1995년 및 1996년에 국내에서 분리된 풍진바이러스의 염기서열 및 계통분석

백락주,송기준,정재희,정희진,김우주,김민자,송진원,김세연,이용주,박광숙,강주일 대한감염학회 1997 감염 Vol.29 No.3

목적: 유소아에서 경한 발진성 질환을 일으키는 풍진바이러스는 토가바이러스과에 속하며 일회 감염으로 평생면역을 획득하는 것으로 알려져 왔다. 그러나 1960년대 후반 풍진예방접종이 시행된 이후 선진국의 경우 풍진 호발 연령이 유소아에서 청소년 층으로 변화하는 양상을 나타내었으며 우리 나라의 경우에도 1995년에서 1996년도 사이에 발생한 풍진대유행기에 주로 중 고등학생층에서 풍진이 호발하였다. 주기적인 풍진의 유행에도 불구하고 우리 나라에서는 최근까지도 풍진 바이러스의 분리나 유전정보에 대한 연구보고가 없어 이에 대한 연구를 시행하였다. 방법: 1995년에서 1996년에 발생한 풍진 환자의 인후분비물을 채취하여 세포배양법으로 풍진바이러스 분리를 시도하였으며, 분리된 풍진바이러스의 RNA를 추출하여 역전사 중합효소연쇄반응법으로 증폭한 후 염기서열 및 아미노산 서열을 결정 분석하였다. 결과: 세포배양을 통해 7주의 풍진바이러스를 분리하였으며 국내 풍진바이러스주들은 염기서열상 92.5-100%의 동질성을 나타내었고, 백신주 RA27/3과는 2.2-6.4%의 차이를 보였다. 아미노산서열상에서는 국내에서 분리된 풍진바이러스주들은 98.3-100%의 동질성을 나타내었고, 백신주 RA27/3과는 1.7%이하의 차이를 보였다. 계통분석 결과 국내에서는 최소한 2가지 유형의 풍진바이러스가 유행하였다. 결론: 국내에서 유행한 풍진바이러스주의 E1 gene 부위를 기존에 알려진 외국의 분리주나 백신주와 비교시 의미있는 차이는 관찰되지 않았으며 Vero E6 세포는 풍진바이러스의 분리배양에 유용함을 알수 있었다. 그러나 풍진바이러스의 지속적인 변이 양상이 관찰된 사실은 체계적이고 지속적인 풍진바이러스 감시체계의 필요성을 제시하였다. Background: The age group of Rubella virus (RV) infection in most industrialized nations located in temperate climates, has in large part shifted from children to young adults since introducing of the RV vaccine in late 1960's. Interestingly, there were rubella outbreakes from 1995 through 1996 in Korea, and middle and high school students were mostly affected during that time. Although continued of genetic information of rubella viruses circulated in Korea. Method: To isolate RV circulated in Korea, and determine the phylogenetic relationship between RV strains in Korea and RV isolates from other geographic regions including vaccine strains, we inoculated nasopharyngeal secretion samples from clinically diagnosed rubella patients to Vero E6 cells, and sequenced corresponding region of the 5' EL encoding genomic regions of RV isolates. Result: Seven RV strains isolated from Korea showed 93.6 to 97.8% and 98.3 to 100% sequence homologies in nucleotide and amino acid levels, respectively, compared to RA27/3 vaccine strain. Phylogenetic tree based on 359bp of RV indicated that at least two different groups of RV circulated in Korea during 1995-1996 epidemics. Conclusion: Our data suggested that mutant RV strains were possiblely not the cause of recent rubella epidemics in Korea.

혈관동결후 시간 경과에 따른 평활근세포 및 내막세포 재생에 관한 연구

강주일(Joo il Kang),김경욱(Kyung Wook Kim),이재훈(Jae Hoon Lee) 대한구강악안면외과학회 1998 대한구강악안면외과학회지 Vol.24 No.1

