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      • KCI등재

        Comparative Efficacy of Various Formalin Fixatives for Molecular Diagnosis in Pathological Tissues

        이우현,배문환,윤혜진,강인영,구명주,이재왕,전진현 대한의생명과학회 2022 Biomedical Science Letters Vol.28 No.4

        Pathological tissue fixation using formalin has been widely used for histological samples in many hospitals and institutions. In general, formalin fixatives were either manufactured in laboratories or purchased commercially because of the risks and environmental concerns of handling organic compounds. In this study, the efficacy of three kinds of commercially purchased and one laboratory-made formalin fixative was compared in the PCR-based molecular diagnosis using the extracted DNA from formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues. The quality of extracted DNA from FFPE tonsil tissues with four kinds of formalin solutions was evaluated, and PCR for beta-globin gene and microsatellite instabilities (MSI) tests for pentaplex panel markers were performed using the extracted DNA. There was no difference in PCR and MSI tests as molecular diagnoses regardless of the types of formalin used in this study. However, the total amount and average length of double-stranded DNA extracted from FFPE tonsil tissue showed significant differences according to the type of formalin fixative. Optimized formalin fixatives and methods for DNA extraction might be sophisticated to extract good quality DNA from the small size of specific tissue samples. Further studies are needed to select the most effective formalin fixative for histology and molecular pathology using human FFPE tissues.

      • 동결절편검사에서 몰드를 이용한 하향 포매 방법의 유용성

        최원주,지우현,배문환,박욱재,홍성철,염동호,조민호,김태현,오종원,김기현,마상철 대한임상병리사협회 2007 조직세포검사학회 발표자료집 Vol.2007 No.-

        배경: 동결절편검사(Frozen section)는 조직 내 지질의 증명이 필요한 경우, 효소조직의 화학적 검사가 필요한 경우, 형광항체법의 검사가 필요한 경우, 중추신경계 조직의 구성성분의 염색이 필요한 경우나 건(腱,tendon)과 같이 파라핀 박절이 어려운 경우에 선택적으로 이용된다. 이 중 임상에서 가장 높은 빈도와 중요한 의미를 가지는 것으로는 외과적 수술 중 신속한 진단을 하여야 할 경우를 들 수 있다. 대부분의 검사실에서 동결절편검사를 시행하는 경우 전기동결박절기(cryotome)을 사용하는데 기기의 구조상 상향 포매법을 이용하여 검사를 실시한다. 이에 본 연자들은 일부 제한된 검체에 대하여 몰드를 이용한 하향 포매법을 도입하여 시행해 보고 동결절편검사에서의 유용성을 알아보고자 본 연구를 시행하였다. 방법: 삼성서울병원 병리과에 의뢰된 동결절편검체 중 stomach resection margin tissue, lung tissue, solid tissue specimen에 대해서 일반적인 방식과 같이 병소부위를 상향으로 하여 포매하고 chamber에 달린 quick freezing extractor로 눌러 동결시키고, 동일한 검체 군에 대해 알루미늄 몰드를 제작하여, 미리 냉동시킨 뒤 병소부위를 하향하고 포매 후 동결시켰다. 이 후 박절 및 H & E 염색을 시행하여 검경하였다. 검체가 박절이 가능한 상태까지 동결되는데 걸리는 시간과 박절용이성 및 현미경상에서의 판독용이성의 차이를 비교하였다. 결과: 검체를 박절이 가능하도록 충분하게 동결시키는데 소요되는 시간은 하향 포매방법이 상향포매 방법보다 모두 약 1~2분 정도 더 소요되었다. 박절용이성에서는 하향포매 방법에서 더 우수하게 판정되었다. 염색된 표본의 현미경 판독용이성에서는 고형화된 검체에서는 비슷하였으나 stomach resection margin tissue와 lung tissue에서는 하향포매 방식의 박절에서 더 양호한 판정결과를 얻었다. 결론: 위의 결과를 볼 때 박절이 가능하도록 충분하게 동결시키는데 소요되는 시간이 하향포매 방식의 기법 더 걸리는 것은 O.C.T compound의 양이 좀 더 많았기 때문인 것으로 추정되며, 박절용이성에서는 하향포매 방법이 더 용이했던 것은 검체가 O.C.T compound로 충분하게 포매되고 사각형의 일정한 형태로 제작되었기 때문으로 생각된다. 빠른 동결을 위해 quick freezing extractor를 사용하는 경우, 그 무게에 의한 압착으로 점막층과 폐포 등의 관찰이 필요한 일부 검체에서 포매의 위치가 변형되거나 눌림 현상이 생기는 것으로 생각된다. 냉동된 몰드를 이용하여 하향으로 포매하는 경우 조직형태의 변화가 거의 없었으며, quick freezing extractor 없이 얼리는 것 보다는 상대적으로 동결을 신속하게 할 수 있다는 것이다. 동결절편검사와 진단을 시행함에 있어 검체의 특성에 따라서 하향포매 방법을 선택적으로 적절하게 사용한다면 유용할 것으로 생각된다.

