한국산 관박쥐 (Rhinolophus ferrumequinum korai) 정세관상피의 주기적 변화

오영근,Oh, Yung-Keun 한국현미경학회 1979 Applied microscopy Vol.9 No.1

The cyclic changes of the epithelium of seminiferous tubule in the Korean greater horseshoe bat (Rhinolophus ferrumequinum korai) were investigated by means of the light and electron microscopic observations and the following results were obtained. 1) The spermatogenic function of the horseshoe bats captured in September was moderate but considerable amount of the ultrastructural findings were obtained in both the spermatocytogenic and the spermiogenic phases. 2) The spermatogenic function of the horseshoe bats captured in December was depressed representing a resting status. 3) The light and electron microscopic findings suggest that the epithelium of seminiferous tubule varies cyclically, which is closely related to their peculiar way of reproductive habit during hibernation.

Comparative Study on Components and Activities of Sperm Head Plasma Membrane in Active and Hibernating Animals

오영근,안병식,최인호,정노팔,신형철,곽병주,Oh, Yung-Keun,Ahn, Byung-Sik,Choi, In-Ho,Jung, Noh-Pal,Shin, Hyung-Cheul,Kwak, Byoung-Ju Korean Society of Electron Microscopy 1999 Applied microscopy Vol.29 No.2

북부 온대지방에 서식하는 박쥐는 그 대부분이 동면을하며, 그 생식유형은 특이하여 가을에 교미하여 사정된 정자는 자성생식도내에 긴 동면기간 동안 저장되어 있는 것으로 알려져 있다(예: 한국큰관박쥐). 환언하면 저장되어 있던 정자는 이듬해 봄에 배란되는 난자와 수정하여 초여름에 출산하게 된다. 본 연구는 월동하는 정자 두부 Plasma membrane의 성분과 활성 등 형태적 및 기능적 특성을 관찰 분석함으로써, 인공임신율을 높일 수 있는 보다 효과적인 한냉온도 정자저장방법을 모색하기 위하여 시도되었다. 동면하는 한국큰관박쥐와 햄스타 및 비동면동물(마우스)의 정자 Plasma membrane이, 실온과 한냉온도(박쥐-동면온도)에서, 생존율, 첨체반응을, 단백질분포, 능동수송에 관여되는 효소$(Na^+-K^+-ATPase)$의 활성 및 주사전자현미경적 조직화학상을 분석하였다. 본 연구에서 얻은 실험결과에 의거하면, 동면동물인 한국큰관박쥐와 햄스타 및 비동면동물인 마우스 정자의 생존율과 첨체반응율은, 실온과 한냉(박쥐-동면)온도간에 의의있는 차이를 발견할 수 없었고, 단백질 분포와 $Na^+-K^+-ATPase$ 효소활성 및 주사전자현미경적 조직화학적 소견에 있어서도 두 온도간에 의의있는 차이는 없었다. 이와 같이 실온과 한냉온도 간에 형태적 기능적 차이가 없다고 하는 사실은, 동면동물이든 비동면동물이든 Spermatozoa plasma membrane이 동면중 또는 동면 이후에 안정적인 수정을 보장해 주는 형태적 및 기능적 보호구조임을 시사해 준다. Fertilization pattern of north temperate bats is known to be unique for their sperm storage in the female reproductive tract during hibernation (e.g. Korean greater horseshoe bats). They copulate in fall but their ejaculated spermatozoa survive until the next spring. In another words they can persist to survive during long hibernation under the cold condition $(8\sim13^{\circ}C)$ and are to be fertilized with the ovum ovulated in the next spring, so called delayed fertilization. The present study was designed to observe morphological and functional changes of spermatozoa plasma membrane of the bats, hamsters which are hibernators, and mice which are non-hibernators in the room and the cold (bat-hibernation) temperatures and to confirm influence of the temperature on spermatozoa; survival rate, acrosome reaction rate, protein distribution, $Na^+-K^+-ATPase$ activities and scanning electron microscopic histochemistry. Based on the experimental results obtained in the present study, there were no significant morphological and functional differences in the spermatozoa plasma membrane in both the room and cold (bat-hibernation) temperatures and such an absence of difference suggests that the spermatozoa plasma membrane might play a pertinent role as a protector for consistent fertilization during and after hibernation.

