Corynebacterium glutamicum hisD 유전자의 분자적 클로닝

천재연,이명석 숙명여자대학교 자연과학연구소 1999 자연과학논문집 Vol.- No.10

Corynebacterium glutamicum의 DNA library를 이용하여 Escherichia coli histidine 영양요구균주에 Complementation하는 방법으로 hisD 유전자를 클로닝하였다. E. coli argD mutant에 complementation하는 6.8 kb와 4.0 kb fragment를 포함하는 recombinant DNA를 pHDl와 pHD2로 명명하고 여러 가지 제한효소들로 제한효소지도를 작성하였다. pHDl와 pHD2의 overlap되는 4.0 kb fragment 부위가 bifunctional enzyme 인 histidinol dehydrogenase를 암호화 하는 hisD 유전자를 포함함을 알 수 있었다. Histidinol dehydrogenase를 암호화 하는 hisD 유전자들의 위치를 결정하는데 있어서 DNA 조각을 subcloning하고 형질 전환하여 hisD 유전자들의 최소단위는 BamHI-Kpnl 1.5kb를 포함하는 pHD23임을 확인하였다. Complementation cloning of the hisD gene in Corynebacterium glutamicum was done by transforming the genomic DNA library into the corresponding histidine auxotrophs of Escherichia coli Recombinant plasmids containing 6.8 kb and 4.0 kb fragments were also able to complement the E. coli hisD mutant. The insert DNA fragments in the recombinant plasmids, named pHD1 and pHD2, were physically mapped with several restriction enzymes. By further subcloning the entire DNA fragment containing the function and by complementation analysis, we located the hisD gene of C. glutamicum on the 1.5 kb BamHI-KpnI pHD23 fragment.

Corynebacterium glutamicum의 arginine 생합성 관련 유전자에 관한 연구

천재연,이명석 숙명여자대학교 자연과학연구소 1996 자연과학논문집 Vol.- No.7

Corynebacterium glutamicum의 DNA library를 이용하여 Escherichia coli arginine 영양요구균주에 complementation하는 방법으로 argC, E, D, F, A유전자를 cloning하였다. E. coli argB mutant에 complementation하는 6.7 kb와 4.8 kb fragment를 포함하는 recombinant DNA가 E. coli argC, E, A, D와 F에 역시 complementation하였고, 유전자들이 cluster를 이루고 있음을 알 수 있었다. pRB1와 pRB2로 명명된 recombinant DNA를 여러 가지 제한효소들로 제한효소지도를 작성하였다. 각 유전자들의 위치를 결정하는데 있어서 DNA조각을 subcloning하고 형질 전환하여 각 유전자의 순서는 argCEBDF로 결정하였다. 여기서 argE의 염기서열을 결정하였고, 다른 균주와의 sequence homelogy조사에 의해 우리가 클로닝한 argE가 argJ유전자이며 ornithine acetyltransferase를 암호화함을 알 수 있었다. 이미 보고된 ArgJ protein의 아미노산 서열과 homology를 조사한 결과 B.stearothermophilus와 B.substilus의 ArgJ protein과 각각 37%, 38%의 높은 homology를 보여 주었고, Neisseria gonorrhoeae와 Saccharomyces cerevisiae와는 각각 38%, 37%의 homology를 보였다. 본 연구의 최종목표는 C. glutamicum의 유전자 조작을 통해 arginine을 더 많이 생산하는데 있다. Complementation cloning of the argC,E, B, D, F, and G genes in Cornebacterium glutamicum was done by transforming the genomic DNA library into the corresponding arginine auxotrophs of Escherichia coli. Recombinant plasmids containing 6.7kb and 4.8kb fragments complementing the E.coli argB mutant were also able to complement the E. coli argC, E, A, D, and F mutants, indicating the clustered organization of the arginine biosynthetic genes within the cloned DNA fragments. The insert DNA fragments in the recombinant plasmids, named pRB1 and pRB2, were physically mapped with several restriction enzymes. By further subcloning the entire DNA fragment containing the functions and by complementation analysis, we located the arg genes in the order of ACEBDF on the restriction map. We also determined the DNA nucleotide acetyltransferase. Deduced amino acid sequence of the argJ gene shows 37%, 38%, 38%, and 37% identity to that from Bacillus strearothermophilus, Bacillus substilus, Neisseria gonorrhoeae, and Saccharomyces cerevisiae respectively.

