염기서열 분석을 이용한 HBV YMDD 돌연변이 검출

손용학,차충환,장성수,이한주,이관제,신은순,오흥범 대한진단검사의학회 2003 Annals of Laboratory Medicine Vol.23 No.4

배경 : B형간염의 치료제인 라미부딘을 장기 투약하는 경우YMDD motif 변이형이 발생하여 약제 내성이 발생한다고 알려져 있다. 따라서 라미부딘 치료로 HBV DNA가 현저히 감소했다가 다시 매우 높은 수준으로 검출되는 경우는 YMDD 변이형의 출현을 의심할 수 있다. 라미부딘 내성시 사용할 수 있는adefovir 약제가 미국 식품의약청에 의해 허가되어 향후 YMDDmotif 변이 검사가 필요할 것이 예상된다. 방법 : 라미부딘을 투여하면서 DNA 교잡방법으로 양성→음성→양성 변화를 보인 21명의 환자를 대상으로 하였다. Accu-TyperTM HBV YMDD typing Kit (DNA Link, Seoul, Korea)를 사용하여 HBV 유전체부위 중 YMDD motif 주변의 잘 보존된 부위를 중합효소연쇄반응으로 증폭하고, 증폭된 산물에 대하여 DNA자동분석기(ABI PRISM 3700 DNA Analyzer)를 이용하여 서열을 분석하고 변이형의 유무를 확인하였다.결과 : 총 21명 중 치료 시작 시점의 검체 확보가 가능했던 17개의 검체에서는 모두 정상적인 YMDD형이 관찰되었다. DNA교잡방법으로 음성을 보였던 21개 검체 중 20개 검체에서 DNA가 증폭되었고 20개 중 3개(15%)에서 변이형이 관찰되었으며양성으로 전환된 이후에도 동일한 변이형이 계속 관찰되었다(YIDD 2예, YVDD 1예). 음성에서 양성으로 전환을 보였던 21개 검체 중 13개(62%) 검체에서 변이형이 관찰되었다(YIDD 8예, YVDD 5예).

HBV YMDD 돌연변이 검출을 위한 염기서열분석법과 RestrictionFragmentMassPolymorphism 법의 비교

손용학,유수진,양진혁,황상현,홍선표,오흥범 대한진단검사의학회 2004 Annals of Laboratory Medicine Vol.24 No.5

Background : YMDD motif mutants of the hepatitis B virus (HBV) emerged in some chronic hepatitis B patients after prolonged lamivudine treatment. Recently a novel genotyping assay, the restriction fragment mass polymorphism (RFMP) method, was introduced for the detection of YMDD mutations. We compared the performance of the RFMP method with that of sequencing method in chronic hepatitis B patients who had suffered the HBV DNA breakthrough after lamivudine treatment. Methods : Enrolled in this study were 18 chronic hepatitis B patients who experienced the DNA breakthrough after a period during which HBV DNA was undetectable by Hybrid capture II HBV DNA test (Digene Inc., Gaithersburg, MD, USA). Both sequencing and RFMP methods were used to detect YMDD variants in three phases such as before treatment, before breakthrough and after breakthrough. Results : YMDD mutants were detected in 13 samples (72.2%) by both methods after DNA breakthrough. Among them were two samples with a mixed HBV population detected by RFMP. Before breakthrough, the mutants were detected in three samples (16.7%) by sequencing and four (22.2%) by RFMP, showing discrepant results for two samples. The concordance rate between both methods was 92.6%. Conclusions : Both sequencing and RFMP methods were highly concordant except in a few cases, so it is suggested that both methods are appropriate in detecting YMDD mutants. (Korean J Lab Med 2004; 24: 320-6) 배경 : 만성B형 간염 치료제인 라미부딘을 장기 투여시 약제 내성 HBV 변이형의 출현이 나타났으며, 대부분은 YMDD motif에서 일어난다. 최근 국내에서 restriction fragment mass polymor-phism (RFMP)법을 이용한 YMDD 변이형 검출법이 소개되었다. 저자들은 라미부딘 치료를 받은 후 바이러스 breakthrough가 있었던 만성B형 간염 환자들을 대상으로 염기서열분석법과 RFMP법을 이용하여 두 검사법의 유용성을 비교하고자 하였다. 방법 : 라미부딘을 투여하면서 Hybrid capture II HBV DNA test (Digene Inc., Gaithersburg, MD, USA)에서 치료전 양성, 치료 후 음성으로 전환 후 다시 재양성 결과를 보인 18명의 환자를 대상으로 하였다. 각 시기의 검체를 염기서열분석법과 RFMP법으로 YMDD 변이형 유무를 관찰하였다. 결과 : 바이러스 breakthrough 상태에서 두 방법 모두에서 YMDD 변이형 13예(72.2%)가 검출되었으며, RFMP법에서는 2예를 혼합감염 상태로 판독하였다. 바이러스 breakthrough 이전에는 염기서열분석법으로 3예(16.7%), RFMP법으로 4예(22.2%)에서 변이형이 관찰되었는데, RFMP법에서 검출된 변이형 중 2예가 염기서열분석 결과가 달랐다. 54건의 검체에서 두 검사간 일치율은 92.6%이었다. 결론 : 염기서열분석법이나 RFMP법의 결과의 일치도가 높다고 사료되는 바 두 방법 모두 변이형 검출에 적절하다고 사료된다.