In Vitro 고삼투압이 정자 원형질막의 Protein Tyrosine Phosphorylation에 미치는 영향

오영근(Yung-Keun Oh),장재호(Jae-Ho Chang),최인호(In-ho Choi),정노팔(Noh-Pal Jung),신형철(Hyung-Cheul Shin),곽병주(Byoung-Ju Kwak) 대한의생명과학회 2000 Biomedical Science Letters Vol.6 No.4

정자의 원형질막은 삼투압에 의해서 영향을 받는다고 보고되고 있다. 이중 세포막내 분자구조의 변화 특히 막지질 구조의 변화와 동반되는 이온채널의 변화 그리고 Ca²?과 HCO?₃의 유동성과도 밀접한 관련이 있는 것으로 보고되고 있다. 지금까지의 연구보고에 의하면, 정자의 첨체반응 (acrosome reaction)이 일어날 경우 protein tyrosine phosphorylation이 증가되는데 이것은 cAMP, protein kinase A 등을 통하여 작용되는 것으로 보고되고 있다. 막의 지질변화를 유도하는 물질로 일종의 sterol acceptor인 BSA가 알려져 있는 바, 실제로 BSA가 막지질 성분에 미치는 영향을 관찰한 결과 cholesterol이 유출되고 이온 등의 유동성 변화가 일어나, 이 유동성 변화가 정자의 adenylyl cyclase를 활성화시켜 cAMP를 증가시키고, PKA가 활성화되어 결과적으로 protein tyrosine phosphorylation이 유도된다고 보는 것이다. 첨체반응과 protein tyrosine phosphorylation과는 밀접한 관계가 있는 것으로 사료되고 있다. 본 연구는 정자 원형질막에서 cholesterol이 유출되어 protein tyrosine phosphorylation이 유도될 때, BSA와 같은 sterol acceptor가 작용할 것이라는 전제하에, 고삼투압 하에서 탈수로 인해 원형질막이 위축되더라도 sterol acceptor가 존재한다면 막지질 성분의 구조적 변화가 억제될 수 있을 것이라는 가설을 설정하였다. 실험결과, 저온 및 고삼투압 하에서 정자운동은 감소되지만 원형질막의 구조적 변화는 없고, 삼투압에 대한 반응정도는 원형질막을 통한 수분이동과 세포용적 변화에 따라 비례적으로 일어난다고 하는 사실이 발견하였다. 이 결과는 정자보존에 있어서 저온변화에 영향을 미치는 여러 인자들 특히 protein tyrosine phosphorylation의 증가와 밀접한 관계가 있음을 시시해 준다. 도한 sterol acceptor로 알려진 BSA는 삼투압이 변화되더라도 역시 중요한 인자로 작용할 수 있음을 알 수 있었으며, 특히 고삼투압으로의 변화는 cAMP와 protein kinase A를 거치는 신호전달과정에 있어서 중요한 요인이라는 사실을 확인할 수 있었다. It has been reported that plasma membrane activity of the spermatozoa may be susceptible to be influenced by extracellular osmolality and such membranous changes involve intracellular molecular changes, special regard to the structure of membranous lipids, and the accompanying ion-channel of which are closely related with their fluidity of Ca²? and HCO?₃. It is of common recognition that a certain kind of sterol acceptor player an important to induce lipid fluctuation of the sperm plasma membrane which have been influenced by BSA administration and came in effect to outflow of cholesterol from the spermatozoa and resulted in changes of ionic fluidity to facilitate adenylyl cyclase, and to induce protein tyrosine phosphorylation by increase of cAMP and activation of PKA. Thus it seems likely that an augmentation of the acrosomal reaction is closely related with protein tyrosine phosphorylation. The following experimental results were obtained in the present study; Under the high osmolality conditions, the spermatozoa motility declined significantly and the structural change of the plasma membrane diminished to confirm that the response degrees to the osmolality depended upon the water transfer volume through the plasma membrane and the changes of cellular volume. Those experimental results suggest that a physiological parameter such as low temperature condition played an important role for presentation of spermatozoa and that inducement of spermatozoa activation for reinforcement of protein tyrosine phosphorylation. On the other hand, it seemed likely that the BSA administration as one of sterol acceptors might represent a key role also under the high osmolality condition and their result also suggests that osmolality change, special regard to high osmolality condition may play an important role also in the processes of signal transmission.