Corynebacterium glutamicum hisD유전자의 염기서열 결정과 유사성 분석

천재연,이명석 숙명여자대학교 자연과학연구소 2002 자연과학논문집 Vol.- No.13

Corynebacterium glutamicum의 DNA library를 이용하여 Escherichia coli histidine 영양요구 균주에 complementation하는 방법으로 hisD유전자를 클로닝하였다. E. coli argD mutant에 complementation하는 6.8 kb와 4.0 kb fragment를 포함하는 recombinant DNA를 pHD1와 pHD2로 명명하고 여러 가지 제한효소들로 제한효소지도를 작성하였다. pHD1와 pHD2의 overlap되는 4.0 kb fragment부위가 bifunctional enzyme인 histidinol dehydrogenase를 암호화하는 hisD 유전자를 포함함을 알 수 있었으며, 제한효소지도를 이용하여DNA 조각을 subcloning하고 형질 전환하여 hisD 유전자의 최소단위는 BamHI-KpnI 1.5 kb를 포함하는 pHD23임을 확인하였다. 염기서열 결정결과 pHD23은 1,299 bp의 ORF를 가지며 432개의 아미노산으로 구성된 분자량 46 kDa의 polypeptide를 암호화암을 알 수 있었다. 또한 이 유전자는 Gram-positive bacteria의 Mycobacterium tuberculosis의 hisD유전자와 61%로 높은 유사성을 보인다. Complementation cloning of the hisD gene in Corynebacterium glutamicum was done by transforming the genomic DNA library into the corresponding histidine auxotrophs of Escherichia coli. Recombinant plasmids containing 6.8 kb and 4.0 kb fragments were also able to complement the E. coli hisD mutant. The insert DNA fragments in the recombinant plasmids, named pHD1 and pHD2, were physically mapped with several restriction enzymes. By further subcloning the entire DNA fragment by their complementation analysis, we identified the hisD gene of C. glutamicum on the 1.5 kb BamHI-KpnI pHD23 fragment. The length corresponding to the ORF of hisD was 1,299 bp and it contained 432 amino acid with a molecular weight of 46 kDa.

Corynebacterium glutamicum에서 hisI 유전자의 분자적 클로닝

천재연,이명석 숙명여자대학교 자연과학연구소 2000 자연과학논문집 Vol.- No.11

Corynebacterium glutamicum의 DNA library를 이용하여 Escherichia coli histidine 영양요구균주에 complementation하는 방법으로 hisI 유전자를 클로닝하였다. E. coli hisI mutant에 complementation하는 7.8 kb와 6.0 kb fragment를 포함하는 recombinant DNA를 pHI1와 pHI2로 명명하고 여러 가지 제한효소들로 제한효소지도를 작성하였다. pHI1와 pHI2의 overlap되는 4.Okb fragment 부위가 phosphoribosyl-AMP cyclohydrolase를 암호화하는 hisI 유전자를 포함함을 알 수 있었다. phosphoribosyl-AMP cyclohydrolase를 암호화하는 hisI 유전자의 위치를 결정하는데 있어서 DNA조각을 subcloning하고 형질 전환하여 hisI 유전자의 최소단위는 PstI-HindIII 1.8kb를 포함하는 pHI12임을 확인하였다. Complementation cloning of the hisI gene in Corynebacterium glutamicum was done by transforming the genomic DNA library into the corresponding histidine auxotrophs of Escherichia coli. Recombinant plasmids containing 7.8 kb and 6.0 kb fragments were also able to complement the E. coli hisI mutant. The insert DNA fragments in the recombinant plasinids, named puIl and pHI2, were physically mapped with several restriction enzymes. By further subcloning the entire DNA fragment containing the function and by complementation analysis, we located the hisI gene of C. glutamicum on the 1.8kb PstI-HindIII pHI12 fragment.

