間接螢光抗體法 및 免疫黃金標識法을 이용한 肝吸蟲組織內 抗原性部位에 관한 硏究

成大林,金洙鎭,嚴基善,林漢鍾 고려대학교 의과대학 1988 고려대 의대 잡지 Vol.25 No.3

Indirect fluorescent antibody test and immunogold labeling method were accomplished to observe the antigenic localization in the tissues of adult Clonorchis sinesis. Immunoglobulins (IgG) for the reaction were obtained from white rats and rabbits, at eight weeks after experimental infection with 50 and 500 metacercariae of C. sinensis, respectively. Frozen sectioned adult worm antigen (8μm) and FITC-conjugated goat anti-rat, rabbit IgG were used for indirect fluorescent antibody test. On the other hand, sectioned tissue antigen embedded in Lowcryl HM 20 medium and secondary antibody protein A gold complex (particle size:12 nm) were used for immunogold labeling method. In the results, fluorescence or gold particle were not observed on the tissue antigens of the worm when reacted with the noninfected control IgG. However, with the infected animal groups IgG, fluorescence or gold particles were observed on the interstitial matrix (body fluid) between the various organs, such as the tegumental cells, parenchyma, testes, receptaculum seminis. And the cecal epithelium including cecal contents and epithelium of excretory bladder also showed strong reaction. Therefore, antigenic materials which stimulate the IgG antibodies against the host were thought to be fluid substances and digestive enzymes or excretory materials which make up the interstitial matrix in the tissues of the worm.

Timoshenko 보 이론을 이용한 층상균열이 있는 보의 진동해석 및 비파괴적 평가

韓秉基,李晟熙,柳澤仁 弘益大學校 科學技術硏究所 1994 科學技術硏究論文集 Vol.5 No.-

A study of the natural vibrations of Timoshenko beam with a split is presented. An analytic model, based on the transverse and longitudinal vibration of beams is employed to determine the natural frequencies. The variations of natural frequencies with the changes of size and location of laminar tear are plotted for several thickness ratio. A specific example are given to show the effects of rotary inertia, and shear deformation on the natural frequencies of the beam with a split. A new skill for the presentation of relationship between the size and location of laminar tear and natural frequencies is presented.

사립체 DNA 뉴클레오타이드 3243 A→G 돌연변이 [MTTL1^*MELAS3243G]에 의한 MELAS 증후군

박기형,김승현,이영주,김희태,김주한,김명호,박성섭 대한신경과학회 1998 대한신경과학회지 Vol.16 No.4

Chinese hamster 난소세포에서 수용성 니켈에 의해 특징적으로 발현되는 유전인자들의 빠른 분석에 관한 연구

성근제,이상한,우기민,송호연,조만희 순천향의학연구소 2001 Journal of Soonchunhyang Medical Science Vol.7 No.2

니켈에 의한 암 발생기전 및 세포 독성기전을 이해하고 니켈에 의해 발현에 변화를 보이는 유전자들을 검출하기 위하여 니켈이 포함된 배지에서 배양된 Chinese hamster난소 세포부터 mRNA differential display 분석을 시행하였다. 본 연구에서는 동위원소나 DNA염기서열 분석용 젤을 사용하는 기존의 방법 대신에 훨씬 빠르고, 다루기 쉽고 안전성을 지닌 변형된 기법을 개발하여 적용하였다. 니켈에 의해 발현에 변화를 보이는 cDNA fragments들을 10% polyacrylamide mini젤상에서 분리 및 클로닝한 다음, DNA염기 서열 분석과 GenBank Blast search 프로그램을 이용하여 상동성 조사를 하였다. Reverse Northern blot을 이용하여 발현에 변화가 있는 cDNA들을 재확인한 결과, 검사된 19 cDNAs 들중 총 9종에서 발현의 변화를 보였으며, 이 중 3종은 니켈에 반응하여 발현에 증가를 보였고, 반면에 6종은 발현이 감소하였다.

보의 층상균열의 위치 및 크기가 진동특성에 미치는 영향

韓秉基,柳澤仁,李晟熙 弘益大學校 科學技術硏究所 1993 科學技術硏究論文集 Vol.3 No.-

This study aims at finding a effect of various position and length of laminar tear on vibrational characteristics on beam including shear deformation. General solution for nonlaminar tear and laminar tear regions are first established. Recurrence equations relating integration constants for adjacent interior regions are established by satisfying continuity conditions at junctions of interior region. The frequency determinant is then obtained by satisfying contiuity conditions at junction between end region and interior regions immediately next to the end region. Numerical results are compared for experimental and references results.

