변수 분석을 통한 아토카푸스 니티두스 추출물과 분획물의 항산화, 타이로시나제 및 콜라제나제 In Vitro 저해활성 연구

손광희 ( Kwang-hee Son ),김영국 ( Young Kook Kim ),최상호 ( Sangho Choi ),장지운 ( Zhiyun Zhang ),신동하 ( Dong-ha Shin ),이종석 ( Jong Suk Lee ),박호용 ( Ho-yong Park ) 대한화장품학회 2019 대한화장품학회지 Vol.45 No.2

본 연구에서는 아토카푸스 니티두스의 용매추출물 및 실리카 컬럼 분획물의 항산화 활성, 콜라제나제 저해활성 및 미백활성을 평가하였다. In vitro 실험의 활성 분석은 sigmoid 곡선형 반응에 적합한 4 매개변수회귀곡선 분석(4 parameter logistic, 4PL)을 활용하여 정량화 하였다. HPLC와 LC/MS 분석에 따르면 아토카푸스 분획물은 폴리페놀류가 주성분이었으며, 추출물의 총 폴리페놀의 함량은 갈릭산 기준 48.1 ± 2.6 mg GAE/g 이었다. 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 소거활성을 평가한 결과, 용매추출물, 분획물-1과분획물-2는 각각 16.7, 42.0 및 10.1 μg/mL의 농도에서 50%의 라디칼 소거활성(SC₅₀)을 보였고, 분획물-2는양성 대조구 ascorbic acid (1.5 μg/mL)에 가장 근접한 활성을 보였다. Tyrosinase 저해활성은 추출물과 분획물 2종이 각각 64.9, 0.9 및 1.2 μg/mL의 IC₅₀를 보여 대조구인 코직산(7.4 μg/mL) 및 알부틴(119.0 μg/mL) 대비 전반적으로 높은 활성을 보였다. 제브라피쉬 배아를 이용한 색소침착도 억제활성에서는 분획물-2(27.5%)가 대조구인 코직산(18.6%) 대비 유의하게 미백활성 결과를 보였으며 동시에 500 μg/mL까지 배아 생장에 영향이 없음을 확인하였다. 아토카푸스 추출물과 분획물-1 및 분획물-2는 콜라제나제 저해활성에서 각각 139.8, 20.6, 및 16.8 μg/mL의 IC₅₀를 보여, 대조구인 1, 10-Phenanthroline (55.4 μg/mL) 대비 우수한 활성을 보였다. 추출물과 분획물-2에 대한 엘라스타제 저해활성은 각각 61.8과 67.1 μg/mL으로 암라 및 사포타 추출물과 유사한 활성 범위를 보여주었다. 이상의 결과는 아토카푸스 추출물이 항산화, 미백 및 피부노화 방지에 유용한 폴리페놀계 화장품소재로 활용이 가능하며, 추출물-2는 고농도에서도 안전함을 시사한다. In this study, the antioxidative and inhibitory activity of tyrosinase and collagenase for the solvent extract and silica column fractions of Artocarpus nitidus were evaluated. The activities were quantified using the 4 parameter logistic. LC/MS analysis showed that the major component of the fractions was polyphenol and the total polyphenol content of the extract was 48.1 ± 2.6 mg GAE/g. The radical scavenging activities (SC₅₀) for 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl of the extract, fraction-1 and fraction-2 were 16.7, 42.0 and 10.1 μg/mL, respectively. The value for fraction-2 was the closest to ascorbic acid (1.5 μg/mL). The tyrosinase inhibitory activity of the extracts and the fractions showed IC₅₀ of 64.9, 0.9 and 1.2 μg/mL, respectively, and overall activity was higher than that of kojic acid (7.4 μg/mL) and arbutin (119.0 μg/mL). In the experiment by zebrafish embryo, the whitening activity of fraction-2 (27.5%) was higher than that of kojic acid (18.6%), and there was no adverse effect up to 500 μg/mL of fraction-2. For the collagenase inhibitory activity, the samples showed IC₅₀ of 139.8, 20.6, and 16.8 μg/mL, respectively, which were competitive to 1, 10-Phenanthroline (55.4 μg/mL). The extract and fraction-2 showed IC₅₀ of 61.8 and 67.1 μg/mL for elastase. These results suggest that A. nitidus extract can be used as a cosmetic material useful for antioxidant, whitening, and prevention of skin aging without adverse effects.

