연구논문 : Ames test 를 이용한 감마선 조사 황기 , 감초 및 진피의 유전독성학적 안전성 평가

함연호(Yeon Ho Ham),조성기(Sung Kee Jo),육홍선(Hong Sun Yook) 한국식품저장유통학회 ( 구 한국농산물저장유통학회 ) 2001 한국식품저장유통학회지 Vol.8 No.1

백작약 조다당분획에 의한 B 세포 증식의 특성

박혜란,함연호,이성태,백상기,조성기,Park, Hae-Ran,Ham, Yeon-Ho,Yee, Sung-Tae,Paik, Sang-Gi,Jo, Sung-Kee 대한면역학회 2001 Immune Network Vol.1 No.2

Background : Paeonia japonica Miyabe is a medicinal plant which has been widely used as a component of blood-building decoctions (Chinese medicinal concept : Bu-Xie). The immunopharmacological characteristics of the extract of Paeonia japonica (PJ) were investigated. Methods : The effects of fractions of PJ extract on lymphocyte proliferation were measured by $H^3$-thymidine incorporation assay. The proliferated lymphocyte subsets were analyzed in flow cytometry. The subset cell populations of spleen cells were separated by magnetic cell separation system, and their proliferation by the extract were investigated. The effect of the extract on antibody production was determined in mice challenged with sheep red blood cells (SRBC) using hemolytic plaque forming cell assay. Results : Spleen cells were proliferated by water extract of PJ. Polysaccharide fraction (PJ-P) of the extract was most active in the proliferation. It was found in flow cytometry that the lymphocyte subset proliferated by PJ-P was B cell population. Among the separated subset cell populations, T cell-depleted cell population and macrophage-depleted cell population were most proliferated by PJ-P. However, positively selected populations of B cells and T cells were not proliferated by PJ-P. These results indicate that B cell proliferation by PJ-P may require the assistance of macrophages or T cells. These results suggest that firstly PJ-P may stimulate macrophages or T cells, and then B cells are activated. The number of antibody-secreting cells was increased by administration of PJ-P in mice immunized with SRBC as a T-dependent antigen. Conclusion : These results suggest that macrophages and accessory cells are directly activated by PJ-P and then helper T cells and B cells are indirectly activated. As the results, immune responses might be coordinately improved. In conclusion, PJ-P, a polysaccharide of P. japonica, may be a characteristic immunostimulator, which is analogous to polysaccharides such as lentinan, PSK and ginsan.

편백나무(Chamaecyparis obtusa Endlicher) 잎의 추출성분

이상극,김진규,함연호,배영수,Lee, Sang-Keug,Kim, Jin-Kyu,Ham, Yeon-Ho,Bae, Young-Soo 강원대학교 산림과학연구소 2001 Journal of Forest Science Vol.18 No.-

편백나무 잎을 채취하여 건조시킨 후 분말로 제조하여 아세톤-물(7:3, v/v)로 추출하고 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 그리고 수용성으로 분획하여 동결건조 시켰다. 그 중에서 에틸아세테이용성 분획을 Sephadex LH-20으로 충진한 칼럼에서 메탄올과 에탄올-헥산 혼합액을 용매로 사용하여 칼럼크로마토그래피를 실시하였다. 단리된 화합물들은 박층크로마토그래피(TLC)로 확인한 후 NMR스펙트럼을 사용하여 정확한 구조규명을 하였고 FAB-MS스펙트럼으로 분자량을 측정하였다. 주로 많은 양의 taxifolin-3-O-${\beta}$-D-xylopyranoside와 (+)-catechin이 포함되어 있었으며 소량의 quercetin-3-O-${\alpha}$-L-rhamnopyranoside도 함께 단리 되었다. 2kg of the dried leaves of chamaecyparis obtusa Endlicher were ground, extracted with acetone-$H_2O$(7:3, v/v), concentrated, and fractionated with a series of hexane, $CH_2Cl_2$, EtOAc and water on a separatory funnel. Each fraction was freeze dried to give dark-brown powder and a EtOAc soluble portion of the powder was chromatographed on a Sephadex LH-20 column using a series of aqueous methanol and ethanol-hexane mixture as eluents. Spectrometric analyses such as NMR and FAB-MS including TLC were performed to characterize the structures of the isolated compounds. The leaves of chamaecyparis obtusa Endlicher contained a large amount of taxifolin-3-O-${\beta}$-D-xylopyranoside and (+)-catechin in addition to a small amount of quercetin-3-O-${\alpha}$-L-rhamnopyranoside.

