국내 사람 로타바이러스의 혈청형 항원부위의 염기서열 비교분석에 관한 연구

민복순,김재근,백선영,신진호,김재옥,민경일,류승렬,김병국,김도근,박미경,안미진,신계명,이석호,박순희 식품의약품안전청 2000 식품의약품안전청 연보 Vol.4 No.-

사람 로타바이러스는 영 ·유아 설사질환의 주요 원인체로 매년 1억 2천 5백만 명 이상의 설사 환자를 유발시키고 있다. 발병률이 높음에도 불구하고, 국내는 유행 사람 로타바이러스의 발병률과 특성에 관한 연구 자료가 미흡한 실정이다. 따라서 현재 외국에서 개발되어 시판되고 있는 사람 로타바이러스 진단제제와 향후 국내 ·외에서 개발될 백신 품질효능 평가시 많은 어려움이 있다. 이에 본 연구에서는2000년 1월에서 4월 사이에 서울, 대전 등 총 9개 지역에서 로타바이러스 감염이 의심되는 국내 영 · 유아 설사 환자를 대상으로 하여 총 가김물 30f건을 수거하여 실험에 사용하였다 가검물에서 사람로타바이러스 양성를을 조사하기 위하여 라텍스응짇법(L.AT), 효소면역법(ELISA),폴리아크릴아마이드 겔 전기영동법(PAGE), 핵산 증폭법(RT-PCR)시험을 시행하였다. 그 결과 LAT는 71.9%, ELISA 64.9%, PAG료 53.0%, VPf-RT-PCR 68.5%, VP4-RT-PCR 69.5%이었다. VP7-PCR과 LAT간의 일치도는 96.7%,'#P4-PCR과 LAT간의 일31도는 98.0%를 나타내었다. PAGE시험으로 group을 조사한 결과 총 302건 중 159건이 전세계적으로 사람에게 감염하는 A 잉cuP을 나타내었으며,1건은 극히 일부에서 발생하는 C: group을 나타내었다. RT-PfR에 의한 VP7 혈청형은 C2 type 50건, Gl type 44건, G4 type 26건이며, VP4의 혈청형은 PIB[41 type 줬건, P2A(6) type 47건, PIA(8) type 템건이었다. 현재 세계적으로 Gl type과 PIA[81type의 혈청형이 유행하는 것으로 알려져 있으나, 이와 다르fl 본 실험의 경우 G2 type과 PIB14T type이 가장 높은 경향을 나타내었다. Human rotaviruses are the leading cause of severe diarrheal disease of infants and children younger than 2 :fears of age worldwide. Thousands of children in less devetopedcountries died from rotavirus infecdon every year. Current research efforts are directed atimproving the effectiveness of rotavirus vaccines and reducing adverse effects of vaccination.It is expected that safer and more effective vaccines as weIB as a variety of diagnostic kitsincludhg serotyping Icits will be commercially available in the near future. In this study weinvestigated human rotavinls infection in Korean infants and young children who visil~edhospital due to diarrheal illness. A total of 302 fecal samples were collected from 9 urban areasacross the national terftory from January to April 2000. Delfction (If rotaviruses in fecalsamples was peformed using latex agglutination test (LAT), enzyme-linked immunosorbentassay (ELISA), polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE), and reverse transcription-polymerasechain reaction (RT-PCR). G and P typug analysis was performed by multiplex PCR andsequencing. Of 30f samples tested and the positive rates were 71.9% (fA7), 64.9% (196), 53.0%(t60), 69.5% (211), and 68.5% (207) by LAT, ELISA, PAGE, VPT-PCR, and VP4-PCR,respectively The G(VP7) and P(VP4) typing and phylogenetic analysis revealed that Gl, C2,G4, PIA141, PIB[87, and P2A[6] types of gioup A rotavirus were prevailing in the givensampling frame during the study period. The most prevalent type was G2 and PIB[47 type. Itwas an unexpected finding in that the world-most prevalent type has been reported to be Gl,PIA[8B. A further study with greater sample size and expanded time period of sample collectionis necessary to confirm the difference.