Effect of Extracellular Ca<SUP>2+</SUP> and Ca<SUP>2+</SUP>-ATPase on the Acrosome Reaction of Spermatozoa

Yung-Keun Oh(오영근),Jae-Ho Chang(장재호),In-Ho Choi(최인호),Noh-Pal Jung(정노팔),Hyung-Cheul Shin(신형철),Byoung-Ju Kwak(곽병주) 대한의생명과학회 1998 Biomedical Science Letters Vol.4 No.1

세포내, 외 Ca²? 농도구배 유지에는 Ca²?ATPase와 Ca²?-Na? exachangers가 주요한 기능을 한다고 알려져 있는데 특히 Ca²?-ATPase의 기능에 대해 많은 연구가 행해지고 있다. Ca²?-ATPase는 체세포에서 세포막에 위치하고 있으며 Ca²?을 세포외부로 배출하는 기능을 함으로써 세포내부의 Ca²?농도를 낮게 유지할 수 있도록 하는 기능을 담당하고 있다. 이러한 Ca²?-ATPase는 포유동물의 정자에도 존재하고 있지만 그 기능에 대해서는 아직 많은 설명이 되어있지 않다. 본 연구에서 정자가 수정을 하기위한 기능적인 능력이 Ca²? 농도와 관련된 변화와 얼마나 연관되어 있는가를 규명하고, 이러한 Ca²?농도 조절이 원형질막의 중요인자인 Ca²?-ATPase와는 어떠한 연관성이 있는가를 알기위해 시도한 결과, Ca²?-ATPase는 세포내, 외 Ca²?의 농도구배를 조절함으로써 세포내 Ca²?의 농도를 증가시켜 정자가 수정능 획득과정으로 빨리 전환하도록 유도하고 첨체반응에 중요한 역할을 하는 것으로 판단되며, 세포외 Ca²?농도가 높게 유지될 경우에도 정자의 첨체반응이 유도됨으로써 난자와 용이하게 수정을 할 수 있는 생리적 환경이 제공될수 있다고 사료된다. This study has been designed in order to examine a physiological role of Ca²? which has been known as an essential factor for capacitation, to confirm whether the enzyme activity of Ca²?-ATPase on capacitation is important or not, and to clarify relationship between various levels of the Ca²? concentration and Ca²?-ATPase which has been known to be an important factor of the plasma membranes. In the present study applying quercetin, a Ca²?-ATPase inhibitor, the enzymatic effect of Ca²?-ATPase on capacitation was found to be remarkable: a significant increase of the transition from the original type (type A) to the type B and the type AR of the spermatozoa. This finding suggests that Ca²?-ATPase plays an important role in the efflux and the influx of the Ca²? which has been known to be an essential factor the capacitation and acrosome reaction, and that the inhibitory action of the Ca²?-ATPase might be a prerequsite step toward the acrosome reaction. The conclusion reached can be deduced as follows: increment of the intracelluar Ca²? concentration occurred by controlling the slope of Ca²? concentration through Ca²?-ATPase activities in both the intra- and extracelluar fluid may be an important procedure for capacitation and acrosome reaction, and ultimately for fertilization of the spermatozoa and the ova.