감마선조사 감초, 진피(陳皮) 및 시호 열수 추출물의 in vitro 유전독성학적 안전성 평가

조성기(Sung-Kee Jo),함연호(Yeon-Ho Ham),박혜란(Hae-Ran Park),오헌(Heon Oh),변명우(Myung-Woo Byun) 한국식품영양과학회 2001 한국식품영양과학회지 Vol.30 No.6

생약재의 기능성 식품 및 대체의약 원료로의 이용 증대에 따라 위생적 저장ㆍ유통을 위한 감마선조사 기술의 이용 가능성을 검토할 목적의 일환으로 실제 이용선량의 최고 선량인 10 kGy의 감마선 조사 생약재 3종의 유전독성학적 안전성을 평가하고자 하였다. 공시 재료는 감마선 조사된 생약재료 감초, 진피 및 시호로 하였다. 시험은 Salmonella typhimurium 균주를 이용한 유전자 복귀돌연변이 시험(Ames test)과 배양된 Chinese hamster ovary(CHO) 세포를 이용한 in vitro 소핵유발 시험으로 시행하였다. 시료는 오염유기체 완전 구제 선량인 10 kGy의 감마선으로 조사된 감초, 진피 및 시호의 열수 추출물이었으며, 시료의 농도는 복귀돌연변이 시험의 경우 5 mg/plate로, 소핵유발 시험의 경우 50%의 세포증식 억제를 나타내는 농도를 최고 농도로 하였다. 시험은 대사 활성화시키지 않은 경우와 S9 mix 첨가로 대사 활성화시킨 경우로 나누어 시행하였다. 복귀돌연변이 시험 결과 각 시료에 의한 복귀변이 집락수의 증가를 인정할 수 없었으며, 각 용량단계에서 감마선 비조사군과 조사군간의 차이도 볼 수 없었으므로 음성으로 판정하였다. 소핵유발 시험에서 cytokinesisblocked binucleated(CB) cells 내에 생성된 소핵을 계수한 결과, 음성 대조군의 경우 소핵 출현빈도가 20~30/1,000 CB cells(2~3%) 정도였으며, 비조사 시료군과 감마선조사 시료군의 각 용량단계에서 모두 2~4%의 소핵 출현빈도를 보여 시료에 의한 소핵 출현빈도의 증가를 인정할 수 없었다. 따라서 감마선이 조사된 각 시료가 직접변이원이나 간접변이원으로 작용하지 않으며, 세포분열 중에 유전학적으로 독성을 나타내지 않음을 확인할 수 있었다. 이 결과로 보아 생체내 유전독성시험, 만성독성시험 및 생식독성시험 등이 추가된다면 감마선 조사 생약재의 안전성을 명확히 밝힐 수 있을 것으로 사료된다. The γ-irradiated medicinal herbs were examined the genotoxicological safety to consider the possibility of application of the irradiation technology for hygienic purpose. The three medicinal herbs -Glycyrrhizae Radix, Aurantii nobilis Pericarpium and Bupleuri Radix- were irradiated with γ-rays at the practical dosage of 10 kGy. The hot water extracts of the irradiated herbs were examined in two short-term in vitro tests: (1) Ames test in Salmonella typhimurium TA98 and TA100, (2) Micronucleus test in cultured Chinese hamster ovary(CHO) cells. In the Salmonella reversion assays both with and without metabolic activation, the number of revertant colonies was not increased with each extract from the irradiated herbs, compared with negative controls. No significant difference in formation of the colonies was observed between non-irradiated and 10 kGy-irradiated herbs. These results indicated that no mutagenicity of the irradiated herbs was detected. In the micronucleus tests in cultured CHO cells, the incidences of micronucleus were not increased with irradiated herbs, and no significant difference in the incidences was observed between non-irradiated and irradiated herbs. These results indicated that no cytogenetic toxicity of the irradiated herbs was detected. The results of the two in vitro tests suggest that the irradiated herbs do not show mutagenic effects and cytogenetic toxicity. Further tests of in vivo genotoxicity and chronic toxicity are needed to determine the safety of the herbs irradiated with γ-rays at practical doses.