Cryogen kills living cells and cryosurgery has been introduced int he clinical field to destroy tumors such as hemangioma or vascular lesion. And recently, vascular freezing technique has been suggested as a new physical method of relief of the vasospasm. Although it is an advanced technique in treating some tumors or malignancy and potential modality in relieving the vasospasm, the detailed healing after vascular injury of cryogen of artery and the healing after cryodamage, especially focussed on the change and regeneration of endothelial cell and smooth muscle cell. We sacrificed the experimental animals by 3 days, 5 days, 10 days, 20days, 30 days and observed the sequential change that occur during regeneration of femoral artery using a histologic, immunohistochemical and SEM study after the vascular freezing. The results were as follow : 1. Vasodilation was observed by 30 days and endothelial cell and smooth muscle cell was beginning to increase from 5th day. The arrangement of muscle cell was irregular and the thickness of intima did not largely change. Infiltration of inflammatory cell into media & adventitia increased on 5th day, and gradually decreased later. 2. In the view of SEM, the endothelial cell was destructed and falling off, and partly regenerated at 3 days. On 10th day, the endothelial cell was moving into damaged area and repairing it. On 30th day, the endothelial cell was fully covered the damaged area, but having a irregular arrangement observed. 3. In control group, PCNA positive reaction was observed in endothelium, smooth muscle cell and surrounding mesenchymal cell of artery. Smooth muscle cell and perivascular vessels showed α-SMA positive reaction, and endothelial cell of arterial wall, smooth muscle cell and surrounding mesenchymal tissue of artery showed vimentin positive reaction. 4. In the PCNA study, endothelial cell showed positively reaction on 10th day and actively reacted on 20th day. Smooth muscle, perivascular mesenchymal cells were beginning to react positively on 5th day, and almost histopahologically repaired on 20th day. 5. In the α-SMA histologic view, smooth muscle cell was beginning to react from 5th day, and almost repaired on 30th day. Perivascular arteries were reacting on 3rd day and repaired on 20th day. 6. In Vimentin-reaction view, endothelial cells were beginning to react positively from 5th day and showing a similar reaction of control goup. Smooth muscle cell, perivascular mesenchymal cells were showing a positive reaction from 5th day, and then reacting more positively. Based on these findings, intima of artery was repaired at 20 days, smooth muscle cell between 10 and 20 days, perivascular mesenchymal cells were repaired within 20 days after cryodamage. 1. 혈관확장은 술후 30일까지 관찰되었고, 내막세포와 평활근세포는 5일째부터 증식되기 시작했다. 근육세포의 배열이 불규칙하였고, 내막의 두께는 큰 변화가 없었다. 중막 및 외막의 염증세포 침윤은 동결 후 5일까지 증가하다가 점차 감소하였다. 2. 주사전자현미경적 소견에서는 3일째 소견에서 내막세포의 파괴 및 탈락이 보였고, 재생되는 내막세포도 부분적으로 관찰되었다. 10일째에는 내막세포가 손상 인접부로 부터 혈관동결부로 증식 이동하고 있었으며, 30일째에는 내막세포 재생에 의해 배열은 불규칙하였다. 3. 대조군에서는 동맥의 내막세포, 평활근세포 및 주위 간엽세포에서 PCNA 양성반응이 관찰되었고, 동맥의 평활근세포 및 주위 혈관에서 α - SMA 양성반응이 보였다. Vimentin에는 동맥벽에 있는 내막세포, 평활근세포 그리고 주위 간엽조직에서 양성 반응이 나타났다. 4. 동결후 10일째에 내막세포에서 PCNA 양성반응이 나타났으며, 20일째는 반응이 매우 활발하였다. 평활근세포와 간엽세포는 5일째 양성반응이 관찰되었으며, 20일째는 조직 병리학적으로 거의 치유된 양상을 보였다. 5. α - SMA조직소견에서 평활근세포는 5일째부터 반응하여 30일째 거의 회복되었으며, 주위 혈관은 3일째 발현되었으며 20일째는 치유된 양상이었다. 6. Vimentin 반응에서 내막세포는 5일째부터 양성반응이 보이기 시작하였고, 20일째는 대조군과 유사한 양상을 보였다. 평활근세포 및 주위 간엽세포는 5일째부터 양성반이이 나타났으며, 시간이 경과할수록 그 반응이 증가하였다. 이상의 소견에서 대퇴혈관의 내막세포는 동결 손상 후 20일, 평활근세포는 10∼20일 사이, 혈관 주위 간엽세포들은 20일내에 재생치유되었다.