      • 학술논문발표 : 병리검사의 질 향상을 위한 검체 처리 Process 개선

        이현섭,우희숙,권혁철,이종찬,배문환,최명섭,송교열,황정철,한승우,김영식 대한임상병리사협회 2014 조직세포검사학회 발표자료집 Vol.2014 No.-

        배 경 : 파라핀 블록으로 제작되는 검체 중에서 외과병리 또는 면역 및 분자병리 검사 시 상태가 불량한 블록을 만나게 되는 경우가 종종 있다. 여러 원인 중 특히 고정 불충분으로 인해 조직이 불량하면 어떤 검사에서도 정확한 결과를 얻지 못하고 있다. 검체가 발생하는 단계부터 파라핀 블록이 만들어지는 단계까지 일상적인 일을 반복적으로 진행하면서 명확한 업무 지침이 있는 부분과 지침이 없는 부분의 업무를 시행하면서 검체 처리가 진행되는 모습을 볼 수 있었다. 병리검사의 질을 향상시키기 위해 이에 본 병리과에서는 검체 처리를 진행하는 과정을 체크하여 각 단계마다 좀 더 세밀한 업무지침의 필요성을 느꼈다. 고정 방법의 개선으로 인한 염색성개선 및 재검사율 감소, 그에 따른 TAT 단축, 진단의 정확성 향상 및 원가절감의 기대효과를 목적으로 검체 처리 Process 개선을 시작하였다. 방 법 : 1. Gross단계의 고정액 점검은 검체 별 고정액의 pH 변화를 점검하여 고정액의 교체주기 정립 2. 검체 별 gross 두께 및 고정시간 정립 3. 병리검사의 진행 단계 및 Processor 점검 4. 검체 별, 고정시간 별 DNA의 질 및 면역 염색성 확인결 과 : 검체에 따른 선 고정 및 고정시간 확보 그리고 조직 두께에 관련된 부분이 가장 중요한 선행조건이라는 걸 알 수 있었다. 그리고 그에 따른 제반 사항으로는 주기적인 고정액 교체로 인한적정 pH 유지, 주기적인 장비 별 시약 교체가 있을 수 있겠다. 이에 본원 병리과에서는 고정시간, 조직 두께, 고정액 교체 주기, 장비 별 시약 교체 주기 등에 대한 기준을 마련하였다. 그 결과 면역병리 및 분자병리 검사 등에서 안정적인 검사 결과 와검사의 질 향상이 이루어졌다

      • KCI등재

        The Brain Donation Program in South Korea

        김예신,서연림,김승주,배문환,김재범,김윤아,최경찬,허기영,김은주,이중석,강현욱,심성미,임현정,고영호,김병채,이경화,이민철,이호원,임태성,William W. Seeley,김희진,나덕렬,이경훈,서상원 연세대학교의과대학 2018 Yonsei medical journal Vol.59 No.10

        Purpose: Obtaining brain tissue is critical to definite diagnosis and to furthering understanding of neurodegenerative diseases. The present authors have maintained the National Neuropathology Reference and Diagnostic Laboratories for Dementia in South Korea since 2016. We have built a nationwide brain bank network and are collecting brain tissues from patients with neurodegenerativediseases. We are aiming to facilitate analyses of clinic-pathological and image-pathological correlations of neurodegenerativedisease and to broaden understanding thereof. Materials and Methods: We recruited participants through two routes: from memory clinics and the community. As a baseline evaluation, clinical interviews, a neurological examination, laboratory tests, neuropsychological tests, and MRI were undertaken. Some patients also underwent amyloid PET. Results: We recruited 105 participants, 70 from clinics and 35 from the community. Among them, 11 died and were autopsied. The clinical diagnoses of the autopsied patients included four with Alzheimer’s disease (AD), two with subcortical vascular dementia,two with non-fluent variant primary progressive aphasia, one with leukoencephalopathy, one with frontotemporal dementia(FTD), and one with Creutzfeldt-Jakob disease (CJD). Five patients underwent amyloid PET: two with AD, one with mixed dementia, one with FTD, and one with CJD. Conclusion: The clinical and neuropathological information to be obtained from this cohort in the future will provide a deeper understanding of the neuropathological mechanisms of cognitive impairment in Asia, especially Korea.

