LC-MS/MS를 이용한 축산물 중 clenbuterol과 ractopamine의 동시 분석법 개선

조윤제(Yoon-Jae Cho),채영식(Young-Sik Chae),김재영(Jae-Young Kim),김형수(Hyung-Soo Kim),강일현(Ilhyun Kang),도정아(Jung-Ah Do),오재호(Jae-Ho Oh),권기성(Kisung Kwon),장문익(Moon-Ik Chang) 한국식품과학회 2013 한국식품과학회지 Vol.45 No.1

동물용의약품은 2007년부터 급격한 잔류허용기준 신설에 따라 많은 수의 분석법도 함께 신설하였으며, 국제식품규격위원회(CODEX), EU 등에서 동물용의약품에 대한 기준이 국제적으로 엄격해지고 있어, 낮은 농도의 정량한계 및 재현성이 높은 분석법이 요구되어지고 있다. 하지만 국내 식품공전에서의 클렌부테롤 및 락토파민 분석법은 각각 개별 분석법으로 나뉘어져 있고, 시간적 및 경제적으로 손실이 있을 뿐 아니라 추출 효율 및 재현성이 낮아 분석에 어려움이 있다. 따라서 본 연구는 물리화학적 특성이 유사한 β-agonist계 동물용의약품인 클렌부테롤 및 락토파민의 기존 개별 분석법을 동시 분석법으로 개선하고 검사 효율성을 증대시키고자 하였다. 분석에 사용된 검체는 소와 돼지의 근육을 이용하였다. 검체에 내부표준물질인 클렌부테롤-d<SUB>9</SUB>과 락토파민-d<SUB>3</SUB>을 각각 첨가하고 β-글루쿠로니다제/아릴설파타제 효소를 사용하여 가수분해한 후 에틸아세테이트로 추출하였다, 추출액을 농축한 후 헥산과 메탄올을 포화시킨 용매를 적용하여 지방 제거과정을 거친 뒤 MIP 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS/MS)에 주입하였다. 기기분석은 ESI(Electro-Spray Ionization) 및 positive MRM(Multiple Reaction Monitoring) 모드로 하였고, 검증은 CODEX 가이드라인 규정에 따라 실시하였다. 그 결과, 클렌부테롤과 락토파민의 LOQ는 각각 0.2 및 0.5 μg/kg 수준이었고, 평균회수율은 각각 104.2-113.5% 및 107.6-118.1%로 나타났다. 또한, 분석오차는 각각 2.8-10.5% 및 1.6-5.2%로 CODEX 가이드라인 규정에 만족하는 수준이었다. 따라서 개선된 동시 분석법은 잔류동물용의약품의 분석에 있어 보다 신속하고 경제적인 분석 및 모니터링에 적용 가능할 것으로 기대된다. Abstract Clenbuterol and ractopamine, which are β-agonists, have been misused as a growth promoting agent in meat producing animals. Clenbuterol was banned for veterinary drug in Korea because of its problems regarding safety. Due to their adverse effects, such as cardiovascular and central nervous diseases on human health proper control and monitoring should be conducted. The existing analytical method of clenbuterol and ractopamine in the Food code was improved through our present study. The bovine muscle samples were subjected to enzymatic hydrolysis, extracted with ethyl acetate and defatted by hexane-methanol partitioning. A molecular imprinted polymer (MIP) solid phase extraction cartridge was used for clean-up and LC-MS/MS was operated in positive multiple reaction monitoring (MRM). Clenbuterol-d<SUB>9</SUB> and ractopamine-d<SUB>3</SUB> were used as an internal standard. The renewed method was validated according to the CODEX guideline. The limits of quantitation for clenbuterol and ractopamine were 0.2 and 0.5 μg/kg, respectively. The mean recoveries ranged in 104.2-113.5% for clenbuterol and in 107.6-118.1% for ractopamine. The improved method was able to save both time and expenses.