항글로블린법을 이용한 Panel Reactive Antibody 검사에서 교차반응군특이성의 동정 경험

손용학,차충환,김명희,고선영,오흥범 대한진단검사의학회 2008 Annals of Laboratory Medicine Vol.28 No.5

Background : Panel reactive antibody (PRA) is to screen and identify HLA antibody. Majority of antibody specificities in high-PRA are directed against cross reactive group (CREG). Thus, this study was to know the advantage of identifying CREG specificity and whether antibody specificities are changed according to CREG classification. Methods : HLA class I antibodies were identified from 159 sera from 108 patients in Asan Medical Center, who had shown more than 5% PRA by anti-human globulin (AHG)-complement-dependent cytotoxicity (CDC). Tail analysis-based computer program was developed to identify specificities, applying both Rodey (R-ABC) and Takemoto (T-ABC) classification. The results were also compared with those obtained when without CREG application (ABC). Results : Among 151 cases in which HLA specificities was identified, the frequency of CREG specificity was 22.5% in R-ABC and 27.2% in T-ABC. Eleven cases showed CREG specificities only in one classification. However, the individual antigen specificities in one hand were all included in the CREG identified in the other hand. CREG specificities in samples with PRA >50% (60%) were more frequently identified than those in samples with PRA ≤50% (9%) (in R-ABC, P<0.0001). Without applying CREG to interpretation, specificity was not identified in 9 cases. Conclusions : Application of CREG enhanced the rate of antibody identification. Antibody specificities of those cases where CREG specificities were different between Rodey and Takemoto classifications were almost the same when compared at the individual antigen level. Therefore, it was thought that it makes no difference to use any one of these two classifications in interpreting PRA. (Korean J Lab Med 2008;28:362-70)

한국인 만성골수성백혈병 환자의 Imatinib (STI-571) 내성 및 BCR-ABL 유전자 돌연변이 검출

손용학,지현숙,박찬정,이규형,서을주 대한혈액학회 2005 Blood Research Vol.40 No.2

배경: BCR-ABL 유전자 재배열로 인해 비정상적으로 활성화된 tyrosine kinase를 목표로 하는 imatinib mesylate는 만성골수성백혈병 환자에서 탁월한 치료효과를 보여주었다. 그러나 일부환자에서 imatinib에 대해 내성을 나타내었으며, BCR-ABL 유전자의 돌연변이가 주요 원인으로 알려지고 있다. 본 연구는 한국인 만성골수성백혈병 환자를 대상으로 imatinib의 내성 빈도를 알아보고 BCR-ABL 유전자의 돌연변이를 확인하고자 하였다. 방법: 울산의대 서울아산병원에서 2002년 1월부터 2003년 8월까지 골수검사 및 세포유전학적 검사가 의뢰된 CML 환자 중 imatinib을 3개월 이상 복용하였던 32명을 대상으로 혈액학적 및 세포유전학적 내성 정도를 알아보았다. 내성을 보였던 환자들을 대상으로 RT- PCR 및 직접염기서열분석법을 이용하여 BCR-ABL kinase domain의 돌연변이를 조사하였다. 결과: 만성기 환자 모두와 가속기 및 급성기 환자의 67%에서 혈액학적 완전관해가 관찰되었고, 추적관찰 동안 4명(만성기 2명, 급성기 2명)이 재발하였다. 만성기 환자의 67%가 세포유전학적 주요관해를 보였고, 이 중 2명은 추적검사에서 세포유전학적 재발을 하였다. 돌연변이 분석 결과 2명에서 BCR-ABL kinase domain의 351번째 아미노산이 치환되는 돌연변이가 관찰되었으며, 여러 차례 보고되었던 M351T와 처음 발견된 M351L이었다.