수면무호흡증이 혈압에 미치는 영향

이희상,이성훈,조현상,남궁기,한승진,방승규 大韓神經精神醫學會 1997 신경정신의학 Vol.36 No.1

본 연구에서는 수면무호흡증이 혈압에 미치는 영향을 살펴보고자 하였다. 연구대상은 1995년 1월1일부터 1995년 10월 31일까지 코골기와 수면무호흡 증상으로 인해 연정 뇌기능 수면 연구소에 수면다원검사가 의뢰된 140명의 환자를 대상으로 하였으며 그 중에서 원발성 고혈압을 제외한 심혈관계 질환이 있거나 항고혈압제를 복용하고 있는 환자, 그리고 자료가 불충분하거나 수면무호흡증으로 진단되지 않은 24명을 제외하고 나머지 116명을 최종분석 대상으로 하였다. 이들 대상 환자들로부터 얻은 자료를 수면변수와 호흡변수로 나누어 혈압과의 관계를 Pearson 상관관계와 다중회귀분석을 통해 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 평균 수축기 및 확장기 혈압과 유의한 상관관계가 있는 변수는 수면무호흡의 총시간 및 총횟수, 총수면시간중 평균 혈중산소포화도, 무호흡지수, 중추성 수면무호흡의 총시간 및 횟수, 폐쇄성 수면무호흡의 총시간등 이었다. 2) 다중회귀분석 결과 평균 수축기 및 확장기 혈압에 유의한 영향을 미치는 것으로 나타난 변인은 수면무호흡의 총시간이었으며 이것이 평균 수축기 및 확장기 혈압에 미치는 영향의 도는 각각 7.9%와 6.2%였다. 이상의 결과로 볼 때, 수면무호흡증이 혈압에 미치는 영향은 적은 것으로 나타났으며 무호흡의 유형에 관계없이 수면무호흡의 총시간만이 혈압에 영향을 주는 것으로 나타났다. 그리고 중추성 수면무호흡의 경우 평균 혈중 산소포화도의 감소, 각성에 따른 교감신경계 활성도의 증가이외에도 다른 기전에 의해 혈압 상승이 나타날 가능성이 있을 것으로 생각된다. Objects : This study was conducted to investigate the effects of sleep apnea syndromes on th systemic blood pressure. Methods : The subjects were 140 patients who were consulted to Yon-jung brain function and sleep research center for polysomnography due to snoring and sleep apnea from Jan. 1st 1995 to Oct. 31st 1995. Twenty-four out of 140 were excluded due to cardiovascular diseases other than systemic hypertension, antihypertensive medication, inadequate data or diagnosis other than sleep apnea syndrome. The remaining 116 were accepted as proper subjects. Using Pearson's correlation and multiple regression analysis, we looked for the relationship between sleep and respiratory variables to systemic blood pressure. Results : The results were as follows : 1) According to the correlation analysis, statistically significant variables to mean systolic and diastolic blood pressure were the total time and total number of sleep apnea, degree of oxygen saturation of total sleep time, apnea index, total time and total number of central apnea, and the total time of obstructive apnea. 2) According to the multiple regression analysis, only the total time of sleep apnea significantly affected mean systolic and diastolic blood pressure, and the degrees of affection were 7.9% and 6.2% respectively. Conclusion : these findings showed that sleep apnea syndrome had lower influence over systemic blood pressure than expected and regardless of the type, only the total time of sleep apnea influenced systemic blood pressure. In the case of central apnea, mechanisms other than hypoxemia and the increase of sympathetic activity during arousal may make it possible to increase systemic blood pressure.