HPLC-PDA를 이용한 닭고기 중 Nitroxoline 분석법 개발

조윤제 ( Yoon Jae Cho ),채영식 ( Young Sik Chae ),김재은 ( Jae Eun Kim ),김재영 ( Jae Young Kim ),강일현 ( Ri Hyun Kang ),이상목 ( Sang Mok Lee ),도정아 ( Jung Ah Do ),오재호 ( Jae Ho Oh ),장문익 ( Moon Ik Chang ),홍진환 ( Jin Hwa 한국환경농학회 2013 한국환경농학회지 Vol.32 No.1

우리나라는 2007년부터 원료축산물에 대한 동물용의약품 잔류허용기준 설정을 강화하면서 관련 시험법을 식품공전에 등재하여 활용하고 있다. 더불어 국외에서는 국제식품규격위원회와 유럽연합의 규제 강화 추이에 따라 불검출기준 물질에 대한 MRL 설정 등 낮은 농도의 정량한계를 가지는 검증된 분석법 개발 등이 활발히 진행되고 있다. 따라서 본 연구는 가금류 중 잔류허용기준은 아직 설정되어 있지 않으나, 식품안전성 조사 및 연구 등을 위해서는 시험법의 확립이 필요한 nitroxoline의 닭고기 근육 중 잔류시험법을 개발하고자 하였다. 분석에 사용된 검체는 닭고기의 근육을 이용하였다. 검체에 아세트로니트릴을 가하여 추출한 후, 이를 감압 농축하여 메탄올로 녹인 다음 MCX 카트리지로 정제한 후 HPLC-PDA에 주입하였다. 기기분석은 C18 컬럼을 사용하였고, 0.1 % TBAOH-인산용액과 메탄올을 기울기 조건으로하여 360 nm에서 측정하였다. 또한, 액체크로마토그래프-질량분석기를 통해 확인시험을 수행하였으며, 모든 검증은 CAC가이드라인(CAC/GL 16, 1993; CAC/GL 71, 2009) 규정에 따라 실시하였다. 그 결과, nitroxoline의 LOQ는 0.02mg/kg 수준이었고, 회수율은 72.9∼88.1 %로 나타났다. 또한, 변동계수는 2.5∼11.7 %로 CAC 가이드라인(CAC/GL 16, 1993; CAC/GL 71, 2009) 규정에 만족하는 수준이었다. 따라서 개발된 분석법은 잔류동물용의약품의 분석에 있어 보다 신속하고 경제적인 분석 및 모니터링에 적용 가능할 것으로 기대된다. Research Article : BACKGROUND: Nitroxoline is an antibiotic agent. It is used for the treatment of the second bacterial infection by the colibacillosis, salmonellosis and viral disease of the poultry. When the nitroxoline is indiscreetly used, the problem about the abuse of the antibiotics can occur. Therefore, this study presented the residue analytical method of nitroxoline in food for the safety management of animal farming products. METHODS AND RESULTS: A simple, sensitive and specific method for nitroxoline in chicken muscle by high performance liquid chromatograph with PDA was developed. Sample extraction with acetonitrile, purification with SPE cartridge (MCX) were applied, then quantitation by HPLC with C18 column under the gradient condition with 0.1 % tetrabutylammonium hydroxide-phosphoric acid and methanol was performed. Standard calibration curve presented linearity with the correlation coefficient (r2) > 0.999, analysed from 0.02 to 0.5 mg/L concentration. Limit of quantitation in chicken muscle showed 0.02 mg/kg, and average recoveries ranged from 72.9 to 88.1 % in chicken muscle. The repeatability of measurements expressed as coefficient of variation (CV %) was less than 12 % in 0.02 and 0.04 mg/kg. CONCLUSION(S): Newly developed method for nitroxoline in chicken muscle was applicable to food inspection with the acceptable level of sensitivity, repeatability and reproducibility.