1995년 계방산에서 채집한 들쥐의 한탄바이러스 감염에 대한 혈청학적 연구

백락주,강주일,송기준,송진원,양병국,이용주 대한바이러스학회 1997 Journal of Bacteriology and Virology Vol.27 No.2

Multiple species of rnuridae and arvicolidae rodents serve as the natural reserviors of hantaviruses. Hantaviruses are distributed in rodent populations world-widely even in geographical areas where hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) has not been reported. Serologic diagnosis of infection, using hantaviral antigen, indicates that hantaviruses are widey distributed in wild rodents. This study was designed to intended the hantavirus infection among wild rodents captured in Kyebang mountain, Kangwon-do in Korea. A total of 216 wild rodents in 3 species were trapped in July and September in 1995. Serological evidence for hantaviruses infection were tested against five hantavirus antigens by indirect immunofluorescent antibody technique (IFA). Among 100 Eothenomys regulus, 78 Apodemus peninsulae and 38 Apodemus agrarius; 12 C. regulus, 15 A. peninsulae and 6 A. agrarius were IF antibody positive against hantaviruses. This data suggest that Eothenomys regulus and Apodemus peninsulae would be a natural reservoir of hantaviruses.

Attenuated Expression of Interferon-induced Protein Kinase PKR in a Simian Cell Devoid of Type I Interferons

박세훈,최재도,강주일,최상윤,황순봉,김정수,안병윤 한국분자세포생물학회 2006 Molecules and cells Vol.21 No.1

The interferon-induced, double-stranded RNA (dsRNA)- dependent protein kinase PKR plays a key role in interferon- mediated host defense against viral infection, and is implicated in cellular transformation and apoptosis. We have isolated a cDNA of simian PKR encoding a product with 83% amino acid identity to the human homolog and showed that PKR expression is significantly attenuated in the Vero E6 African green monkey kidney cells devoid of type I interferon genes. A variant form of PKR lacking the exon 12 in the kinase domain is produced in these cells, presumably from an alternatively spliced transcript. Unlike wild type PKR, the variant protein named PKR-ΔE12 is incapable of auto-phosphorylation and phosphorylation of eIF2-α, indicating that the kinase sub-domains III and IV embedded in exon 12 are indispensable for catalytic function. PKR-ΔE12 had no dominant negative effect but was weakly phosphorylated in trans by wild type PKR.

Screening of Domestic Silkworm Strains for Efficient Heterologous Protein Expression by Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus (BmNPV)

조선정,최지현,강주일,임재환,석영식,이재만,Takahiro Kusakabe,홍선미 한국잠사학회 2014 International Journal of Industrial Entomology Vol.29 No.2

Recombinant proteins can be generated quickly and easily in large amounts and at low-costin silkworm larvae by using Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV). We searchedfor high-permissive silkworm strains that have high production levels of heterologous proteinsand are thus suitable for use as biofactories. In this study, we performed the analysis usinga BmNPV vector expressing luciferase as a marker, and we confirmed protein expressionby evaluating luciferase activity, determined by western blotting and luciferase ELISA, andconfirmed transcription expression by semi- and quantitative real time PCR. For the selectionof host silkworm strains, we first chose 52 domestic BmNPV sensitive strains and thenidentified 10 high-permissive and 5 low-permissive strains. In addition, to determine whichhybrid of the high-permissive strains would show heterosis, nine strains derived through threewaycrossing were tested for luciferase activity by western blotting, and luciferase ELISA. We found a correlation between luciferase activity and luciferase protein expression, but nottranscription. There was no noticeable difference in protein expression levels between Jam313as the high-permissive control strain and the three-way hybrid strains; however, the three-waycross strains showed lower luciferase activity compared with Jam313. In this study, luciferaseprotein production in the larvae of 52 domestic silkworm strains was elucidated using BmNPV.

차세대 DNA 프로필

정연보(Yeon-Bo Chung),강주일(Ju-Il Kang),김성현(Seung-Hyun Kim),김은영(Eun-Young Kim) 한국법과학회 2000 한국법과학회 학술대회 Vol.2000 No.1

경기도에서 채집한 Apodemus peninsulae에서 한탄바이러스 분리와 유전학적 연구

송기준,김용수,이용주,송진원,강주일,백락주,Song, Ki-Joon,Kim, Yong-Soo,Lee, Yong-Ju,Kang, Ju-Il,Song, Jin-Won,Baek, Luck-Ju 대한미생물학회 1998 Journal of Bacteriology and Virology Vol.28 No.4