      • 유방검체(MRM) 고정의 정도관리

        조승일,김대근,지우현,최명섭,배문환,이문정,김기현,우희숙 대한임상병리사협회 2010 조직세포검사학회 발표자료집 Vol.2010 No.-

        배경: 유방 검체는 얇게 자르기가 어려워서 고정이 잘 되지 않는 경향이 있다. 병리과에 의뢰되는 유방 검체 중에서 MRM(modified radical mastectomy)는 검체 사이즈가 크고 지방조직이 많아서 PM(partial mastectomy), BCS(breast conserving surgery) 등에 비하여 제작하는 블록 수도 많고 이에 따른 고정 시간도 더욱 소요된다. 또한, 유방 검체는 기본적인 외과병리검사 외에도 면역조직화학검사나 FISH검사 등이 추가적으로 이루어지는 경우가 많아서 그 결과가 환자의 치료 및 예후에도 영향을 미치게 되는데 유방 검체 중에서 특히, MRM 검체 고정에 따른 정도관리(QI)를 실시하여 그로 인한 검사결과의 개선은 매우 중요한 일이라 하겠다. 방법: 유방 검체는 삼성서울병원 병리과에서 2009년 1월에서 2010년 3월까지의 블록들을 대상으로 하였는데, 개선활동 시작은 1차 QI를 2009년 7월부터 9월까지 실시하여 Gross 관련 업무 개선을 하였고, 2차 QI는 10월부터 12월까지 실시하여 고정용기 및 고정방식을 개선하는 방법으로 하였다. 마지막으로 3차 QI는 2010년 1월부터 3월까지 실시하였고 자동침투와 관련하여 개선을 하였으며 각 기간의 불량률을 개선후의 성과로 삼고, 2009년 1월에서 6월까지의 불량률을 QI 실시 전의 비교 통계자료로 활용하였다. 여기서, 불량률이란 전체 대상 블록 중에서 재염색을 실시한 블록들로써 커팅시의 슬라이드 표시분이나 블록의 상태등을 일일이 기록하여 통계하였다. 각 기간 마다 외과병리검사 불량률, 면역조직화학검사 불량률, FISH검사 불량률 등으로 비교 분석하였다. 결과: 개선 실시전의 불량률은 외과병리 24%(720개/2996개), 면역병리 20%(26개/131개), FISH 17%(5개/30개)인데 반하여, 1차 개선 실시 후 외과병리 18%(221개/1225개), 면역병리 15%(6개/41개), FISH 10%(2개/20개)으로 감소되었다. 2차 개선 실시 후는 외과병리 13%(190개/1466개), 면역병리 10%(5개/52개), FISH 10%(2개/27개)으로 감소되었으며 마지막 3차 개선 실시 후는 외과병리 8%(112개/1420개), 면역병리 7%(4건/53개), FISH 8%(2개/26개)로 감소하였다. 따라서 개선 활동 시행 전인 2009년 1~6월 대비, 개선 활동 마감인 2010년 3월까지 각각 9~16% 평균 13%의 불량률 감소의 효과를 보았으며, 외과병리검사, 면역조직화학검사, FISH검사의 불량률은 개선 전에 비하여 모두 10% 이내를 달성하였다. 고찰: 먼저, MRM 검체의 고정 및 처리방법이 개선됨에 따라서 양질의 블록을 제작하여 외과병리검사, 면역조직화학검사, FISH검사 등의 질 향상을 이룰 수 있었다. 불량률 감소로 인한 효과는 환자의 치료계획 및 예후판단에 대한 신속한 진단을 가능케 하였다는 점과 다른 검체와도 연계하여 정도관리를 확대 실시하면 재염색 및 추가 Gross 감소 등으로 인한 업무의 효율화를 이룰 수 있다는 점이다. 특히, 불량률 감소로 오는 제반비용의 절감은 적잖은 낭비 요소를 줄일 수 있으며 이것은 궁극적으로 검사실 운영에도 효과적이다. QI를 위한 Groos 관리와 고정액 및 고정방법의 개선 그리고, 자동침투 기기의 효율적인 운영 등은 이미 알고 있는 내용들 이긴 하지만, 쉽게 지나칠 수 있는 업무이기도 하다. 따라서, 검체 처리와 고정 관련 지침 등을 마련하여 잊지 않도록 지속적인 교육이 요구된다.