국내 유통 벌꿀의 안정동위원소 비율에 관한 연구

조윤제(Yoon-Jae Cho),김재영(Jae-Young Kim),장문익(Moon-Ik Chang),강경모(Kyung-Mo Kang),박용춘(Yong-Chjun Park),강일현(Ilhyun Kang),도정아(Jung-Ah Do),권기성(Kisung Kwon),오재호(Jae-Ho Oh) 한국식품과학회 2012 한국식품과학회지 Vol.44 No.4

본 연구는 국내 및 국외에서 생산된 다양한 벌꿀에 대한 탄소, 수소 및 산소의 안정동위원소 비율을 분석하고, 국내 유통 벌꿀의 순수 여부 등 과학적 벌꿀 관리를 위한 기초 자료를 마련하 고자 수행되었다. 이를 위한 분석은 국내에서 생산·유통 중인 국내산 및 수입산 모든 벌꿀을 대상으로 하여 동위원소 비율 양상을 조사하였다. 탄소 동위원소 비율은 C₃ 식물군이 ?27- ?21‰, C₄ 식물군이 ?19‰ 이상인 것으로 크게 양분되는 현상을 보였다. 수입산의 경우 탄소 동위원소 비율은 모두 ?27- ?23‰의 범위를 나타내어 수거된 제품은 모두 C₃ 식물군의 밀원에서 생산되어진 것으로 판단되었다. 수소 및 산소 동위원소 비율은 국내산의 경우, 각각의 밀원에 따라 결과 값의 범위가 넓어 차이가 뚜렷하지 않은 결과를 나타내었다. 또한 원산지에 따른 지역별 양상도 뚜렷한 차이가 나타나지 않았다. 수입산은 위도 차이가 넓은 지역에서는 차이가 보이나 위도 위치가 좁은 지역에서는 구분이 어려웠다. F/G 비율과 탄소 동위원소 비율을 비교 분석한 결과, 국내산은 밀감꽃을 제외한 C₃ 그룹이 1.3 이상으로 나타났고 C₄그룹은 1.3 이하를 나타내었다. 수입산은 다양한 밀원(초본류 및 목본류)을 가지는 경우,C₃ 그룹의 경우에도 1.3 이하의 경향을 나타내어 구분에 어려움이 있었다. 결론적으로 국내 유통 벌꿀의 순수 여부 판단에 탄소 동위원소 비율이 활용 가능하며, 보다 정확한 결과를 도출하기 위해 보완적으로 F/G 비율 결과를 병행하여 사용할 수 있을 것으로 판단된다. This study examines the authenticity discrimination of the circulated honey by using stable isotope ratio methods. In the case of domestic honey, the range of δ<SUP>13</SUP>C for the samples labeled as pure honey was about ?27- ?21‰ at the C₃ origin, and the range of that for artificial honey was over ?19‰ at the C₄ origin. The range of δ<SUP>13</SUP>C for all imported honey was over ?27- ?23‰ originating from the C₃ plant. According to the nectar-source, δ<SUP>2</SUP>H and δ<SUP>18</SUP>O for domestic honey were significantly different for 6 and 5 groups, respectively. However, we could not explain the detailed relationship as well as the geographical feature of δ<SUP>2</SUP>H and δ<SUP>18</SUP>O. The difference for δ<SUP>2</SUP>H and δ<SUP>18</SUP>O in the wide range of latitude, such as between Australia and Canada, was more or less shown. However, it was difficult to find out the trends of δ<SUP>2</SUP>H and δ<SUP>18</SUP>O for imported honey versus the geographical information in the similar latitudinal country.

증례 : 고관절에 발생한 Salmonella 감염 ( Case Reports : Septic Arthritis of Hip Joint Caused by Salmonellosis )

조윤제(Yoon Je Cho),유명철(Myung Chul Yoo),김강일(Kang Il Kim),전영수(Young Soo Chun),소재호(Jae Ho Soh) 경희대학교 경희의료원 1998 慶熙醫學 Vol.14 No.3

전자담배 액상 충진제와 유사한 합성착향료 중 니코틴의 HPLC 분석법 개발

김재영(Jae-Young Kim),이상목(Sang-Mok Lee),장문익(Moon-Ik Chang),조윤제(Yoon-Jae Cho),이한진(Han-Jin Lee),채영식(Young-Sik Chae),이규식(Gyu-Sik Rhee) 한국식품과학회 2013 한국식품과학회지 Vol.45 No.6