HIV감염자에서의 혈액 및 면역학적 연구

나동진,문희주,민복순 凡石學術奬學財團 1997 凡石學術論文集 Vol.1 No.1

AIDS cases and HIV prevalence are increased rapidly in the world and in Korea. This study is to get the state of health among people infected with HIV, who were found in Korea. the prognostic factor for AIDS and effects of therapy. 98 HIV infected persons were chosen among 570 HIV infected people found in Korea for the period of 11.5 years since 1985 based upon assumption of their HIV infection time. 98 HIV infected people were tested per 6 month to be investigated for their hematologic and immunologic status and change. As a result. RBC number. Hemoglobin volume and Hematocrit value was decreased but MCH and MCHC showed little change With time. MCV was increased and was higher than normal value with time. ESR continued to increas more than 1.5mm/h per two year and increased obviously after 6 years. Platelet. WBC, Lymphocyte number was decreased respective with time. Lymphocytes among Leukocyte differential counts was decreased with time. But segmented neutrophil increased and Monocyte & Eosinophil were decreased with time. Basophil and band form changed very ljttle. CD4/CD8 Ratio decreased with time among all HIV positive persons and it decreased more rapidly after 6 years than that among male with HIV after 2 years.

HIV 감염자에서의 혈액학적 발현

나동진,문희주,민복순 서울保健大學 1996 論文集 Vol.16 No.1

AIDS cases and HIV prevalence are increased rapidly in the world and in Korea. This study is to get the state of health among HIV infected persons, who were found in Korea, the prognostic factor for AIDS and effect of therapy. 98 HIV infected person, assumed HIV infection time, were choosed among 521 HIV infected persons found in Korea for the period of eleven years from 1985. 98 HIV infected persons were tested per 6 month to investigate their hematologic and immunologic status and change. As a result, RBC number, Hemoglobin and Hematocrit decreased but ESR continued to increase more than 1.5mm/h per two years. ESR increased obviously after 6 years and Platelet, WBC, lymphocyte decreased with time. Leukocyte differential counts and lymphocytes decreased with time. But segmented neutrophil increased and monocyte & Eosinophil decreased with time. Basophil and band form changed very little.

국내 HIV 감염자에서의 기회성 감염증에 관한 연구(Ⅱ)