B형 간염바이러스(HBV) DNA 양성이나 HBV 표면항원 방사선면역측정 음성인 B형 간염 환자의 임상상 및 S 유전자 변이 분석

손용학,오흥범,임영석,고선영,권오중 대한진단검사의학회 2009 Annals of Laboratory Medicine Vol.29 No.3

배경 : B형 간염바이러스(Hepatitis B virus, HBV) 항원(HBsAg) 방사선면역 측정법 음성이면서 HBV DNA 증폭검사상 양 성인 경우의 임상적 상황, S 유전자 변이와 다른 HBsAg 검사법 의 유용성을 알아보고자 하였다. 방법 : HBV DNA정량검사가 의뢰된 환자 중 결과가 양성이면 서 방사선면역측정법에 의한 HBsAg (BNIBT HBsAg Kit, China) 검사상 음성인 16명을 대상으로 하였다. 각 검체에 대해 S 유전 자“a”결정기의 염기서열을 분석하였고 이들의 임상적 특징을 분석하였다. 또한 화학발광면역측정법 (CLIA) 원리를 이용하는 Architect HBsAg kit (Abbott laboratories, USA)로 HBsAg 추가검사를 시행하였다. 결과 : 대상 16명 중 11명에서“a”결정기에 다수의 변이가 관찰 되었다. 이들 11명은 수년 전에 간이식을 받고 B형 간염바이러스 면역글로블린(Hepatitis B immune glubolin, HBIG)과 항바이 러스제제를 투여 중인 환자이었다. G145R 변이가 8명에서 관 찰되었으며, 그 외 G145K, D144G, D144A 등이 흔히 관찰되었 다. 이들 11명 중 9명에서 Architect HBsAg kit으로 HBsAg을 검사하였는데, 8명에서는 양성(3.0 IU/mL 이상, 중간값 69.0 IU/mL) 결과를 보였다. 변이가 관찰되지 않은 나머지 5명 중 4명에서 Architect HBsAg kit으로 추가검사를 시행한 결과 2명에서만 약양성(1 IU/mL 이하)을 보였다. 결론 : HBV DNA 양성/HBsAg RIA 음성은 간이식 후에 HBIG 를 투여받는 환자군에서 주로 발견되었으며 HBIG 도피 변이가 관찰되었다. 이들 증례의 대부분에서 Architect HBsAg kit에 서 양성을 보인 점을 고려할 때 간이식을 많이 시행하는 병원에 서는 RIA 보다는 변이를 더 잘 검출할 수 있으며 낮은 수준의 HBsAg까지 검출할 수 있는 다른 면역검사법을 사용하여 HBs- Ag을 검사하는 것이 권장된다. Background : We investigated hepatitis B virus (HBV) infection cases, who were HBsAg negative by radioimmunoassay (RIA) and HBV DNA positive for their clinical characteristics, the S gene mutation of hepatitis B virus (HBV), and usefulness of other HBsAg immunoassay. Methods : Among the patients requested for HBV DNA quantification, 16 patients positive in HBV DNA but negative in HBsAg RIA (BNIBT HBsAg Kit, China) were enrolled. The “a” determinant of HBV S gene was sequenced and clinical characteristics were reviewed. Additional HBsAg assay was performed using Architect HBsAg kit (Abbott laboratories, USA) employing chemiluminescent immunoassay method. Results : Eleven of the 16 patients showed multiple mutations in the “a” determinant. These patients received liver transplantation several years ago and have been treated with hepatitis B immune globulin (HBIG) and antiviral drugs. G145R mutation was found in 8 patients and G145K, D144G, and D144A were also frequently found. Among 9 of the 11 patients tested for HBsAg by Architect HBs-Ag kit, 8 showed positive results. Among 4 of the remaining 5 patients, only 2 showed weak positive results (≤1 IU/mL) in Architect HBsAg kit. Conclusions : HBV DNA-positive/HBsAg RIA-negative results were mostly observed in the patients treated with HBIG after liver transplantation, in whom HBIG escape mutations were found. Majority of these cases were positive in Architect HBsAg assay, and it is recommended to use other HBsAg immunoassay methods that are more sensitive than RIA in the detection limit as well as in the detection of escape mutant in hospitals performing liver transplantation.

