굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물의 간기능개선 효과 및 단회독성 평가

조월순(Wol-Soon Jo),남병혁(Byung-Hyouk Nam),오수정(Su-Jung Oh),최유진(Yoo-Jin Choi),강은영(Eun-Young Kang),홍숙희(Sook-Hee Hong),이상호(Sang-Ho Lee),정민호(Min-Ho Jeong) 한국식품과학회 2008 한국식품과학회지 Vol.40 No.1

굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract)의 안전성 자료를 확보하기 위하여 단회경구투여 독성시험을 실시하였으며, CCl₄의 경구투여로 유도된 간손상 실험동물모델로부터 시험물질(CMPD extract)의 간보호효과를 확인하였다. 단회경구투여 독성시험결과, 시험물질(CMPD extract)의 최고농도(2,000 mg/kg body weight)에서 독성을 나타내지 않아 LD<SUB>50</SUB> 값을 그 이상으로 결정하였다. 또한 독성물질(CCl₄)로부터 간손상이 유발된 SD rat에 시험물질(CMPD extract)을 투여한 후 혈청으로부터 간손상과 관련한 지표물질인 GOT, GPT, TG, TC, LDL 및 HDL 활성도를 측정하였으며, 이와 함께 병리조직학적 소견을 확인하였다. 혈청 GOT는 손상군(G2)에 비해 G4, G5 시험물질투여군에서 유의한 감소를 나타내었으며, GPT의 경우 고용량 시험물질 투여군(G4)에서 유의한 감소를 나타내었다(p < 0.05). 또한 LDL 및 HDL 활성도는 손상군(G2)에 비해 유의하지는 않지만 시험 물질투여군(G4, G5, G6)에서 어느 정도 회복기미를 보였다. 병리조직학적 소견에서도 손상군(G2)의 경우 심각한 세포독성을 보였으나, 시험물질 고용량 투여군(G4)에서는 손상된 세포가 감소하였음을 확인하였다. 이상의 결과들은 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract)이 CCl₄ 투여에 의해 유발된 급성간 손상에 대하여 간조직의 보호와 간세포의 기능유지에 유효한 물질임을 제시 하고 있다. This study was designed to evaluate the single dose toxicity and the protective effect of water extract of Cordyceps militaris grown upon Protaetia dreujtarsis (CMPD extract) on liver damage on carbon tetrachloride (CCl₄)-induced acute hepatotoxicity in Sprague-Dawley (SD) rats. The CMPD extract was once administered orally to both sexes of rats at dose of 2,000, 1,000 and 500 mg/kg body weight, the recommended maximum limit dose for acute toxicity. Neither significant toxic signs nor death was observed during the observation period. These results indicate that LD<SUB>50</SUB> (lethal dose of 50%) of CMPD extract is greater than 2,000 mg/kg body weight in SD rats. To investigate also the effect of hepatoprotection of CMPD extract, SD rats were orally treated with CMPD extract (50, 25 and 12.5 mg/kg body weight) or silymarin (25 mg/kg body weight) before and after administration of CCl₄ (2 mL/kg body weight, 20% CCl₄ in olive oil). Treatment with CMPD extract or silymarin could decrease the GPT (glutamic-pyruvic transaminase) and GOT (glutamic-oxaloacetic transaminase) levels in serum when compared with CCl₄-treated group. Therefore, the results of this study show that CMPD extract can be proposed to protect the liver against CCl₄-induced hepatic damage in rats.

굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수 추출물의 유전독성평가

조월순(Wol Soon Jo),남병혁(Byung Hyouk Nam),최유진(Yoo Jin Choi),오수정(Su Jung Oh),강은영(Eun-Young Kang),이상호(Sang Ho Lee),정민호(Min Ho Jeong) 한국독성학회 2007 Toxicological Research Vol.23 No.3

Water extract of Cordyceps militaris grown upon Protuetja dreujtarsis (CMPD) was examined for the genetic toxicity-bacterial mutagenicity, chromosome aberration, and micronucleus formation. For mutagenicity assay, bacterial reversion test with Salmonella typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA 1537, and E. coli WP2uvrA were performed. The extract at the concentrations of 50~5,000 ㎍/plate did not induce mutagenicity at all. Chromosome aberration test was performed by using Chinese lung (CHL) cells. There was no significant chromosome aberration in CHL cells with S-9 mixture at the concentrations of 312.5~1,250 ㎍/㎖ of the extract and without S-9 mixture at the concentrations of 1.2~19.5 ㎍/㎖ of the extract. For micronucleus test, ICR mice were treated with the extract at the dose of 0.5, 1, and 2 g/㎏. The frequencies of the micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) in bone marrow preparations of the extract-treated group were not increased compared to the untreated control group. Taken together, our results show that water extract of CMPD did not induce any harmful genotoxicity.