전자담배는 무니코틴성이 있는 한편, 니코틴이 함유되어 있는 금연도구로서 사용된다. 전자담배의 구성품 중 액상카트리지는 식품첨가물로 사용되는 합성착향료와 유사한 성분으로 구성되어 있어, 이를 합성착향료로 사용하게 되면, 인체에 유해한 니코틴의 잔류 가능성이 존재한다. 따라서 본 연구는 식품첨가물로 사용되고 있는 합성착향료 중 니코틴 검출 분석법을 개발하였다. 분석에 사용된 검체는 시중에 사용되는 합성착향료를 이용하였다. 검체에 증류수와 디클로로메탄을 가하여 산-염기 액-액 추출법을 이용하여 추출 및 정제과정을 거친 후, 이를 질소 농축하고 이동상으로 재용해하여 HPLC/PDA에 주입하였다. 기기분석은 C18컬럼을 사용하였고, 20 mM 개미산암모늄 함유 10% 아세토니트릴과 100% 아세토니트릴을 기울기 용리 조건으로 하여 261.9 nm에서 측정하였다. 또한, 액체크로마토그래프-질량분석기를 통해 확인시험을 수행하였으며, 모든 검증은 Codex 가이드라인의 규정에 따라 실시하였다. 그 결과, 니코틴의 정량한계는 0.4 mg/kg 수준이었고, 회수율은 76.40%-96.28%로 나타났다. 또한, 변동계수는 1.74%-5.12%로 Codex 가이드라인 규정에 만족하는 수준이었다. 따라서 개발된 분석법은 식품첨가물에 함유된 니코틴을 분석하기 위한 효율적인 분석법으로 판단된다. A simple, sensitive, and specific method for quantifying the nicotine content of synthetic favoring substances (SFS) was developed using high performance liquid chromatography (HPLC) with a photo-diode array detector (PDA). Nicotine was extracted from SFS samples by using an acid-base liquid-liquid extraction method with dichloromethane and distilled water. The nicotine content was quantified by HPLC/PDA (261.9 nm) with a C18 column under a gradient of 10% acetonitrile with 20 mM ammonium formate (ammonia solution adjusted to pH 8.7) to 100% acetonitrile. The calibration curve, analyzed from concentration standards between 0.1 to 2 mg/L, presented linearity with a correlation coefficient (r2)>0.9999. The limit of quantitation (LOQ) of nicotine in SFS was 0.4 mg/kg, and the average recoveries ranged from 76.4% to 96.3%. The repeatability of measurements, expressed as the coefficient of variation (CV%), ranged from 1.74 to 5.12%. This newly developed method for nicotine quantification in SFS can be considered an analytical method with an acceptable level of sensitivity and repeatability.

잔류농약 모니터링 및 위해평가

오재호 ( Jae Ho Oh ),도정아 ( Jung Ah Do ),장문익 ( Moon Ik Chang ),강일현 ( Il Hyun Kang ),이상목 ( Mok Sang Lee ),조윤제 ( Yoon Jae Cho ),황인균 ( In Gyun Hwang ) 한국환경농학회 2012 한국환경농학회 학술대회집 Vol.2012 No.-

탄소 안정동위원소 비율 및 지방산 조성을 활용한 식용유지류의 판별

김재영(Jae-Young Kim),이상목(Sang-Mok Lee),장문익(Moon-Ik Chang),조윤제(Yoon-Jae Cho),채영식(Young-Sik Chae) 한국분석과학회 2014 분석과학 Vol.27 No.1

다물리/다중스케일 기법을 적용한 원자로 증기관 파단사고 해석

이재룡(Jae Ryong Lee),박익규(Ik Kyu Park),조윤제(Yun Je Cho),이승준(Seung Jun Lee),윤한영(Han Young Yoon) 한국유체기계학회 2019 유체기계 연구개발 발표회 논문집 Vol.2019 No.11

Synthesis of New $C_2$ Symmetrical Chiral Diamido- and Diazapyridino-18-crown-6 from (1S,2R)-Norephedrine