한국인 골수 이형성 증후군 환자들에 대한 FAB 분류와 WHO 분류의 비교 및 WHO 분류의 유효성

손용학,박찬정,서울주,이정희,이제환,이규형,이정신,지현숙 대한진단검사의학회 2003 Annals of Laboratory Medicine Vol.23 No.2

배경 : WHO는 1999년 골수 이형성 증후군에 대한 기존의FAB 분류기준에 수정을 가하여 새로운 분류기준을 제안하였다.본 연구는 예후적인 면에서 새로운 분류기준의 유효성을 알아보고자 하였다.방법 :1989년 8월부터 2001년 6월까지 울산의대 서울아산병원에서 FAB 기준에 따라 골수 이형성 증후군으로 진단된 218명을대상으로 하였다. 이들의 진단당시의 세포형태적, 임상적, 세포유전학적 자료를 수집하였고, 추적관찰 후의 임상적 결과도 후향적으로 확인하였다. 새로운 WHO 분류기준에 따라 재분류하여 예후적인 측면을 비교하였다. 결과 : 기존의 FAB 분류기준에 따라, 218명의 환자들은 각각RA 78명, RARS 17명, RAEB 76명, RAEB-t 38명, CMML9명이었다. WHO 분류기준에 따라 재분류한 결과 RA 24명,RARS 6명, RCMD 51명, RCMD-RS 11명, RAEB-1 42명,RAEB-2 51명, del(5q) syndrome 1명과 unclassifiable 2명이었다. RAEB-t 21명은 급성 골수성 백혈병으로, CMML 9명은골수 이형성 증후군/골수 증식성 질환으로 분류되어 골수 이형성증후군에서 제외되었다. 예후적인 유효성을 살펴본 결과, RA 군과 RCMD 군 사이에 생존기간에 있어서 유의한 차이가 있었다(생존 중앙값, 미결정 vs. 28.4개월, P=0.020). RAEB-1 군과RAEB-2 군 사이에 급성 골수성 백혈병 진행정도(5% vs. 37%,P=0.001)에 유의한 차이를 보였다.

혈장교환술 이후 불완전 관해로 악화된 혈전혈소판감소자색반병 1예

손용학,임춘화,최은혜,이상광 대한수혈학회 2017 大韓輸血學會誌 Vol.28 No.3

Thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) is a rare blood disorder with a mortality rate of over 90% without prompt treatment. It is caused by congenital, idiopathic, or secondary diseases; idiopathic TTP is mainly associated with deficiency of ADAMTS13, a von Willebrand factor cleaving protease or ADAMTS13 inhibitors. The long-term survival rate of TTP has improved since the introduction of therapeutic plasma exchange (TPE), and the therapeutic aims have also been established. However, deciding on the end-point and appropriate treatment method requires careful assessment of clinical conditions of patients. The present study reports a case of a 33-year-old male patient with reduced ADAMTS13 activity and ADAMTS13 inhibitor, who developed symptoms after an early termination of TPE with improved symptoms, which finally improved with retreatment and additionally corticosteroid. We report our case with relevant literature review on TPE in TTP with this case.

국내 환자에서 분리된 B형 간염바이러스의 유전자형 분석

차충환,손용학,장성수,이한주,이관제,신은순,오흥범 대한진단검사의학회 2003 Annals of Laboratory Medicine Vol.23 No.5

배경 : HBV는 현재 7개의 주요 유전자형(A-G)으로 분류되고있으며, 이는 세계적으로 지역적인 분포에 차이가 있다. 유전자형에 따라 HBV 감염 후 자연경과에 차이가 있는 것으로 알려져 있는데 C 유전자형의 경우는 심한 간질환으로 이행확률이 높으며 B유전자형의 경우는 간암으로의 진행확률이 높은 편이다. 상하이,대만, 일본 등의 인근 지역에서 서로 다른 유전자형이 분포됨을 고려할 때, 국내에서도 HBV 유전자형의 차이 여부를 알아 보아 이검사의 필요성을 알아보고자 하였다.방법 : HBV DNA 검사상 양성인 한국인 B형 간염 환자 51명을 대상으로 하였다. 환자의 혈청에서 HBV DNA를 분리한 후AccuTyperTM HBV Genotyping Kit (DNA Link, Seoul,Korea)을 사용하여 Pre-S region 일부를 PCR 증폭하였으며, 증폭된 산물에 대하여 염기서열을 분석한 후 결과를 NCBI 데이터베이스(www.ncbi.nlm.nih.gov)와 계통발생학적으로 비교하여HBV 유전자형을 결정하였다.결과 : 51예 모두(100%)에서 Pre-S 부분을 phylogenetic tree로 분석 동정한 결과 C형 유전자형이 동정되었다.