동면돌입과 전간발작의 상호관련성에 관한 연구

오영근(Yung Keun Oh),이서울(Seoul Lee) 대한의생명과학회 1999 Biomedical Science Letters Vol.5 No.2

냉동생물학 연구분야 중 동면의 기전은 미래의 우주과학과 저온생물학이 풀어야 될 중요한 과제로서, 박쥐를 비롯한 동면동물을 사용하는 응용과학에서 가장 주목을 받아 오고 있다. 동면 동물의 동면돌입현상이 체온하강과 함께 뇌전도상 전간발작 (epileptic seizure)을 유도시킨다는 가설을 검증하기 위하여 여러 가지 박쥐를 포함하는 동면동물을 대상으로 박쥐의 정상 동면돌입과정과 전간발작유발인자인 tetrahydrocannabinol (THC), pentylenetetrazol (metrazol), intermittent light stimulation (ILS)이 박쥐의 체온 (Tb), 심박률 (HR), 뇌전도 (EEG), 뇌영상 (brain mapping) 등에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 정상 동면돌입과정에 있어서는 안주애기박쥐는 1~2개의 고평부를 형성하지만 대체로 2시간 후에 동면에 안정 (심박률 15회/분)되었고 작은갈색박쥐는 2시간 30분에 동면온도에서 안정되었다. THC는 햄스터의 체온을 감소시켰고, pentylenetetrazol (metrazol)의 유의한 체온하강효과는 볼 수 없었으나, ILS는 긴가락박쥐, 쇠박쥐의 체온과 심박률을 하강시켰으며, 문둥이박쥐는 정상적으로 동면돌입시 뇌전도상 epileptic seizure시 나타나는 뇌파 (3 spikes and wave/sec)를 나타내었으며, 사람의 경우 ILS 자극 (Intensity 4~8, 20 flashes/sec)을 받은 9명 중 1명에서 epileptic seizure시의 EEG상의 뇌영상 (brain map) (우측 후두엽의 일부만이 활성)으로 추측되는 소견을 볼 수 있었다. 이상의 실험결과는, 북부 온대지방의 동면동물인 박쥐와 햄스터의 경우 동면돌입과 체온하강 및 전간발작과 상당한 관련성이 있음을 암시한다고 사료된다. There are considerable interests in bat biology for investigating hibernation mechanism, in special regard to a hypothesis that the entry into hibernation is closely related with epileptic fit (petit mal) accompanying falling of body temperature, which is characterized by 3 spikes and wave/sec formation in electroencephalograph (EEG). This study was designed in order to examine physiological parameters (body temperature, heart rate, electroencephalograph and brain mapping) during normal patterns of the entry into hibernation and the hibernation period, and to observe effects of epileptogenic agents such as THC, Metrazol, and ILS on the physiological parameters. Based on the experimental results the entry into some hibernation seems to be related with epileptic fit, and therefore it is deduced that north temperate bats and the hamsters might be induced into hibernation by epileptogenic factors (pentylenetetrazol, THC and ILS etc) accompanying falling of body temperature and unique EEG and brain mapping.

한국 관박쥐의 정자발생과 자성생식관내의 정자운명에 관한 연구

김은주,오영근,Kim, Eun-Ju,Oh, Yung-Keun 한국현미경학회 1991 Applied microscopy Vol.21 No.2

The present study was designed in order to clarify ultrastructural characteristies of the spermatogenetic process and to examine survival state of the spermatozoa introduced into the female reproductive tract after autumnal coitus in the Korean greater horseshoe bats(Rhinolophus ferrumeguinum korai). The general morphological characteristics of spermatogenesis were principally similar to those of the other mammalian species; acrosomal formation, flagellar formation, middle piece formation and concentration of the spermatozoan nucleus. The spermatozoa introduced into the vagina were found to be dead forming a vaginal plug, the opaque central core of which consisted of trapped dead spermatozoa. Some spermatozoa introduced into the uterus were observed to be phagocytized by the polymorphonuclear leucocytes infiltrated into the uterine glandular lumen. The oviductal epithelium, consisted of ciliated and secretory cells; the luminal surface of secretory cells were covered by a number of microvilli with well developed glycocalyx, suggesting a close relationship to nutrient (e.g. glycogen) supply for the spermatozoa during hibernation.