현명호,조윤제,장기영,정경규,Hyun, Myung Ho,Cho, Yoon Jae,Chang, Gi Young,Jyung, Kyung Kyu Korean Chemical Society 1996 대한화학회지 Vol.40 No.4

잔가시 물 추출물의 항염증 효과

김재영 ( Jae Young Kim ),이상목 ( Sang Mok Lee ),이한진 ( Han Jin Lee ),장문익 ( Moon Ik Chang ),강남숙 ( Nam Sook Kang ),김남선 ( Nam Sun Kim ),김희정 ( Hee Jung Kim ),조윤제 ( Yoon Jae Cho ),정지윤 ( Jiyoon Jeong ),김미경 ( Mee 한국응용생명화학회(구 한국농화학회) 2014 Journal of Applied Biological Chemistry (J. Appl. Vol.57 No.3

본 연구에서는 LPS로 유도된 RAW 264.7 대식세포의 염증반응을 통해 잔가시 모자반 (S. micracanthum) 물 추출물의 항염증 활성을 알아보았다. 잔가시 모자반 물 추출물이 대식세포에 미치는 독성을 알아보기 위해 MTT assay를 시행했으며, NO 생성량을 비롯하여 TNF-α, IL-6 및 IL-1β와 같은 염증 매개성 사이토카인 분비량을 측정하기 위해 ELISA법을 사용하였다. 또한, immunoblotting을 통해 iNOS, COX-2 및 NF-κBp65 단백질 발현량을 알아보았다. 실험결과, 잔가시 모자반 물추출물이 대식세포에 미치는 독성은 보이지 않았으며, NO 및염증 매개성 사이토카인의 분비량이 농도 의존적으로 억제됨을 보였다. 특히, IL-1β 분비량이 50 μg/mL에서 50% 이상 저해됨을 보였다. 또한, iNOS, COX-2 및 NF-κB p65 단백질 발현량에서도 농도의존적인 감소를 보였다. 모자반 물 추출물을5, 000 mg/kg body weight까지 경구투여 한 후 2주 동안 관찰한 결과 경구독성을 보이지 않음을 확인하였다. 그 후, 동물실험을 통해 염증으로 인한 귀 부종의 두께를 측정한 결과, 가장 높은 처리 농도인 250 mg/kg body weight으로 경구투여하였을 때 prednisolone을 투여한 대조군과 유의적으로 비슷한수준까지 귀 부종이 완화됨을 보였다. 따라서 본 연구는 잔가시 모자반 물 추출물이 뛰어난 항염증 효과를 가지고 있음을나타내며, 향후 염증질환 치료제 개발에 잔가시 모자반 물 추출물이 이용될 수 있을 것으로 사료된다. The anti-inflammatory effect of Sargassum micracanthumwater extract (SMWE) was investigated using lipopolysaccharide(LPS)-induced inflammatory response in this study. The murinemacrophage cell line RAW 264.7 cells were used and MTT assaywas performed to measure the cell proliferation ability. Thesecretion of nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), and IL-1β was measured in LPS-inducedRAW 264.7 cells by ELISA. The expression of inducible nitricoxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), and nucleartranscription factor-kappa B p65 protein was studied by immunoblotting. The Balb/c mice were used for an acute toxicity test, andimprinting control region mice were purchased to evaluate acroton oil-induced ear edema. As a result, there was no cytotoxicityin the macrophage proliferation treated with SMWE compared tothe control. NO levels decreased with increasing concentration ofSMWE and were inhibited over 50%. Moreover, the secretion ofIL-6, TNF-α, and IL-1β was suppressed in a dose-dependentmanner, especially, IL-1β inhibition activity was over 50% at 50μg/mL. The formation of ear edema of mice was reduced at thehighest dose tested compared to that in the control. Moreover, inacute toxicity test, no moralities occurred in mice administered5, 000 mg/kg body weight of SMWE over 2 weeks observationperiod. These results suggested that SMWE may have significanteffects on inflammatory factors and be potential anti-inflammatorytherapeutic materials.