기능적 다리 길이 차이가 압력 중심점과 안정성 한계에 미치는 영향

조아라,손광희,이유리,하민주,민지원,구현모,Jo, A-Ra,Min, Ji-Won,Son, Kwang-Hee,Lee, Yu-Ri,Ha, Min-Ju,Koo, Hyun-Mo 대한고유수용성신경근촉진법학회 2014 PNF and Movement Vol.12 No.4

Purpose: The purpose of this study was functional leg length inequality effect on COP(Center Of Pressure) and LOS(limits Of Stability) and EMG activation. Methods: The participants were consisted of fourteen. Subjects were distributed 2 groups; control group, leg length inequality ${\leq}3mm$, n=8), experimental group(leg length inequality${\geq}10mm$, n=8). The participants were measured leg length wearing comfortable clothes through tape measure method(TMM). All subjects was measured COP(Center Of Pressure), LOS(limits of stability) using by Balance Trainer BT4(HUR, Finland). Results: The results COP was not exist statistical significant differences(p>0.05). LOS was not exist statistical significant difference(p>0.05). Conclusion: The results was not statistical significant differences COP and LOS depending on Leg Length Inequality. But between experimental group and comparison group was exist mean differences on COP, LOS(COP:Ex.>Com, LOS:Ex. <Com/excepted some data). Somewhat COP and LOS was affected on by Leg Length Inequality. Balance is affected on Leg Length Inequality partly.

제품 및 기술 개발을 고려한 중소기업 마케팅 정보 제공 전략

이창수(Changsoo Lee),손광희(Kwang-Hee Son),정창환(Changhwan Chung) 한국전자거래학회 2008 한국전자거래학회 심포지움 및 기타간행물 Vol.- No.-

상당수의 중소기업은 자체 마케팅 역량이 부족하여 제품 및 기술 개발에 있어서 초기부터 마케팅 활동을 충분히 수행하고 있지 못한 경우가 많다. 본 논문은 이러한 문제를 해결하기 위해 원료 공급에서부터 가공, 아웃소싱, 판매, 협업에 이르는 제품 생산 활동의 각 단계마다 적절한 마케팅 지향 정보가 제공되도록 공공 서비스 제공 전략을 제시한다. 또한 제품 정보, 시장 정보, 기술 정보로 구성된 마케팅 지향형 정보 제공 시스템의 프로토타입을 제시한다. Many SME have difficulties in marketing activities from early product and technology development because of lack of internal marketing abilities. This paper presents the strategy for the public information service providing so that the marketing oriented information system should provide appropriate information in every step of production from raw material procurement, processing, outsourcing, sales to collaboration. A prototype of marketing information system is implemented in terms of product information, market information, technology information and enterprise information.

항진균물질 KRF-001의 고생산성 변이주 분리

이항우(Hang-Woo Lee),김무경(Moo-Kyung Kim),김성욱(Sung-Uk Kim),손광희(Kwang-Hee Son),복성해(Song-Hae Bok) 한국생물공학회 1994 KSBB Journal Vol.9 No.4

꿀벌(Apis mellifera)의 장내 세균인 Bacillus sp. HY-20이 분비하는 Xylanase의 특성

이란희,김도영,한미경,오현우,함수진,박두상,배경숙,석대은,신동하,손광희,박호용,Lee, Lan-Hee,Kim, Do-Young,Han, Mi-Kyoung,Oh, Hyun-Woo,Ham, Su-Jin,Park, Doo-Sang,Bae, Kyung-Sook,Sok, Dai-Eun,Shin, Dong-Ha,Son, Kwang-Hee,Park, Ho-Yong 한국미생물학회 2009 미생물학회지 Vol.45 No.4