A Comparative Study on Spermatozoan Maturation in the Hibernating Animals

Jae-Ho Chang(장재호),Yung-Keun Oh(오영근),In-Ho Choi(최인호),Noh-Pal Jung(정노팔),Hyung-Cheul Shin(신형철) 대한의생명과학회 1997 Biomedical Science Letters Vol.3 No.1

대부분의 포유동물들에서 수정전에 정자의 첨체반응이 일어난다고 알려져 있으며 첨체반응에서 Ca²?이 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 단백질 또한 정자의 생리적 역할에 중요한 요소로 작용한다고 보고되고 있다. 본 실험에서는 동면동물의 부정소에서 정자성숙과정을 비교 관찰하고 성숙과정에 있어 Ca²? 농도와의 연관성을 규명하고 정자성숙 전, 후에 정자성숙에 영향을 미치는 Mg²?? ATPase, lactate dehydrogenase의 작용을 비교, 분석하였다. 그 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 대표적 동면동물인 박쥐의 경우 활동기에 다른 동면동물인 햄스터, 항온동물인 생쥐와 만차가지로 부정소미에서 정자성숙과정을 거쳤으며 교미시 대부분의 정자는 부정소미에서 더욱 활발한 운동성을 보였으며 부정소미 밖에서 수정능획득 과정을 거치는 것으로 관찰되었다. 그러나 동면동물의 환경조건 특히 온도 변화가 부정소미에서의 정자성숙과정에 영향을 주는지에 대해서는 더 자세한 연구가 필요하다고 사료된다. Acrosome reaction usually occures just before fertilization in most mammals, and it has been known that Ca2? plays an important role in the acrosome reaction and albumin also known as a critical factor for spermatozoan activities. The present study has been designed in order to observe maturing processes of the spermatozoa occurred in the ductus epididymidis and to clarify the relationships of Ca2? concentrations with those processes, and to compare the enzymatic activities of ATPase and the lactate dehydrogenase of the spermatozoa in accordance with time before and after the spermatozoan maturation. From the results, we can confirm that most of the bat spermatozoa come to maturity within the epididymal cauda and may pass through capacitation outside the cauda. However it is expected to be studied that the fluctuation of spermatogenic activity depending on temperature changes and their relationships with the ductus epididymidis and their mutual influences.

동면돌입과 전간발작의 상호관련성에 관한 연구

이서울,오영근 THE KOREAN SOCIETY FOR BIOMEDICAL LABORATORY SCINE 1999 Journal of biomedical laboratory sciences Vol.5 No.2