Lumbricus rubellus에 존재하는 Lumbrokinase의 Ubiquitin-conjugate 분해활성에 관한 연구

우기민,이상한,조만희 순천향의학연구소 2004 Journal of Soonchunhyang Medical Science Vol.10 No.1

본 연구에서 Lumbricus rubellus에 존재하는 강력한 fibrinolytic 효소인 Lumbrokinse들을 여러 크로마토그래피법을 이용하여 부분정제하고 그들의 생화학적 성질들을 조사하고 비교하였다. L. rubellus의 단백질 추출물은 fibrinogen, lactalbumin, BSA, casein 등 다양한 단백질들을 분해하는 활성을 가졌으며, 그들의 활성은 poly-lysine같은 poly-cation들에 의하여 활성화되었다. 또한 이러한 활성화 정도는 poly-cation들의 길이에 의존적이며 poly-lysine의 경우 이성체에 상관없이 모두 활성화시켰다. DEAE-Sepharose를 통하여 확인된 3 종류의 분해활성으로부터 2 종류의 서로 다른 Lumbrokinse들을 Phenyl-Sepharose, Superose-12 크로마토그래피들을 통하여 부분정제하여 E-I, E-III라고 명명하였다. SDS-PAGE와 gel filtration을 시행하였을 때 그들은 각각 33 kD과 38 kDa의 폴리펩타이드로 구성된 단일체로 규명되었다. E-I의 fibrinogen을 분해하는 특이적 활성은 poly-lysine이 없을 경우 3.75 ng hydrolysis/ng enzyme/20 min으로 상대적으로 낮았으나 poly-lysine이 첨가될 경우 75 ng hydrolysis/ng enzyme/20 min로 활성이 20배가량 증가하였다. 반면 E-III는 poly-lysine이 없을 경우 20 ng hydrolysis/ng enzyme/20 min으로 상대적으로 높았지만 poly-lysine의 첨가시 129 ng hydrolysis/ng enzyme/20 min로 약 6.5배의 증가를 보였다. 0.2 M의 KCI은 poly-lysine에 의한 fibrinogen 분해활성을 강하게 억제하였으며 펩타이드 분해활성은 E-I와 E-III가 서로 다른 영향을 받았다. E-III는 poly-lysine에 의해 증가된 활성이 억제받는 반면, E-I는 오히려 펩타이드 분해활성이 KCI에 의하여 10배가량 증가되었다. 이러한 상반된 결과는 두 효소가 서로 다른 분해기작과 조절기작을 가짐을 의미한다. 정제된 E-I와 E-III는 놀랍게도 ubiquitin이 결합된 일련의 단백질들을 분해하였으며, 이 활성도 또한 poly-lysine에 의하여 증가되었다. 또한 ubiquitin-conjugate의 분해활성은 PMSF에 의하여 억제받으므로 serine계의 단백질 분해효소이며 IAA에 의하여 억제받지 않으므로 활성화 부위에 sulfide 기가 관여하지 않는 것으로 판명되었다. 또한 fibrinogen의 분해에서와 같이 이들의 활성도 KCI에 의해 억제되었다. Ubiquitin-conjugate들은 분해된 후 자유 ubiquitin이 반응산물로 나타났으므로 E-I과 E-III는 포유동물들에 존재하는 ubiquitin C-terminal hydrolase (UCH)의 새로운 종류이거나 26S proteasome을 대신할 수 있는 또 다른 형태의 단백질 분해효소일 가능성을 제공해준다.

Thermoplasma acidophilum의 20S Proteasome에 의한 ATPase-활성적 단백질분해에 관한 연구

우기민,장예진,조만희,김창세,김완종,조성호,이상한 순천향의학연구소 1999 Journal of Soonchunhyang Medical Science Vol.5 No.1

The eukaryotic 26S proteasome is an ATP/ubiquitin-dependent proteolytic complex consisting of the 20S core particle and 19S ATPase complex. However, because of its complexity and unstable properties, this study was carried out to present more simple and stable model for the ATP-activated proteolytic complex in prokaryotes which can take the place of the eukaryotic 26S proteasome. For this purpose, recombinant Thermoplasma 20S proteasome (T20S) and Methanococcus MS4, a sequence homolog of one ATPase subunit in the 19S ATPase complex, were successfully isolated from Escherichia coli (E. coli). The α and β subunits of T20S expressed in E. coli could assemble for themselves, and showed the peptide-hydrolyzing activity. Whereas both T20S and R20S (the 20S complex from rabbit skeletal muscle) had the highest peptidase activity against Suc-LLVY-AMC, a good substrate for chymotrypsin-like peptidase activity, the specific activity of T20S was slightly lower than that of R20S. In addition, several reagents such as KCI, SDS, and ovalbumin were shown to have different effects on the peptidase activities between T20S and R20S. When the ATPase activity of the purified MS4 were assayed , the Km for ATP was about 0.5 mM, and casein could stimulate the activity more than 2 fold without the change in Km. This result implicates that protein-activated ATPase may induce the conformational change of casein, and therefore suggests that MS4 ATPase may activate the proteolytic activity of the 20S proteasome via accelerating the recognition and translocation of the protein substrates.