      • 구연발표 : 골수(Bone Marrow)생검 조직의 고정 및 탈회방법 개선

        최명섭,이현섭,권혁철,배문환,송교열,오종원,마상철,우희숙,고영혜 대한임상병리사협회 2009 조직세포검사학회 발표자료집 Vol.2009 No.-

        배 경 통상적인 방법으로 탈회과정을 거친 골수 생검 조직에서 ISH, FISH, DNA검사는 거의 불가능하거나 재현성이 극히 제한적이다. 문제점이 고정액이나 탈회액의 조성성분인 산(acid)으로 인한 조직내의 DNA파괴로 보고, DNA 파괴를 최소화하는데 있으며 골수 생검 조직의 고정 및 탈회방법을 개선하여 각종 병리검사(ISH, FISH, DNA검사)를 가능하게 하며 정확한 진단 및 환자 치료에 적용하기 위함이다. 다양한 종류의 고정액과 탈회액중 최적의 고정액, 고정시간 그리고 탈회액, 탈회시간을 찾아서 각종 검사(ISH, FISH, DNA검사)의 가능성을 추구하며 골수 생검 조직을 이용한 각종검사법의 확대로 정확한 진단 및 양질의 검사 서비스를 제공하고자 한다. 방 법 고정액으로는 산을 포함한 고정액과 산을 포함하지 않는 고정액으로 나누어 사용하였고, 고정시간은 4시간, 12시간, 24시간으로 나누어서 실험하였다. 탈회액으로도 산을 포함한 탈회액과 산을 포함하지 않는 탈회액(EDTA계열)으로 나누어 사용하였고, 탈회시간은 4시간, 8시간, 24시간, 32시간, 48시간으로 나누어서 실험하였다. 검증방법으로는 ISH, FISH, DNA, RNA 검사를 통해서 적합성 여부를 결정하였다. 결 과 산이 포함된 고정액 및 탈회액을 사용하였을 경우에 ISH 검사에서는 비특이적 반응이 일어났으며, FISH는 정상군에 발현이 되지 않았다. 그리고 DNA와 RNA를 분리한 후 농도 측정 결과 양과 질이 검사에 적합하지 않음을 알 수 있었다. 중성 완충 포르말린(N.B.F)을 고정액으로 사용하고 EDTA 계열의 탈회액을 사용 시 ISH 검사에서는 비특이적 반응이 없어졌으며, FISH는 정상군에 발현이 되었으며 DNA와 RNA 농도 역시 양과 질이 검사에 적합하게 나타났다. 고 찰 골수 생검 조직의 고정 및 탈회방법을 개선함으로써 각종 검사(ISH, FISH, DNA검사)를 가능하게 하며 각각의 검사법의 민감도, 특이도 및 재현성을 확보하였다. 골수 생검 조직을 이용한 각종 검사법의 안정화로 환자의 진단, 예후 예측 및 치료 방침결정에 기여 할 수 있고 각종 연구의 활용이 가능해졌다.

      • KCI등재

        골수생검조직을 위한 최적의 고정 및 탈회 방법

        최명섭 ( Myung Sub Choi ),이현섭 ( Hyunsup Lee ),권혁철 ( Hyuk Chul Kwon ),배문환 ( Moon Hwan Bae ),고영혜 ( Young Hye Ko ),김희진 ( Hee Jin Kim ),이범세 ( Beom Se Lee ),구본경 ( Bon Kyung Koo ) 대한임상검사과학회 2015 대한임상검사과학회지(KJCLS) Vol.47 No.4

        A bone marrow biopsy that has undergone decalcification with 10% nitric acid could not be used for various pathological tests and had extremely limited reproducibility. The fixing solution of each experimental group was differentiated in usage, one solution including acid and the other not. The use of the decalcification solution was separated into either acidic or alkaline (EDTA), and further experiments were conducted with differing time phases. When using a fixing solution and decalcification solution which included acid, the specimens were faulty to the extent that all pathological tests were impossible. However specimens that were processed with an EDTA type decalcification solution did not display a non-specific reaction in EBV ISH and were even able to produce results that were at a level suited to various studies or a pathological diagnosis in the FISH, DNA, RNA tests. By improving the fixing and decalcification of bone marrow biopsy, the study was able to make possible ISH, FISH, DNA tests as well as RNA study, and secured the sensitivity, specificity, and reproducibility of various test methods. The stabilization of various test methods that use bone marrow biopsy contributes to the diagnosis, prognosis, prediction, treatment of the patient and provide guidelines for decision-making.

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