냉동생물학 연구분야 중 동면의 기전은 미래의 우주과학과 저온생물학이 풀어야 될 중요한 과제로서, 박쥐를 비롯한 동면동물을 사용하는 응용과학에서 가장 주목을 받아 오고 있다. 동면동물의 동면돌입현상이 체온하강과 함께 뇌전도상 전간발작 (epileptic seizure)을 유도시킨다는 가설을 검증하기 위하여 여러 가지 박쥐를 포함하는 동면동물을 대상으로 박쥐의 정상 동면돌입과정과 전간발작유발인자인 tetrahydrocannabinol(THC), pentylenetetrazol(metrazol), intermittent light stimulation (ILS)이 박쥐의 체온(Tb), 심박률 (HR), 뇌전도(EEG), 뇌영상(brain mapping) 등에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 정상 동면돌입과정에 있어서는 안주애기박쥐는 1∼2개의 고평부를 형성하지만 대체로 2시간후에 동면에 안정(심박률 15회/분)되었고 작은갈색박쥐는 2시간 30분에 동면온도에서 안정되었다. THC는 햄스터의 체온을 감소시켰고, pentylenetetrazol (metrazol)의 유의한 체온하강효과는 볼 수 없었으나, ILS는 긴가락박쥐, 쇠박쥐의 체온과 심박률을 하강시켰으며, 문둥이박쥐는 정상적으로 동면돌입시 뇌전도상 epileptic seizure시 나타나는 뇌파 (3 spikes and wave/sec)를 나타내었으며, 사람의 경우 ILS 자극 (Intensity 4∼8, 20 flashes/sec)을 받은 9명 중 1명에서 epileptic seizure시의 EEG상의 뇌영상 (brain map) (우측 후두엽의 일부만이 활성)으로 추측되는 소견을 볼 수 있었다 이상의 실험결과는, 북부 온대지방의 동면동물인 박쥐와 햄스터의 경우 동면돌입과 체온하강 및 전간발작과 상당한 관련성이 있음을 암시한다고 사료된다. There are considerable interests in bat biology for investigating hibernation mechanism, in special regard to a hypothesis that the entry into hibernation is closely related with epileptic fit(petit mal) accompanying falling of body temperature, which is characterized by 3 spikes and wave/sec formation in electroencephalograph (EEG). This study was designed in order to examine physiological parameters (body temperature, heart rate, electroencephalograph and brain mapping) during normal patterns of the entry into hibernation and the hibernation period, and to observe effects of epileptogenic agents such as THC, Metrazol, and ILS on the physiological parameters. Based on the experimental results the entry into some hibernation seems to be related with epileptic fit, and therefore it is deduced that north temperate bats and the hamsters might be induced into hibernation by epileptogenic factors (pentylenetetrazol, THC and ILS etc) accompanying falling of body temperature and unique EEG and brain mapping.

Chloramphenicol이 핵산합성에 미치는 영향에 관한 전자현미경 자기방사법적 연구

오영근 최신의학사 1970 最新醫學 Vol.13 No.10

The mechanism of bone marrow depression from the chloramphenicol administration remains unknown. Yunis and Harrington (1960) reported that in the experiment on patterns of inhibition by chloramphenicol of nucleic acid synthesis only at high concentrations of the drug was there a distinct inhibition effect on the uptake of labeled precursors into desoxyribose nucleic acid and ribose nucleic acid of normal bone marrow and leukemic leukocytes by means of biochemical analysis. The present study was undertaken to compare the H3-thymidine incorporation of bone marrow of bone marrow of rabbits by means of light and electron microscopic observations using autoradiography and to contribute to understand the depression mechanism caused by chloramphenicol. Chloramphenicol (250 mg/kg/day) was injected intramuscularly to the young. rabbits for fourrn days. Day after the last injection of the drug, H3-thymidine (1 pC/Gm. of body weight) was intradritoneally injected to the animals and one hour later the rabbits were killed and bone marrow was removed from the femur bead. Preparation of the light microscopic autoradiographs by dipping sections in fluid emulsion (Nuclear track emulsion, NTB-3) was carried out according to the techniques described by Messier and Leblond (1957) with minor modification. The electron microscope autoradiographic specimens were prepared by means of the technique using glass slides by Salpeter and Bachmann (1964). In the light and electron microscopic observations, chloramphenicol was found to affect hemopoietic tissues and there were remarkable cytoplasmic changes of the marrow cells in the rabbit as cytoplasic vacuolaization, changes of nuclei. In the light microscopic autoradiographs, the percentage of H3-labeled cells in the erythroid and myeloid groups was not altered from control values while there was an increase in the mean grain count per labeled cell of the erythroid cells. This indicates that active erythroid cells may be in need of larger pool size of H3-thymidine for reserve accumulation than those of the myeloid cells. Quantitatively it seems that a number of the silver grains are associated with nuclei of the erythroid and myeloid cells, and also associated with ergastoplasm including the surrounding cytoplasmic matrix. The intra-granular labeling of both the neutrophilic myelocyte and the eosinophilic myelocyte was also observed. The technical difficulties on the electron microscope autoradiography was discussed as well in view point of initial coupling autoradiography with electron microscopy.