신영오,이주실,이홍래,강춘,남정구,최병선,김상형,민복순,이재상 국립보건연구원 1994 국립보건원보 Vol.31 No.1

수두백신의 역가시험법 표준화를 위한 연구

민경일,백선영,신진호,김재옥,류승렬,민복순,김병국,김도근,김훈,이석호,박순희 식품의약품안전청 2001 식품의약품안전청 연보 Vol.5 No.-

수두(chicltenpo즈) 및 대상포진(shingles)의 예방을 위해 사용되는 수두 생 바이러스 백근은 현재 국내 -외 제조사들이 정상사람 2배체 폐 태아 세포 주들을 이용하여 바이러스를 배양 · 증식시켜 생산하고 있으나, 품질관리를 쒸한 역가 시험에는 t·fRC튼 띤 LB딘EL 세포 주외에 제조사가 설정한 세포 주를 이용하고 있으며, 역파신험 방법인 fH Ui'rFO Plaque 3SSaIT에도 조사별로 다소 차이가 있는 시헌법을 사용하고 있다. 그러므로 일반적으로 세포 주간우 감수성 차이, 계대력(passa딩e level)간의 차이,varicelta-zoster virus(4'2V) diluent medium 등에 의한 차이에 의해 역가시힘 결과에 많은 차이를 나타낼 수 있다. 이에 본 연구에서는 역가 시험 결과꼭 편차를 촉소화 할 수 있는 시헌방법을 극힙하고자 Ok퍼 백신 주와 세로 주간 및 기타 요인에 따른 차이를 비교 분석하고 이를 표준확하여 일관겅있는 국가 및 제조사의 품질관리예 활용하고 나아가 수두 생 바이러스 백신 역가시헌 국가 표준품 거달에 활용하고자 하는데 목적이 운.다. 수두 생 바이러스 빅신의 역가 시험에 영향을 띠칠 수 꿀.는 모민으로 우선 바이러스 흡착에 사용되는 1#Z)·'diluent medium이 가장 큰 오인으로 확인되.고. 현개까기 최종적으로 if4 sucrose, 10% FBS, 0.1% sodiun) rrlonog)utamate in PBS(-), fIH 7.2가 가당 두수글 L'z).「 린luent medium 조성으로 확인되었단. 또한 '·:~l포 주별로 다소의 차이는 잇.으나 최대 바이러스 흡착시간은 90분으론:÷잰착인 되었다. 다른 negati)Fe effect를 보일 수 있는 요인으로 항생물질 및 항츤 제인 fuugiBone이 곡이러스의 역가에 영향을 미치는 것으로 확인되었다 따라서 이러한 항생물 띤 항균제를 standard solid agarose overla?·(5.tO) 시헌방법에는 사용하지 않는 것이 역가 시험의 편차를 줄일 수 있는 요인이라 판단된다. 최적의 조건하데서 Oka 수두 백신 주의 j 종의 세포 쭈에 대한 역가시험 수행 결과 각 세포 주의 감수성의 차이는 크지 않았으나, 반복시헌에 대한 표준편차는 다소 차이를 나타났다. Until now in Korea, the international and domestic vaccine maufacturers produce and sale live attenuated daricella vaccines, used to prevent chickenpox and shinglees, which are propagated in and done the potency test with various originated human diploid embryonic lung cells. Also manufacturers perform in vitro plaque assay with a little different methods to their quality control tests. Therefore, in general, there is slight or big difference among in vitro plaque assay results because of the difference in susceptibility of various originated human diploid embryonic lung cells and in assay methods. The purpose of this study is to confirm what factors occurring deviation to establish the standardized method which minimize deviation intracellularly and intercellularly. Eventually the standadized method will be used in consistent national and manufacturer's quality control and moreover intra and inter laboratory's validation assay of national standard for live varicella vaccine candidate. We confirmed VZV diluent medium was the biggest factor influencing in vitor plaque assay and the excellent composition of VZV diluent medium was final 5% sucrose, 10% FBS, 0.1% sodium monoglutamate in PBS(-), pH 7.2. We confirmed 90 minutes was maximum and optimum VZV adsorption time, but a little different among cells Also we recommended not use antibiotics and antimycotic, fungizone in standard solid agarose overlay assay in varicella potency test. Eventually 5 different originated human diploid embryonic lung cells showed little difference in susceptibility to Oka vaccine strain, but showed a lot of difference in reproducibility.

백신위해성평가사업(Ⅱ) : 생물의약품의 안전성 평가를 위한 A형 간염 바이러스(HAV)의 오염지표 수립에 관한 연구

김병국,백선영,신진호,김재옥,민경일,류승렬,민복순,김도근,박미경,안미진,이상건,이석호,박순희 식품의약품안전청 2001 식품의약품안전청 연보 Vol.5 No.-

생물의약품의 안전성을 확보하기 위하여 제조공정 증 바이러스 등의 위해 물질 제거 및 불활즉 공정과정의 확립이 필수적이며 이에 대한 평가를 위하여 감도와 특이도가 높은 오염물질의 검출 방법 확립이 매우 중요하다. 본 연구에서는 모델 바이러스로 A형간염바이러스fhepautis A virus :HAV)를 대상으로 real-tile PCR을 이용하여 실시간으로 정확하고 민감하게 바이러스를 검색하고 정량할 수 있는 시험법을 개발하였고 이로부터 바이러스의 오염지표를 수릴할 수 있는 기반을 마련하였다. 먼저 LightC?cBerT.4i(Roche)를 이용하여 바이러스를 검색하기 위한 real-time PCR의 최적 조건을 확림하였다. HAV의 겅색과 정량을 위한 표준 RNA는 flasmid PHAV/7으로부터 in uitro transcription을 수행하여 만들었다. 정제된 RNA를 Ix10'copies/#』부터 Ix10"copies/낄까지 계단 희석하여 표준바이러스로 사용하였다. Real-time PCR로 표즌 RNA의 유효성과 재현성을 검사한 결과 각 희석 단계 모두 표준편차가 0.3을 넘지 않았고 변이계수는 0.02를 넘지 않아 표준 RNA는 우수한 유효성과 재현성을 보여 주었다. 세포배양으로부터 녈리한 HAV를 표준 RNA를 이용하여 정량하고 혈액제제에 spiking실험을 수행하였다. 이 패 제젠로 인한 PCR반응의 간섭이 나타났으며 이것은 표준 aHA를 오염되지 않은 같은 제제로_희석하여 끊색과 정량에 사용함으로서 오차를 줄일 수 있었다. 이 실험에서 개발된 Lightcycler를 이용한 real-time PCR법에 의해 HAV는 Ix102 copies/re이하까지 검색이 가능하였다. 또한 제제에 바이러스를 spiking 한 경우에도 같은 민감도를 보였다. Real-time 정량 PCR방법은 표준 RNA를 이용하여 생물학적제제에서 바이러스의 검색과 정량에 매우 유용하게 이응할 수 있다. The establishment of the highly specific and sensitive detection and clearance method of contaminants such as virus in the manufacturing process is essential and important for the safety of biological products. In this study, the sensitive real-time detection and quantification method of Hepatitis A virus as a model virus using LightCycerTM(Roche, Germany) was established for the viral clearance validation and contamination index. First, the optimization of real-time PCR condition such as annealing temperature and magnesium ion concentration was performed. The standard RNA(sRNA) used as quantification standard was prepared from plasmid pHAV/7 by in vitro transcription and was serially 10-fold diluted from 1×107 to 1×102copies/㎕. The standard deviation and coefficient variation of sRNA was not more than 0.3 and 0.02 respectively. It showed pretty good efficacy and reproducibility. The purified RNA from cell culture was quantified using sRNA and spiked into blood products. To reduce the interference of product itself in PCR reaction, sRNA was diluted with uncontaminated product. The sensitivity of the assay was 1×102 copies and the similar results was obtained in spiked blood products. From the study, real-time quantitative PCR method can be used to detect and quantify viral contaminants with a standard RNA in biological products.