Hantaviruses are distributed in rodent population world-widely even in geographical areas where hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) has not been reported. Various species of Family Muridae and Arvicolidae serve as the natural reservoirs of hantaviruses. Hantaan virus, Seoul virus, Puumala virus, Prospect HII virus, Sin Nombre virus and New York virus are members of genus Hantavirus and isolated from lungs of A. agrarius, R. norvegicus, C. glareolus, M. pennsylvanicus, P. maniculatus and P. leucopus respectively. This experiment was intended to find the distribution of hantavirus infection among wild rodents and isolate the hantavirus from lung tissue of seropositve Apodemus peninsulae, and compared the nucleotide and amino acid sequences with prototype of hantaan virus 76-118 strain. Hantaviral sequences were amplified from lung tissues of A. peninsulae by reverse-transcriptase polymerase chain reaction. Alignment and comparison of the 324 nucleotide of G2 region of M-genomic segment diverged 4.6% and 0% at the nucleotide and amino acid levels, and complete N protein-coding region of S-genomic segment diverged 3.7% and 1.4% nucleotide and amino acid levels, respectively. This is the report to spill-over on the hantaan virus from A. agrarius to A. peninsulae in Korea.

야생 설치류의 한타바이러스 감염에 대한 연구

백락주,송진원,송기준,박광숙,최영주,강주일,이용주 대한감염학회 1997 감염 Vol.29 No.6

목적:국내 야서중에 한타바이러스의 숙주는 등줄쥐와 집쥐로 알려져 있으나, 한국에 서식하고 있는 다양한 야생 설치류를 채집하여 한타바이러스에 대한 항체검사를 실시하여 새로운 혈청형의 한타바이러스가 있는지를 혈청학적으로 규명하고자 하였다. 방법:국내에 서식하고 있는 야생 설치류를 1995년 10월부터 1996년 10월까지 7종 551수의 야시와 4종 97수의 소형동물을 채집하여 한타바이러스에 대한 항체검사를 간접형광항체법으로 실시하였다. 결과: 1) 야서 7종 551수와 소형동물 4종 97수를 대상으로 한탄바이러스의 감염율은 등줄쥐 17.2%(29/162), 흰넓적다리붉은쥐 8.7%(2/23), 대륙밭쥐는 25%(2/8), 그리고 땃쥐는 7.1%(1/14)이었다. 그리고 야생토끼는 8.8%(7/80)가 서울바이러스에 대한 항체를 가지고 있었다. 등줄쥐의 양성혈청중 대부분은 서울바이러스와 일부는 푸말라바이러스, 프로스펙트힐바이러스, 뉴욕바이러스와도 교차반응이 있었다. 흰넓적다리붉은쥐 2수와 대륙밭쥐 2수는 5가지 한타바이러스 모두에 교차 반응이 있었다. 2) 다람쥐는 9.5%(28/283)가 채집지역에 관계없이 한탄바이러스에 대한 항체를 가지고 있었고 항체기는 1:16 내지 1:256으로 비교적 낮았으며 서울바이러스, 푸말라바이러스, 프로스켁트힐바이러스와 뉴욕바이러스에 각각 반응하는 것도 일부는 교차반응을 보이는것도 있다. 청설모는 10.3%(7/68)가 한탄바이서르에 대한 항체를 가지고 있었으며 항체가는 1:16 내지 1:1,024이었으며 일부는 교차반응이 있었다. 3) 야생토끼의 서울바이러스에대한 항체양성율은 8.8%(7/80)이었으며 이중에 2수는 한탄바이러스와 교차반응이 있었고, 푸말라바이러스, 프로스켁트힐바이러스, 뉴욕바이러스와는 교차반응이 없었다. 항체가는 1:16 내지 1:64로 비교적 낮았다. 결론:등줄쥐는 한탄바이러스에 의한 감염이지만 흰넓적다리붉은쥐, 대륙밭쥐, 다람쥐 그리고 청설모의 일부는 한탄바이러스가 보다 다른 한타바이러스에 대한 항체가가 높았고 특히 일부 다람쥐 혈청은 푸말라바이러스 혹은 프로스켁트힐바이러스에만 반응하였다. 그리고 야생토끼는 서울바이러스에 대한 감염율이 높은 것으로 보아 국내에 한탄바이러스와 서울 바이러스 이외에 새로운 혈청형의 한타바이러스가 있는 것을 사료된다. Background: Hantavirus are widley distributed in rodents populations even in geographical areas where hemorrhagic fever with renal syndrome(HFRS) has not been reported. Multiple species of Murid and Arvicolid rodents serve as the natural reserviors of hantaviruses. Serologic diagnosis using hantaviral antigens indicates that hantaviruses are widley distibuted in wild rodents. This study were designed to find the distribution of hantaviruses among wild rodents and small mammals in Korea, 1995-1996. Methods: Rodents were trapped alive in selected areas. A total of 551 wild rodents from 7 species and 97 small mammals from 4 species were captured in Korea. Serologic evidence for hantavirus infection were tested using five hantavirus antigens by indirect immunofluorescent antibody technique(IFA). Among 162 Apodemus agrarius, 23 Apodemus peninsulae, 8 Clethrionomys regulus, 6 Microtus fortis, 1 Mus musculus, 283 Tamias sibiricus, 68 Sciurus vulgaris, 14 Crocidura laciura, 80 Lepus sinensis, 2 Capereolus capereolus and 1 Nyctereutes procyonoides. Results: 29 A. agrarius, 2 A. peninsulae, 1 C. laciura, 2 C. regulus, 27 T. sibiricus and 7 S. vulgaris were sero positive agaist hantaan virus and 7 L. sinensis were IF antibody positive against Seoul virus. Some of Tamias sibiricus were only seropositive against puumala virus or prospect hill virus. Conclusion: This data suggests that new serotypes of hantavirus might distribute among rodents in Korea.