Biological Activities of Sorbus commixta Hedl. Flower Extract

Chan Ok Lee(이찬옥),Yeon Ho Ham(함연호),Hee Kyu Kim(김희규) 한국약용작물학회 2019 한국약용작물학회 학술대회논문집 Vol.2019 No.2

내후성 활엽수종인 아까시나무 목질부와 현사시나무 수피의 추출성분

배영수(Young Soo Bae),함연호(Yeon Ho Ham) 한국목재공학회 2000 목재공학 Vol.28 No.3

N/A N/A

기능성 활엽수종의 생리활성

배영수(Young Soo Bae),함연호(Yeon Ho Ham) 한국목재공학회 2000 목재공학 Vol.28 No.2

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감마선 조사 황기, 백출 및 승마 열수 추출물의 in vitro 유전독성학적 안전성 평가

박혜란(Hae-Ran Park),함연호(Yeon-Ho Ham),정우희(Uhee Jung),정일윤(Ill-Yun Jeong),조성기(Sung-Kee Jo) 한국식품영양과학회 2002 한국식품영양과학회지 Vol.31 No.5

생약재의 식품ㆍ생물 산업적 이용 증대에 따라 생약재의 안전한 위생화 기술이 요구되고 있다. 본 연구에서는 생약재의 위생화 기술로서 방사선 조사기법의 활용 가능성을 검토하기 위하여, 감마선을 조사한 생약재 3종에 대한 유전독성학적 안전성을 평가하고자 하였다. 공시 재료는 오염유기체 완전 구제선량인 10 kGy의 감마선을 조사시킨 황기, 백출 및 승마로 하였으며, 각각의 열수 추출물의 유전독성을 in vitro 시험으로 평가하였다. 유전독성 평가는 Salmonella typhimurium TA98 및 TA100 균주를 이용한 복귀 돌연변이 시험(Ames test)과 Chinese hamster ovary(CHO) 세포를 이용한 in vitro 소핵 유발시험으로 시행하였다. 각각의 시험은 S9 mix를 첨가한 대사활성화 시스템과 첨가하지 않은 비활성화 시스템으로 구분하여 실시하였으며, 시료의 최고 처리 농도는 복귀돌연변이 시험에서는 5 mg/plate로, 소핵유발시험에서는 50%의 세포증식 억제를 나타내는 농도(1 mg/mL)로 하였다. 복귀 돌연변이 시험 결과 대사 활성화 및 비활성화의 경우 모두에서 각 시료에 의한 복귀변이 집락수의 증가를 인정할 수 없었으며, 각 용량단계에서 감마선 조사군과 비조사군 간의 차이도 볼 수 없었으므로 음성으로 판정하였다. 소핵 유발시험에서도 음성대조군 및 감마선 조사군과 비조사군 모두 각 용량 단계에서 세포 내에 생성된 소핵의 빈도가 3% 이하로 나타남에 따라, 시료에 의한 소핵의 유발을 인정할 수 없었으므로 음성으로 판정하였다. 따라서 감마선이 조사된 각각의 시료는 직접 및 간접 돌연변이원으로 작용하지 않으며 세포유전 독성을 나타내지 않음을 확인할 수 있었다. 향후, 생체 내 유전독성시험, 만성독성시험 및 생식독성 시험 등의 추가적인 in vivo 실험이 행하여진다면 감마선 조사 생약재의 안전성을 보다 명확히 밝힐 수 있을 것으로 생각된다. As the utilization of medicinal herbs in food and bio-industry increases, safe hygienic technologies for them are demanded. To consider the possibility of application of radiation technology for this purpose, the genotoxicological safety of three γ-irradiated medicinal herbs were studied. Astragali Radix, Atractylodes Rhizoma and Cimicifugae Rhizoma were irradiated at 10 kGy, and then were extracted with hot water. The genotoxicity of the extracts was examined in two short-term in vitro tests: (1) Salmonella reversion assay (Ames test) in strains of TA98 and TA100; (2) Micronucleus test in cultured Chinese hamster ovary (CHO) cells. The extract was treated at maximum doses of 5 mg/plate in Salmonella reversion assay, and 1 mg/mL in micronucleus test where growth of CHO cells was inhibited by 50%. In Salmonella reversion assay with or without metabolic activation, both extracts of irradiated and non-irradiated herbs showed no significant differences in formation of revertant colonies compared with the negative control. And also in micronucleus test, the incidences of micronucleus in CHO cells cultured with extracts of irradiated herbs were almost same as negative control in less than 3%. These results of two in vitro tests suggest that γ-irradiated herbs do not show mutagenicity and cytogenetic toxicity. Further tests of in vivo genotoxicity and chronic toxicity are needed to ascertain the safety of γ-irradiated herbs.