Corynebacterium glutamicum hisI 유전자의 염기서열 결정과 유사성 분석

천재연,이명석 숙명여자대학교 자연과학연구소 2002 자연과학논문집 Vol.- No.13

Corynebacterium glutamicum의 DNA library를 이용하여 Escherichia coli histidine 영양요구 균주에 complementation하는 방법으로 hisI 유전자를 클로닝하였다. E. coli hisI mutant에 complementation하는 7.8 kb와 6.0 kb fragment를 포함하는 recombinant DNA를 pHI1와 pHI2로 명명하고 여러 가지 제한효소들로 제한효소 지도를 작성하였다. pHI1와 pHI2의 overlap되는 4.0 kb fragment 부위가 phosphoribosyl-AMP cyclohydrolase를 암호화하는 hisI 유전자를 포함함을 알 수 있었으며, 제한효소 지도를 이용하여 DNA 조각을 subcloning하고 형질 전환하여 hisI 유전자의 최소단위는 PstⅠ-HindⅢ 1.8 kb를 포함하는 pHI11임을 확인하였다. 염기서열 결정결과pHI1은 357 bp의 ORF를 가지며 118개의 아미노산으로 구성된 분자량 13 kDa의 polypeptide 를 암호화암을 알 수 있었다. 또한 이 유전자는 Gram-positive bacteria의 Mycobacterium tuberculosis의 hisI 유전자와 71%로 높은 유사성을 보인다. Complementation cloning of the hisI gene in Corynebacterium glutamicum was done by transforming the genomic DNA library into the corresponding histidine auxotrophs of Escherichia coli. Recombinant plasmids containing 7.8 kb and 6.0 kb fragments were able to complement the E. coli hisI mutant. The insert DNA fragments in the recombinant plasmids, named pHI1 and pHI2, were physically mapped with several restriction enzymes. By further subcloning of the entire DNA fragment and by their complementation analysis, we identified the hisI gene of C. glutamicum to the 1.8 kb PstⅠ-HindⅢ pHI12 fragment. The length corresponding to the ORF of hisI was 357 bp and it contained 118 amino acid with a molecular weight of 13 kDa.

효모의 DNA topoisomerase Ⅰ 발현 프라스미드 제작과 세포내 발현

황춘홍,이명석 숙명여자대학교 자연과학연구소 1995 자연과학논문집 Vol.- No.6

DNA topoisomerase는 세포내 전사에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae에서 DNA topoisomerase I을 과량 발현하기 위해 recombinant plasmid 제작과 세포내 발현을 시도하였다. Single-copy의 YCp plasmid와 galactose-inducible promoter를 가진 YEp multi-copy plasmid에 정상의 TOPI과 돌연변이형의 topI 유전자를 서브클로닝하였다. YEp와 YCp에 존재하는 TOPI 유전자의 발현정도를 알기 위해 exogenous supercoiled plasmid를 세포추출물에 넣어 in vitro relaxation activity를 측정하여 비교하였다. 그 결과 YCp에 존재하는 TOPI의 발현이 상대적으로 높게 나타났고 세포의 성장도 저해되었다. 돌연변이형의 topI 유전자를 plasmid에 갖는 세포는 relaxation activity가 가장 낮았다. Constitutive promoter를 갖는 plasmid vector에 야생형의 TOPI과 돌연변이형의 topI 유전자를 서브클로닝하여 같은 방법으로 발현정도를 비교한 결과, YEp에서 효소활성이 높았으나 inducible promoter보다는 낮았다. 이러한 결과는 DNA topoisomerase I 과량발현이 세포내 general transcription initiation을 억제하여 세포성장을 저해할 가능성을 시사하고 있다. DNA topoisomerases are known to be involved in regulation of gene expression. To characterize the enzyme, we have overexpressed the DNA topoisomerase I of Saccharomyces cerevisiae. We have constructed and transformed several recombinant plasmids into yeast cells. These plasmids carry galactose-incucible promoter in multi- and single-copy forms, and constituitively expressible original promoter in the above two forms. We have tested the level of relaxation of the supercoiled plasmids that are added exogenously in the yeast extracts to compare TOPI expression between the YEp and YCp containing cells. Based on the relaxation activity of supercoiled plasmids in cell extracts of various conditions. we found that the TOPI gene carrying galactose-inducible promoter in a single copy form was expressed at a higher level compared to the others. Furthermore, growth of theses cells was slightly inhabited compared to that of the wild type, suggesting that overexpression of the enzyme could inhibit general transcription of most genes in vivo.

환경문제의 국제화와 그린라운드의 전개

신진,오정진,이명석 숙명여자대학교 환경과학연구소 1995 환경과학 Vol.2 No.-

Low doses of ionizing radiation suppress doxorubicin-induced senescence-like phenotypes by activation of ERK1/2 and suppression of p38 kinase in MCF7 human breast cancer cells

신재식,우상혁,이형찬,홍승우,유두현,홍석일,이왕재,이명석,진영우,안성관,진동훈,박인철 Sookmyung Women's University Research Institute of 2010 여성과 건강 Vol.6 No.1

The role of hLHX6-HMR as a methylation biomarker for early diagnosis of cervical cancer

정삼일,정동준,김진선,Lisha Yi,구근호,이재혁,이순덕,박진화,BOOGI CHANG,김창환,김창진,이명숙 Sookmyung Women's University Research Institute of 2010 여성과 건강 Vol.6 No.1

Low doses of ionizing radiation suppress doxorubicin-induced senescence-like phenotypes by activation of ERK1/2 and suppression of p38 kinase in MCF7 human breast cancer cells

신재식,우상혁,이형찬,홍승우,유두현,홍석일,이왕재,이명석,진영우,안성관,진동훈,박인철 Sookmyung Women's University Research Institute of 2010 여성과 건강 Vol.6 No.1