearly absent (Der f-sNOI of -1) in two cases: a subject with undetectable Der f-sIgG levels and washed leuko-cyte suspensions deprived of Der f-sIgG.ConclusionAllergens can trigger neutrophil OB via preexisting allergen-sIgG. Neutrophil OB can be easily measured in a leukocyte suspension spiked with the allergen. This assay can be used to diagnose IgG-mediated anaphylaxis.