꿀벌(Apis mellifera)의 장으로부터 xylan분해능이 우수한 세균 HY-20을 분리하였고, Bacillus 속으로 동정하였다. 분리균주 HY-20의 세포 외 GH11 xylanase (XylP) 유전자 (687-bp)는 25,522 Da의 분자량과 9.33의 pI 값을 갖는 228개의 아미노산으로 구성된 단백질을 인코딩하는 것으로 확인되었으며, 지금까지 특성규명이 이루어지지 않은 B. pumilus xylanase (GenBank accession no.: AY526092)의 아미노산 서열과 97%의 상동성을 보였다. pET-28a(+)/xylP를 포함하고 있는 Escherichia coli BL21 균주에서 과발현 된 His-tagged XylP (rXylP)는 cation exchange 및 gel permeation chromatography를 통해 순수하게 분리 정제 되었으며, $50^{\circ}C$의 온도와 pH 6.5 조건에서 반응할 때 birchwood xylan에 대해 가장 높은 가수분해 활성을 나타내었다. rXylP는 15분간 $55^{\circ}C$에 노출될 때 본래 활성의 약 50%를 잃어버리는 전형적인 중온성 효소의 특성을 보였으며, $Hg^{2+}$ (1mM)와 N-bromosuccinimide (5mM)에 노출될 때 완전히 불활성화 되었고, $Mn^{2+}$ (1 mM), $Fe^{2+}$ (1mM) 및 sodium azide (5 mM)에 의해서는 활성이 약 10% 증가될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 한편, rXylP는 xylose유래 다당류는 효율적으로 분해하였지만 PNP-sugar 유도체 및 glucose 유래 다당류는 분해하지 못하였다. A xylan-decomposing bacterium, HY-20, was isolated from the gut of a honeybee, Apis mellifera, and identified as Bacillus sp. The extracellular GH11 xylanase (XylP) gene (687-bp) of strain HY-20 encoded a protein of 228 amino acids with a deduced molecular mass of 25,522 Da and a calculated pI of 9.33. The primary structure of XylP was 97% identical to that of B. pumilus xylanase (GenBank accession no.: AY526092) that has not been characterized yet. The recombinant His-tagged enzyme (rXylP) overexpressed in Escherichia coli BL21 harboring pET-28a(+)/xylP was purified to electrophoretic homogeneity by cation exchange and gel permeation chromatographies. The purified enzyme exhibited the highest catalytic activity toward birchwood xylan at pH 6.5 and $50^{\circ}C$ and retained approximately 50% of its original activity when pre-incubated at $55^{\circ}C$ for 15 min. The recombinant enzyme was completely inactivated by $Hg^{2+}$ (1 mM) and N-bromosuccinimide (5 mM), while its activity was slightly stimulated by approximately 10% in the presence of $Mn^{2+}$ (1 mM), $Fe^{2+}$ (1 mM), and sodium azide (5 mM). rXylP was able to efficiently degrade various polymeric xylose-based substrates but PNP-sugar derivatives and glucose-based polymers were not susceptible to the enzyme.

Efficient Secretory Expression of Recombinant Endoxylanase from Bacillus sp. HY-20 in Saccharomyces cerevisiae

Min-Ji Kim(김민지),Bo-Hyun Kim(김보현),Soo-Wan Nam(남수완),Eui-Sung Choi(최의성),Dong-Ha Shin(신동하),Han-Young Cho(조한영),Kwang-Hee Son(손광희),Ho-Yong Park(박호용),Yeon-Hee Kim(김연희) 한국생명과학회 2013 생명과학회지 Vol.23 No.7

Bacillus sp. HY-20균주 유래 endoxylanase를 코드하는 XylP 유전자를 효모에서 발현시키기 위해 두 개의 발현 플라스미드 pG-xylP와 pGMF-xylP를 구축하였다. 이들 플라스미드는 endoxylanase의 분비발현을 위해 각각 다른 분비서열인 XylP 유전자의 자체 분비서열(XylP s.s)과 최적화된 MFα 분비서열(MFα_opt s.s)을 가지고 있으며, S. cerevisiae SEY2102와 FY833균주에 형질전환되어 그 분비활성이 비교 조사되었다. 재조합 endoxylanase는 분비발현시스템과 숙주세포에 따라 23.7~70.1 unit/ml의 활성으로 효모 세포에서 성공적으로 발현되었고, 그 중 SEY2102/pGMF-xylP 형질전환주를 이용해 baffled-flask 배양을 실시한 결과 최대 88.1 unit/ml의 endoxylanase 활성을 보임을 확인하였다. 대부분의 재조합 endoxylanase는 세포 외 분획에 효율적으로 분비 생산되었으며, MFα_opt 분비서열이 XylP 유전자의 자체 분비서열보다 endoxylanase를 더 효율적으로 분비시킴을 확인할 수 있었다. 그러므로 본 연구에서 개발된 발현시스템은 효모를 숙주세포로 하여 많은 양의 세포 외 endoxylanase의 생산을 가능하게 하고, 바이오에탄올 생산 및 산업적 응용에도 유용하게 사용 될 수 있으리라 기대된다. The XylP gene, which encodes endoxylanase in Bacillus sp. HY-20, was subcloned, and two expression plasmids, pG-xylP and pGMF-xylP were constructed. These plasmids, which contain different signal sequences, XylP s.s and MFα_opt s.s, respectively, for the secretory expression of endoxylanase, were transformed into Saccharomyces cerevisiae SEY2102 and FY833, respectively. The recombinant endoxylanases were successfully expressed, with a total activity range of 23.7-70.1 unit/ml according to the expression system and host strain. The endoxylanase activity in SEY2102/pGMF-xylP reached a maximum of 88.1 unit/ml in baffled flask culture. Most of the recombinant endoxylanase was efficiently secreted in the extracellular fraction, and the MFαopt s.s was more efficient for secreting endoxylanase in yeast than the XylP s.s. Therefore, the expression system developed in this study produces large extracellular amounts of endoxylanase using S. cerevisiae as the host strain, and it could be used in bioethanol production and industrial applications.