Lumbricus rubellus의 내열성 지질분해효소에 관한 연구

우기민,이상한,조만희 순천향의학연구소 2004 Journal of Soonchunhyang Medical Science Vol.10 No.1

여러 가지 chromatography법들(anion exchange, hydrophobic interaction, gel filtration)을 이용하여 Lumbricus rubellus로부터 지질분해효소를 정제하였다. 정제된 효소는 SDS-PAGE와 Superose-12 gel filtration을 통하여 32 kDa의 단일체임을 알 수 있었다. 본 연구에서 정제된 Lumbricus rubellus의 지질분해 효소를 Lumpase Ⅰ (Lumbricus + lipase Ⅰ)이라고 명명하였으며, 이 효소는 FDA를 기질로 이용하였을 때 10μM의 높은 친화도를 보였다. 또한 상업적으로 많이 이용되고 상품화된 다른 지질분해효소와 그 특이적 활성을 조사하였을 때, 최소한 200배 이상 높은 단위활성을 가진 것으로 판명되었다. 또한 다양한 기질 특이성을 가져 여러 가지 지질 기질들을 분해하였다. 높은 온도(60℃)에서 Lumpase Ⅰ의 활성을 측정하였을 때, 다른 내열성 지질분해효소처럼 한 시간 이상 그 활성이 잘 나타내어 열에 강한 지질분해효소로 판명되었다. 여러 가지 화학 반응물들의 영향을 조사해 본 결과, Lumpase Ⅰ은 serine을 활성 부위(active site)로 가지고 SDS같은 detergent에 강한 효소로 나타났다. 따라서, 본 연구에서 정제된 Lumpase Ⅰ은 지질분해효소를 이용한 의약산업, 환경산업, 식량산업, 세제 등 다양한 산업분야에 이용가치가 매우 높은 효소로 여겨지며, 지속적인 연구가 진행 중이다.

단백질 및 1가 양이온을 통한 proteasome의 활성조절에 관한 연구

우기민,이상한,조만희 순천향의학연구소 2004 Journal of Soonchunhyang Medical Science Vol.10 No.1

Proteasome은 일반적으로 세포내 환경과 매우 상이한 조건하에서 연구된다 (실험용 완충액에는 1기가 이온들이나 여러 단백질들이 결여되어 있다). 특이하게도 본 연구결과 낮은 농도의 Na^(+)와 K^(+)는 20S proteasome의 단백질 분해 활성을 현저히 저하시키지만 26S proteasome의 단백질 분해 활성에는 크게 영향을 미치지 못하였다. Na^(+)와 K^(+)는 20S proteasome의 chymotrypsin 유사 분해활성을 1-2 mM의 Ki 값으로 매우 민감하게 억제하였다. 이에 비해 기타 다른 1가 양이온 (Li^(+), Rb^(+), 또는 Cs^(+))은 미미한 억제효과를 나타내고, 2가 양이온 (Mg^(2+))은 20S proteasome의 chymotrypsin 유사 분해활성을 오히려 활성화시켰다. 이러한 이온들은 trypsin 유사 활성과 post-acidic 활성에도 유사한 억제효과를 보였다. 또한, Na^(+)와 K^(+)는 20S proteasome에 의한 casein, oxidized RNase A, a-lactalbumin 같은 단백질들의 분해를 강력하게 억제시키지만, 26S proteasome에 의한 ATP-의존적 단백질 분해 활성에는 영향을 미치지 못한다. 일반적으로 세포내 단백질농도는 매우 높은 것으로 알려져 있는 바, proteasome의 분해활성에 미치는 단백질의 영향을 조사한 결과, 무작위의 다양한 단백질들(0.1㎎/㎖)도 1가 양이온(Na^(+)와 K^(+))의 경우와 같이 20S proteasome의 펩타이드 분해활성을 억제하였지만 26S proteasome의 활성에는 아무런 영향을 미치지 않았다. 이러한 억제작용은 경쟁적이지 않다. BSA나 ovalbumin 같은 비가수분해 단백질들이 20S proteasome의 펩타이드 분해활성을 강력히 억제한였으므로 이러한 억제현상이 비경쟁적이라는 것을 알 수 있다. 비록 Na^(+), K^(+)와 단백질들이 20S proteasome을 비활성화 형태로 유지시키지만, 0.02% SDS에 의한 20S proteasome의 활성증가를 막거나 억제시키지는 못하였다. 이 결과로 고농도의 이온과 단백질이 존재하는 세포내 조건에서는, 독립적인 20S proteasome은 잠재적으로 비활성화된 형태로 존재하며, 19S ATPase 복합체나 11S 같은 proteasome 활성복합체가 결합한 후에 비로소 26S proteasome의 활성화된 형태로 전환되는 기작을 갖는 것으로 여겨진다. 또한, Na^(+)나 K^(+), BSA나 ovalbuim의 첨가는 비활성화 형태의 20S proteasome을 이용한 많은 연구를 보다 용이하게 할 것으로 기대된다.