측백나무(Thuja orientalis Linnaeus) 잎의 추출성분

이상극(Sang-Keug Lee),김진규(Jin-Kyu Kim),함연호(Yeon-Ho Ham),배영수(Young-Soo Bae) 한국산림바이오에너지학회 2002 산림바이오에너지 Vol.21 No.1

측백나무 잎을 채취하여 건조시킨 후 분말로 제조하여 아세톤-물(7:3, v/v)로 추출하고 hexane, CH2Cl2, EtOAc, 그리고 수용성으로 분획하여 동결건조 시켰다. 그 중에서 EtOAc 분획을 Sephadex LH-20으로 충진한 칼럼에서 메탄올과 에탄올-헥산 혼합액을 용리용매로 사용하여 칼럼크로마토그래피를 실시하였다. 단리된 화합물들은 TLC로 확인한 후 NMR스펙트럼을 사용하여 정확한 구조규명을 하였고 FAB-MS로써 분자량을 측정하였다. 주로 quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside와 myricetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside같은 flavononol 유도체들이 다량으로 포함되어 있었으며 비교적 적은 양의 (+)-catechin과 (+)-gallocatechin 같은 flavan 화합물들도 함께 단리 되었다. 각 분획물들과 단리된 화합물들은 DPPH 라디칼 소거법을 이용하여 항산화실험을 실시하였으며, 모두 우수한 항산화 효능이 있는 것으로 나타났다.<br/> 2kg of the dried leaves of Thuja orientalis Linnaeus were ground, extracted with acetone-H2O(7:3, v/v), concentrated, and fractionated with a series of hexane, CH2Cl2, EtOAc and water on a separatory funnel. Each fraction was freeze dried to give dark-brown powder and a EtOAc soluble portion of the powder was chromatographed on a Sephadex LH-20 column using a series of aqueous methanol and ethanol-hexane mixture as eluents. Spectrometric analyses such as NMR and FAB-MS including TLC were performed to characterize the structures of isolated compounds. The leave of Thuja orientalis Linnaeus contained a large amount of flavononol derivatives such as quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside and myricetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside in addition to a small amount of flavan compounds such as (+)-catechin and (+)-gallocatechin. The antioxidative activities of each fractions and isolated compounds were done by DPPH radical scavenging test, and all of them were indicated strong antioxidative activities.<br/> <br/>

비수리 지상부로부터 분리한 Flavone glycosides

권동주 ( Dong Joo Kwon ),김진규 ( Jin Kyu Kim ),함연호 ( Yeon Ho Ham ),배영수 ( Young Soo Bae ) 한국응용생명화학회 2007 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.50 No.4