Bacillus subtilis subsp. krictiensis로부터 항진균물질 KRF-001의 생산을 위한 발효조건 및 돌연변이 연구

손광희,권혜경,이항우,복성해 한국산업미생물학회 1991 한국미생물·생명공학회지 Vol.19 No.6

토양세균 B. subtilis subsp. krictiensis로부터 항진균활성물질 KRF-001 복합체를 생산하기 위한 발효조건을 조사하였다. Whey와 mannitol 등이 탄소원으로, CSL, corn gluten meal 그리고 polupeptone이 복합질소원으로 좋았다. 중온균인 생산균은 중성 pH 조건에서 P. oryzae에 대한 bioactivity가 가장 높았으며, 0∼10% DO의 낮은 용존산소 조건에서도 bioactivity가 유지되었다. 인산염의 농도가 K_2HPO_4, 0.047%에서 0.097%로 높아짐에 따라 1/2의 bioactivity 감소가 관찰되었다. 한편 UV 및 MNNG에 의한 돌연변이에 의해 우수균주 3개를 선별하였다. Antifungal compound, KRF-001, was produced by Bacillus subtilis subsp. krictiensis isolated from soil. Physico-chemical factors affecting cell growth and bioactivity were examined to improve the production yield. Nutrient composition, temperature, pH and phosphate ion concentration were proved to be important factors for the production of KRF-001. Mutation was performed to select high yielding strains. First, mutation was performed with ultra-violet light, and the second mutation process was conducted by MNNG(N-Methyl-N'-nitro-N-nitroso-guanidine) resulting in three high yielding strains.

Aspergillus candidus F1484 균주가 생산하는 항진균 화합물의 분리 및 특성

김성옥,이소영,김성규,손광희,김영국,문석식,복성해 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.5

Candida albicans의 효모형태에 대해 활성을 나타내는 항진균 물질의 탐색 중에 Aspergillus candidus F1484 균주의 발효액으로부터 항진균 화합물 F1484를 단리하고 ethyl acetate 추출, silica gel column chromatography, ODS column chromatography 및 preparative HPLC를 행하여 분리정제하였다. F1484 화합물은 EI-MS, ^13C-, ^1H-NMR, DEPT, HMQC 및 HMBC에 의한 구조분석을 행한 결과 이 화합물은 항진균 물질인 chloroflavonin과 동일한 구조를 나타내었으며 효모형태의 Candida albicans에 대한 항진균 활성뿐만 아니라 여러 종류의 인체 종양 세포주에 대해서도 세포독성을 나타내었다. In the course of screening for the antifungal compounds against Candida albicans, an antifungal compound (F1480) was isolated from the culture broth of Aspergillus candidus F1484. Isolation and purification of compound F1484 were performed using ethyl acetate extraction, silica gel column chromatography, ODS column chromatography, and preparative HPLC. The structure of compound F1484 was determined by the spectroscopic analyses of EI-MS, ^13C-, ^1H-NMR, DEPT, HMQC, and HMBC. This compound appeared to have a structure of antifungal agent, chloroflavonin. In addition to antifungal activities against the yeast phase of Candida species, compound F1484 showed cytotoxic effect against various human tumor cell lines.