A형 간염 바이러스(HAV) 검색 기술 수립에 관한 연구

김병국,김재근,백선영,신진호,김재옥,민경일,류승렬,민복순,김도근,안미진,이석호,박순희 식품의약품안전청 2000 식품의약품안전청 연보 Vol.4 No.-

1990년대에 들어서 국내를 포함한 전 세계적으로 혈우병환자에게 투여된 혈액응고제제인 factor Vlll 등의 생물학적제제로 인하여 수 십명이 큽성 A형간염에 감염된 사례가 보고된 바 있다. 생물학작제제의 제조 공정 시 바이러스를 비롯한 위해성오염인자의 제거 및 불활화 과정과 제제에서 위해성 바이러스의 검출 방법 확립은 매우 중요하다. 본 연구에서는 생물학적제제아서의 A형 간염바이러스의 검삭기술 수립과겄색지표 절정, 나아가 virus clearance validalion을 위한 바이러스 검색 및 시험 조건에 대한 기초 시험을 수행하였다. 바이러스는 BS-C-1세포에서 배양하였으며 증식은 RT-PCR을 통하여 확인 하였다. 제제에 오염되어있는 바이러스의 검출한계를 설정하기 위하여 역가를 알고 있는 표준바이러스를 희석한 후 젊량 PCR(real time quantitative RT-PCR)법으로 검출한계를 설정하였다. Since the early 1990s it has been reported that some heirtophilia patients who received blood clottirlg factor Vlll had been infected by HAV worldwide including Korea. Sothe removal and irlactiyation of possible contaminated agents including viruses are veryimportant in the processing of biological products. The establishment of a sensitive method todetect infectious virus is also Important. For establishing HAV detection method, the index ofthe detection limit arld virus clearance validation, the basic study on the experiirlental conditionIvas peformed. The propagation of virus was detected by RT-PCR after grown in BS-C-1cells. To establish tile detection limit of uirus in biological products, virus with known titerwas diluted and used for the quantitative RT-PCR. The detection limit of infected virus in finalproducts was deterrruned.

