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Lysozyme Refolding Using Simulated Moving Bed Chromatography
박봉재,이종호,구윤모 한국화학공학회 2007 화학공학의이론과응용 Vol.10 No.1
A new continuous refolding method using four zone SMB(simulated moving bed) process based on size exclusion mechanism was developed to overcome difficulties of inclusion body refolding fromEscherichia Coli. Protein refolding using size exclusion SMB enables to obtain refolded protein continuously with high productivity, low consumption of refolding buffer, and high efficiency of size exclusion medium. Batch size exclusion chromatography was used to estimate thermodynamic and kinetic parameters for SMB operation. Sephacryl S-100 HR was used as size exclusion medium and packed in XK 16/40 glass column.With reference to the batch experiment results and operating conditions for SMB from linear triangle theory, the simulation was performed by Aspen chromatographyTM. The simulation results of the purity and activity of refolded lysozyme were 100 %. The experiment and simulation results showed a good agreement in purity of refolded protein but the activity of the protein in the experiment was only 32.8 %. The discrepancy was caused by the difference of mobility between chaotropic and reducing agents.
Fore-zone 모사이동상(SMB) 크로마토그래피를 이용한 리소자임 연속 재접힘
박봉재,이종호,구윤모 한국화학공학회 2007 화학공학의이론과응용 Vol.10 No.2
단백질 재접힘 기술은 원핵세포 내에서 단백질 과발현시 발생하는 내포체 형태를 정확한 3차원 구조를 가진 활성형 유용단백질로 재생산하는 중요한 기술이다. 일반적인 단백질 재접힘 기술로는 고농도 내포체를 고수율로 재접힘하기가 어렵기 때문에 연속 단백질 재접힘이 가능한크기배제 고정상에 기반을 둔 four-zone 모사이동상 크로마토그래피(SMB)를 이용한 단백질 재접힘 기술을 개발하였다. 이 기술은 회분식 크로마토그래피 재접힘 기술에 비해 재접힘 용매의 절감과 함께 고농로 단백질 재접힘이 가능하여 단위 공정상의 높은 재접힘 수율과 생산성을 얻을 수 있다. 본 공정의 동력학적계수와 열역학적계수는 회분식 크기배제 크로마토그래피 재접힘 실험 결과와 시뮬레이션 결과를 비교하여 최적 값으로 구하였다. 재접힘 공정에서 중요한 역할을 하는 urea의 등온흡착식은 frontal 크로마토그래피를 통하여 Langmuir로 얻을 수 있었다. 재접힘된 단백질(리소자임)의 경우, 두 경로로 재접힘되기 때문에 두 가지 물질처럼 움직임을 확인할 수 있었으며, 재접힘되는 단백질의 크기는 urea 농도변화에 따라 변화함을 확인하였다. 이를 urea 농도와 단백질 크기간의 상관식으로 설명하고 각각의 다른 침투인자(ke)를 이용하여 시뮬레이션에 적용하였다. 재접힘되는 단백질은 크기배제, DTT는 선형등온흡착식을 따른다는 가정하에 Triangle theory를 이용하여 SMB 공정의 조업 조건을 구하여 SMB 실험을 수행하였고, 그 결과 시뮬레이션과 일치함을 확인하였다.
김철우,송재모,배찬호,박봉재,문흥규,황석인,이재선,Kim, Chul-Woo,Song, Jae-Mo,Bae, Chan-Ho,Park, Bong-Jae,Moon, Heung-Kyu,Hwang, Suk-In,Yi, Jae-Seon 강원대학교 산림과학연구소 2001 Journal of Forest Science Vol.18 No.-
본 연구는 음나무의 증식을 위해 근삽을 이용하여 대량번식방법의 체계를 확립하고자 실시하였다. 조사된 결과는 다음과 같다. 1. 음나무의 근삽시 생장조절물질의 처리는 고농도보다 저농도가 효과적인 것으로 나타났으며, 생장조절물질 처리에 따른 부정아 발생율은 IBA, NAA 300mg/L 처리구에서 96.6%로 가장 높게 나타났으나 무처리 역시 90.0%로 높은 부정아 발생율을 나타내었다. 또한 엽의 특성(엽수, 엽신, 엽폭)은 무처리와 생장조절물질 처리간에 큰 차이를 나타내지 않았다. 2. 근의 방향에 따른 근삽은 가로근삽(100%)과 세로근삽 (92.5%) 이 모두 90% 이상의 부정아 발생율을 보여 두 처리 모두 높은 부정아 발생율을 나타내었고, 부정아 발생수 및 엽 특성(엽수, 엽병, 엽신 및 엽폭)에 있어서 세로근삽이 가로근삽보다 모두 높게 나타났다. 3. 바로묻기 한 것이 거꾸로묻기 한 것보다 부정아 발생율, 부정아 발생수 및 엽특성(엽수, 엽신, 엽폭)에서 높은 값을 나타냈으며, 거꾸로묻기 한 경우 세근의 발달이 없거나 미약하며, 부정아 발생의 경우 기극 부근에서 발생하여 지면으로 올라오는 경우를 나타냈다. This research was carried out to establish the large quantity propagation system for Kalopanax pictus using root cutting. The results are as follows. As there was no significant difference in the promotion of adventitious shoot development from the root cuttings of Kalopanax pictus among kinds (IBA, NAA and Kinetin) and concentrations (0 to 2000 mg/L) of growth regulators, no application is recommended, which showed more than 90% of shoot development. Horizontal and vertical placement of rooting showed more than 93% of shoot occurrence, but the latter showed more desirable growth traits in the number of shoot development, number of leaf, petiole length, and leaf length and leaf width Polarity was observed and thus normal vertical placement of root cutting is preferred. However, root cuttings placed upside down showed the shoot development at the distal end, which indicates further sophisticated test is necessary to investigate this phenomenon.