토양으로부터 Candida albicans의 균사형태에 선택적인 활성을 나타내는 미생물로부터 항진균 물질의 탐색

김성욱,남지연,권병목,손광희,복성해 한국산업미생물학회 1995 한국미생물·생명공학회지 Vol.23 No.2

Candida albicans의 dimorphic 현상을 이용하여 C. albicans의 위상균사 형태에서만 항진균 활성을 나타내는 물질을 탐색하고 개발하기 위하여 토양으로부터 분리한 약 2,900여종의 미생물을 대상으로 항진균 활성을 조사하여, C. albicans의 위상균사 형태에서만 항진균 활성을 나타내는 한 균주를 선별하고 Streptomyces sp. A393으로 동정하였다. Streptomyces sp. A393 균주가 생산하는 화합물의 분리와 정제는 XAD-7, silica gel, preparative TLC 및 HPLC로 행하였으며 분자량은 774, 790, 804, 820이었다. 이 화합물은 macrolide 항생물질인 oligomycin A, B, C, E와 동일한 구조를 나타내었으나 항진균 활성을 나타내지 않는 것으로 보고된 oligomycine E는 위상균사 형태의 평판에서 항진균 활성(6∼25 ㎍/㎖)을 나타내었다. To search and develop the compounds exhibiting antifungal activities against the mycelial phase of Candida albicans, approximately 2,900 microorganisms isolated from soil were examined for antifungal activity. Among them, a strain with preferential activity against the mycelial phase of Candida albicans was isolated and identified as Streptomyces sp. A393. Isolation and purification of compounds A393 showing antifungal activity against the mycelial phase C. albicans were performed using XAD-7 column chromatography, silica gel chromatography, preparative thin layer silica gel chromatography, and HPLC. The molecular weights of compounds isolated from Streptomyces sp. A393 were determined as 774, 790, 804 and 820. These compounds appeared to have a structure of macrolide antibiotics, oligomycin A, B, C and E. Especially, oligomycin E. which is formerly reported to have no antifungal activity, showed antifungal activity against the mycelial phase of Candida albicans.

토양으로부터 ACAT 저해활성을 나타내는 미생물의 탐색과 방선균이 생산하는 ACAT 저해물질, AI-3의 특성

정태숙,김성욱,이항우,손광희,권용국,최명언,복성해 한국산업미생물학회 1993 한국미생물·생명공학회지 Vol.21 No.6

토양으로부터 분리한 1,300여 균주 중 50% 이상 ACAT 저해 활성을 나타내는 경우는 방선균 605균주로부터 4.0%, 곰팡이 500여 균주로부터 3.6%였으며, 세균 172균주로부터는 50% 이상 저해활성을 나타내는 것이 없어 좋은 대조를 이루었다 .이중 강한 ACAT 저해활성을 나타내는 생산균주 Streptomyces sp. A-3 배양액으로부터 XAD-7 column, silica-gel column, sephadex LH-20 column chromatography 및 역상 HPLC를 이용하여 활성저해물질(AI-3)을 분리·정제 하였다. AI-3를 UV, IR, FAB-MS, NMR을 통해 분석한 결과 분자량이 465이며, skin tumor promoter로 알려진 Olivoretin A와 거의 동일한 구조임을 알 수 있었다. 또한 rat liver microsome을 이용한 효소활성분석에서 AI-3의 IC_(50) value는 3.1 μM이었다. About 1,300 strains isolated from soil were evaluated for acyl-CoA:cholesterol acyltransferase (ACAT) inhibition activity. About 4.0% of actinomycetes and 3.6% of fungi showed greater than 50% inhibition activity, respectively. However, none of the isolated bacteria exhibited inhibition activity more than 50%. Among them, one Streptomyces sp. A-3 showed a higher ACAT inhibition activity in culture broth. Isolation of the ACAT inhibitor (AI-3) was achieved by Amberlite XAD-7 column, silica-gel column, Sephadex LH-20 gel-filtration and reverse phase HPLC. From the UV, IR, FAB-MS spectroscopy and NMR studies, the molecular weight of this compound AI-3 was determined as 465. AI-3 seemed to have a similar structure to that of skin tumor promoter, Olivoretin A. The compound AI-3 inhibited ACAT activity in vitro assay system using at liver microsomes with IC_(50) value of 3. 1μM.