In Vitro 고삼투압이 정자 원형질막의 Protein Tyrosine Phosphorylation에 미치는 영향

오영근,장재호,최인호,정노팔,신형철,곽병주 대한의생명과학회 2000 Journal of biomedical laboratory sciences Vol.6 No.4

정자의 원형질막은 삼투압에 의해서 영향을 받는다고 보고되고 있다. 이중 세포막내 분자구조의 변화 특히 막지질 구조의 변화와 동반되는 이온채널의 변화 그리고 Ca2+과 HCO-3의 유동성과도 밀접한 관련이 있는 것으로 보고되고 있다. 지금까지의 연구보고에 의하면, 정자의 첨체반응 (acrosome reaction)이 일어날 경우 protein tyrosine phosphorylation이 증가되는데 이것은 cAMP, protein kinase A 등을 통하여 작용되는 것으로 보고되고 있다. 막의 지질변화를 유도하는 물질로 일종의 sterol acceptor인 BSA가 알려져 있는 바, 실제로 BSA가 막지질 성분에 미치는 영향을 관찰한 결과 cholesterol이 유출되고 이온 등의 유동성 변화가 일어나, 이 유동성 변화가 정자의 adenylyl cyclase를 활성화시켜 cAMP를 증가시키고, PKA가 활성화되어 결과적으로 Protein tyosine phosphorycation이 유도된다고 보는 것이다. 침체반응과 protein tyrosine phosphorylation과는 밀접한 관계가 있는 것으로 사료되고 있다. 본 연구는 정자 원형질막에서 cholesterol이 유출되어 protein tyrosine phosphorylation이 유도될 때, BSA와 같은 sterol acceptor가 작용할 것이라는 전제하에, 고삼투압 하에서 탈수로 인해 원형질막이 위축되더라도 sterol acceptor가 존재한다면 막지질 성분의 구조적 변화가 억제 될 수 있을 것이라는 가설을 설정하였다. 실험결과, 저온 및 고삼투압 하에서 정자운동은 감소되지만 원형질막의 구조적 변화는 없고, 삼투압에 대한 반응정도는 원형질막을 통한 수분이동과 세포용적 변화에 따라 비례적으로 일어난다고 하는 사실을 발견하였다. 이 결과는 정자보존에 있어서 저온변화에 영향을 미치는 여러 인자들 특히 protein fgrosine phosphorylation의 증가와 밀접한 관계가 있음을 시시해 준다. 또한 sterol acceptor로 알려진 BSA는 삼투압이 변화되더라도 역시 중요한 인자로 작용할 수 있음을 알 수 있었으며, 특히 고삼투압으로의 변화는 cAMP와 protein kiname A를 거치는 신호전달과정에 있어서 중요한 요인이라는 사실을 확인할 수 있었다. It has been reported that plasma membrane activity of the spermatozoa may be susceptible to be influenced by extracellular osmolality and such membranous changes involve intracellular molecular changes, special regard to the structure of membranous lipids, and the accompanying ion-channel of which are closely related with their fluidity of Ca2+ and HCO-3. It is of common recognition that a certain kind of sterol acceptor player an important to induce lipid fluctuation of the sperm plasma membrane which have been influenced by BSA administration and came in effect to outflow of cholesterol from the spermatozoa and resulted in changes of ionic fluidity to facilitate adenylyl cyclase, and to induce protein tyrosine phosphorylation by increase of cAMP and activation of PKA. Thus it seems likely that an augmentation of the acrosomal reaction is closely related with protein tyrosine phosphorylation. The following experimental results were obtained in the present study; Under the high osmolality conditions, the spermatozoa motility declined significantly and the structural change of the plasma membrane diminished to confirm that the response degrees to the osmolality depended upon the water transfer volume through the plasma membrane and the changes of cellular volume. Those experimental results suggest that a physiological parameter such as low temperature condition played an important role for presentation of spermatozoa and that inducement of spermatozoa activation for reinforcement of protein tyrosine phosphorylation. On the other hand, it seemed likely that the BSA administration as one of sterol acceptors might represent a key role also under the high osmolality condition and their result also suggests that osmolality change, special regard to high osmolality condition may play an important role also in the processes of signal transmission