일본뇌염 백신의 역가시험용 국가 표준품 확립을 위한 기반 연구

김재옥,김재근,백선영,신진호,민경일,민복순,류승렬,김병국,김도근,안미진,박미경,송혜원,이석호,박순희 식품의약품안전청 2000 식품의약품안전청 연보 Vol.4 No.-

일본뇌염은 모기에 의해 전염되는 질병으로 전 세계적으로 매년 오만명의 환자를 발생시키며, 생존자의 1/3 이상에서 신경계 합병증에 의한 장애를 초래하는 것으로 추측되고 있다. 이러한 일본뇌염의 예방책은 모기에 의한 전파를 차단하거나 예방백신을 접종하는 것인페, 특히 예방절종의 경우 그 효능 성이 이미 일븐, 한국, 대만 등a'i에서 입증된 바 있다. 일본뇌염백신의 역가를 검정하는 방법으로는 PRNT 방법을 통하여 대상 백신을 표준품과 hi교하는 방법이 널리 사용되고있는페 우리나라의 경우 현재 표준품이 없어 일본의 료준품을 전량 고가로 수입하고 있다. 따라서 국내 표준품을 확립하기 위한 기반 연구를 실행하게 되었다. 극십자백신(주)로부터 표준품 후보물질을 제공받아 국내에서 일본뇌염백신을 제조하는 5사와 공둥연구를 하였으며, 실헝 결과 표준품 후보물질이 표준 대조물질(일본 표준품)보다 약간 높은 중화항체가를 나타내었다. 실험실별로 4회 실험의 반복성을 통계 분석한 결과 B실험실의 표준 대조물질을 제외하고는 윤의수준 o=0.05에저 차이가 없는 것으로 나타났으며, 6개 실험실간의 쵸준 표준물질과 표준품 후 보물질의 시험결과를 분석하였을 때는 모두 변이계수에 있어 차이가 있는 것으로 나타났다(p<0.05). 이는 다른 실험실에 비해 실험실 ID쓱 I의 시험결과가 낮기 때문으로 추정되떠, WHO의 자료에 따르면 표준품을 설정하기 위해서는 최쏘한 6회 이상의 시험을 권고하고 있어 향후 더 많은 실험 및 결과 분석이 뒤따라야 할 것으로 생각된다. Japanese encephalitis (JE) Is a viral disease which is t37ansmitted by mosquitos and it affects aboi?t 50,000 people in Asia per year Lfore than one third of survivors from thehfection are suffering from adverse events related with neurological disorders. As a preventingmeasure of the asease, vacci·lation using inactivated JE vaccine has already been proven forits efficacy in Japan, Korea and Taiwan. To evaluate a potency of inactiyated JE vaccine, plaque reduction neutralization test (PRN17)was used to compare the test material to its standard. Since there is no national referencemade in Korea, 』γe have used reference material purchased from Japan. It is, however, difficultto obtain the reference material with sufficient quantity and a reasonable price. The collaborative study was performed according to standard opel·ating procedure of fEpotency test provided b? KFDA. The results were analyzed for calibration by paralle)experiment using reference and reference candidate. To solve this difficult situations, we have performed a collaborative study to make Koreanational reference of JE vaccine. National reference candidate was provided by Green CrossVaccine Compan17 A total of six laboratories including five JE vaccine manufacturers'and anational control laborato?F participated in this coltaborative study. As a result, national reference candidate shows a little higher neutralization titer than that ofJapan reference. There is no significant difference of repeatability in each laboFatorY except one.According to WHO docur)ent, its four separate potency tests were not enough and at least t)Yomore experiments are reauired.

한국에서 분리된 유행성이하선염 바이러스 변이에 관한 연구

민경일(Kyung Il Min),김도근(Do Keun Kim),조수열(Soo Yeul Cho),안광수(Kwang Soo Ahn),민복순(Bok Soon Min),김병국(Myoung Guk Kim),반상자(Ssang Ja Ban),허숙진(Sook Jin Hur),박순희(Sue Nie Park),이길웅(Kil Ung Lee) 대한바이러스학회 2000 Journal of Bacteriology and Virology Vol.30 No.2

세포배양 유래 생물의약품 중 Bovine Viral Diarrhoea Virus 검출을 위한 RT-PCR, Real-Time RT-PCR 및 RT-PCR-ELISA 기법의 검출한계와 정량범위 평가

류승렬(Seung-Rel Ryu),신진호(Jin-Ho Shin),백선영(Sun-Young Baek),김재옥(Jae-Ok Kim),민경일(Kyung-Il Min),민복순(Bok-Soon Min),김병국(Byoung-Guk Kim),김도근(Do-Keun Kim),박미경(Mi-Kyung Park),안미진(Mi-Jin Ahn),채경숙(Kyung-Sook Chae) 대한미생물학회 2003 Journal of Bacteriology and Virology Vol.33 No.2