Rapid Determining for Subtypes and Pandemic Type of Swine Influenza Virus by Diagnostic One-step RT-PCR

Gwang Il Kim(김광일),Jee In Kim(김지인),Jin-Hyeap Kwon(권진협),Yoo Hong Min(민유홍),Joo Il Kang(강주일),Chang-Ho Lee(이창호),Sung-Hee Kim(김성희),Jae-Hwan Lim(임재환) 한국생명과학회 2018 생명과학회지 Vol.28 No.5

Swine influenza virus (SIV)는 돼지 개체군에서 가장 흔한 질병을 일으키는 바이러스 중 하나이며 그 subtype은 hemagglutinin (HA)와 neuraminidase (NA)에 의해 결정됩니다. 최근 SIV subtype 진단 방법이 개발되고 있으나 SIV의 리보뉴클레오타이드 서열의 많은 변이로 인해 PCR 보다는 항원-항체 반응을 이용하는 방법이 주로 사용되고 있다. 본 연구에서는 SIV 하위 유형의 신속한 결정을 위하여 2008년 이후 국내에서 발생한 SIV의 다중염기서열 정렬을 통하여 10개의 subtype 진단 프라이머 세트를 개발하고 이를 이용한 one-step RT-PCR 반응을 최적화하였다. 또한 감염력이 높고 독성이 있는 인플루엔자 H1N1 (pH1N1)의 아형에서 확인된 독특한 M 유전자 서열을 검출함으로써 pandemic SIV를 조기에 결정하도록 특이적 프라이머를 설계하였다. 2008년부터 2014년까지 한국에서 발생한 9종의 SIV RNA를 활용하여 SIV의 아형 및 pandemic 가능성을 결정하기 위해 시험 분석한 결과 모든 진단 프라이머 세트는 SIV 아형을 정확하게 결정하였으며 pandemic SIV를 검출할 수 있는 것으로 확인되었다. 결과적으로 이들 프라이머 세트를 이용한 최적화된 one-step RT-PCR 분석이 SIV 아형의 신속한 진단에 유용하다는 것이 확인하였다. 이러한 결과는 SIV 하위 유형 및 pandemic SIV가 확산되기 전에 조기 발견을 위한 키트로 개발될 수 있음을 시사한다. Swine influenza virus (SIV) causes one of the most common diseases of the pig population, and its subtypes are determined by hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA). Recently, the SIV subtype diagnosis has been developed. The method using antigen-antibody reaction rather than PCR was mainly used because of the large change in the ribonucleotide sequences of SIV. Here, we have developed 10 diagnostic primer sets through multi-nucleotide sequences alignment of spreaded SIV since 2008 in Korea and then optimized the reaction of the one-step RT-PCR for rapid determination of SIV subtype. In addition, specific primers were designed to early determine the pandemic SIV by detecting unique M sequences proven in highly infectious and virulent subtypes of the influenza H1N1 (pH1N1). Here, some of the SIVs spread in Korea from 2008 to 2014 have been tested to determine the subtypes and pandemic potential of SIV. All diagnostic primer sets were found to be able to accurately determine the SIV subtype and to detect the pandemic SIV. In conclusion, it was confirmed that the optimized one-step RT-PCR analysis using these primer sets is useful for rapid diagnosis of SIV subtypes. These results can be used for development of SIV subtype diagnostic kit to early detect before virulent SIV spreads do.