림프종모양구진증에서 발생한 부정형 미코박테륨 피부 감염 1예

김동하,손용학,이중선,구대원,정경은 대한피부과학회 2016 대한피부과학회지 Vol.54 No.6

한국인 성인남자의 저밀도 지단백 입자 크기 분포

손지은,손용학,전사일,민원기 대한임상건강증진학회 2004 Korean Journal of Health Promotion Vol.4 No.1

Background Among heterogeneous low density lipoprotein(LDL), small dense LDL particles can penetrate vascular intima easier andthey are more susceptible to oxidation in vitro. These general characteristics are thought to make small dense LDLparticles more atherogenic. And small dense LDL is known to be associated with coronary heart disease, but thedistribution of mean LDL particle size is not well described in Koreans.Methods LDL subfraction profiles in 93 Korean adult males were estimated by the LipoPrint LDL System(Quantimetrix Corp.,Redondo Beach, CA, USA). LDL subclass pattern were designated pattern A when mean LDL particle size was greaterthan 268Å, pattern B when it was smaller than 265Å, and pattern I when it was between 265Å and 268Å.Results The mean LDL particle size was 265.1±4.7Åin Korean adult males and the prevalence of pattern A, pattern B, andpattern I were 30.1%, 39.8%, and 30.1%, respectively. Mean LDL particle size showed negative correlation with serumconcentrations of triglyceride(r=-0.667, P〈0.001) and positive correlation with serum concentrations of HDL cholesterol(r=0.479,P〈0.001) but had no significant correlation with the concentrations of cholesterol. -연구배경 저밀도 지단백(Low density lipoprotein; LDL)은 다양한 크기 , 밀도, 조성을 가지는 입자로 혈중에 분포하며 이중 smal dense LDL은 저밀도 지단백 수용체 친화도가 낮고 proteoglycan 친화도가 높아 혈관 내벽을 잘 통과하며 산화에 취약한 것으로 알려져 있다. 이러한 생화학적 특징으로 인해 smal dense LDL은 죽상경화를 잘 일으키는 것으로 보고되어 있고 관상동맥질환 환자에서 증가를 보인다고 알려져 있다 . 하지만 저밀도 지단백 입자의 분포는 한국인에서 잘 알려져 있지 않다 . 본 연구에서는 LipoPrint LDL System을 이용하여 93명(50.1±7.5 세)의 한국인 성인 남자의 저밀도 지단백 입자 크기의 분포를 분석하였다. 방 법 공복 후 채혈한 혈청 검체를 이용하여 LipoPrint LDL System(Quantimetrix Corp., Redondo Beach, CA, USA)으로 저밀도 지단백 아형(subclass; subfraction)을 분석하였고 평균 저밀도 지단백 입자 크기에 따라 저밀도 지단백 표현형을 A형, I (intermediate)형, B형으로 분류하였다. 평균 저밀도 지단백 입자 크기가 268 Å 보다 큰 경우 A형, 265 Å에서 268 Å 사이인 경우 I형, 265 Å 보다 작은 경우 B형으로 분류하였다.결 과 한국인 성인 남자의 평균 저밀도 지단백 입자 크기는 265.1±4.7 Å이었으며 A형, I형, B형의 분포는 각각 30.1%, 30.1%, 39.8%이었다. 그리고 평균 저밀도 지단백 입자 크기는 중성지방 (Triglyceride; TG) 농도에 음의 상관관계 (r=-0.667, P〈0.001)를 보였으며, 고밀도 지단백 콜레스테롤 (High density lipoprotein cholesterol; HDL-C) 농도와는 양의 상관관계 (r=0.479, P〈0.001)를 보였지만, 총콜레스테롤(total cholesterol) 농도와는 상관관계를 보이지 않았다 .