진균류의 Ubiquinone system의 분포에 관한 연구

박주영,정지국,신용국,조월순,서필수,박용하,이재동,Park, Ju-Young,Chung, Ji-Won,Shin, Yong-Kook,Jo, Wol-Soon,Seo, Pil-Soo,Park, Yong-Ha,Lee, Jae-Dong 한국생명과학회 1998 생명과학회지 Vol.8 No.1

Isoprenoid quinone are essential compositions of the respiratory or photosynthetic electron transport system of microorganisms. Their chemotaxonomic significance as well as their physiological importance has been fully realized. We determined the ubiquinone types of the genus Trichoderma, Gliocladium, Verticillium, Aspergillus, and several mushroom such as Agaricus bisporus. Lentinus edodes, Pleurotus ostreatus, Flammulina velutips, Phellinus chrysoloma, Phellinus igniarius and Phellinus laevigatus. Most of Deuteromycotina had Q-10($H_2$), and all of mushroom had Q-9 as main ubiquinone type. Ubiquinone type in other fungal taxa. Isoprenoid quinones은 미생물의 호흡계나 관합성의 전자전달계의 필수적인 구성성분으로, 그들의 화학적분류 뿐만 아니라 생리학적인 중요성으니 충분히 인식되어 있다. 본실험에서는 Trichoderma, Gliocladium, Verticillium, Aspergullus 및 Agaridus bisporus, 및 Agaricus biporus, Lenrinus edodes, Pleurotus ostrearus igniarius, Phellinus chrysolona를 포함한 일부 식용버섯의 ubiquinone type을 결정하였다. 대부분의 불완전균휴는 Q-10($H_2$)를, 본 실험에 사용된 식용버섯 전체는 Q-9을 main ubipuinone type을 가지는 것으로 나타났다. 따라서 upiquinone type은 진균류에 있어서도 화학적 분류의 유용한 수단으로 간주되며, 보다 광범위한 연구결과의 축척이 필요한 것이다.

해수산 클로렐라(Chlorella ellipsoidea) 유기용매 추출물의 항염증 효과

최유진 ( Yoo Jin Choi ),조월순 ( Wol Soon Jo ),김현지 ( Hyoun Ji Kim ),남병혁 ( Byung Hyouk Nam ),강은영 ( Eun Young Kang ),오수정 ( Su Jung Oh ),이계안 ( Gye An Lee ),정민호 ( Min Ho Jeong ) 한국수산과학회 2010 한국수산과학회지 Vol.43 No.1

Radical Scavenging Activities of Phellinus pini

Byung Hyouk Nam(남병혁),Wol Soon Jo(조월순),Yong Cui(최영),Yoo Jin Choi(최유진),Jae Dong Lee(이재동),Min Ho Jeong(정민호) 한국생명과학회 2010 생명과학회지 Vol.20 No.3

Phellinus pini (CY001) 추출물에서의 페놀류성분의 농도는 P. pini (CY001)분획 g 당 GAEs ㎎으로 나타내었고, P. pini 의 EtOAc 분획(436.5 ㎎ GAEs/g)이 다른 분획에 비해 가장 높은 함량을 나타내었다. 환원력과 같은 항산화 활성을 screening 하기 위해 몇 가지 생화학적 시험이 수행되었고, 그것은 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 소거작용, NBT/XO superoxide system, DCF/AAPH peroxyl radicals 저해능 등이다. 여섯개의 버섯추출물 분획 중에서 EtOAc 분획이 DPPH, superoxide 라디칼, peroxyl 라디칼 소거작용이 뛰어났고, IC50 values는 각각 11.49 ㎍/㎖, 8.32 ㎛/㎖, and 1.91 ㎍/㎖이었다. P. pini (CY001)의 EtOAc 분획은 중요한 효소적 지질과산화 저해와 cytotoxicity 없이 RAW 264.7 macrophages의 LPS 유도 NO 생성을 효과적으로 감소시켰다. 또한 EtOAc 분획이 HepG2 cell의 타크린 유도 cytotoxicity에서 간 보호 작용을 나타내었다. 이러한 결과를 바탕으로 P. pini (CY001)가 라디칼 소거작용을 하는 성분을 함유한 천연 항산화제로써의 잠재력을 갖고 있는 것으로 사료된다. The concentration of phenolics in Phellinus pini (CY001) extracts, expressed as mg of GAEs per g of P. pini fractions, and the EtOAc fraction (436.5 ㎎ GAEs/g) of P. pini had a higher phenolic content than other fractions. Several biochemical assays were used to screen antioxidant properties such as reducing power, 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging capacity, NBT/XO superoxide system and inhibition of DCF/AAPH peroxyl radicals. Among the six mushroom extracts, the EtOAc fraction from P. pini (CY001) showed the most potent DPPH radical, superoxide radical, and peroxyl radical scavenging activities, with IC50 values of 11.49 ㎍/ml, 8.32 ㎍/㎖, and 1.91 μg/㎖, respectively. The EtOAc fraction of P. pini (CY001) significantly inhibited enzymatic lipid peroxidation and effectively attenuated LPS-induced NO production of RAW 264.7 cells without cytotoxicity. We also found that the EtOAc fraction had a significant hepato-protectant effect on tacrine-induced cytotoxicity in HepG2 cells. These findings suggest that P. pini (CY001) may have potential as a natural antioxidant, which contains compound(s) with radical scavenging activity.

세포주기 변화에 따른 방사선 유도 암세포 사망의 조절기전

정수진(Soo-Jin Jeong),정민호(Min-Ho Jeong),장지연(Ji-Yeon Jang),조월순(Wol-Soon Jo),남병혁(Byung-Hyouk Nam),정민자(Min-Za Jeong),임영진(Young-Jin Lim),장병곤(Byung Gon Jang),윤선민(Seon-Min Youn),이형식(Hyung Sik Lee),허원주(Won Joo 대한방사선종양학회 2003 Radiation Oncology Journal Vol.21 No.4

목 적 : K562 세포의 방사선에 의한 세포사망은 mitoticcatastrophe 현상이 위주로 나타나지만 herbimycinA(HMA)에 의하여 apoptosis 반응이 촉진되는 반면 genistein에 의하여 두 가지 형태의 세포사망이 모두 억제된다.본 연구에서는 HMA와 genistein에 의한 K562 세포의 방사선 유도 세포 주기 조절 변화와 세포 사망 양상의 연관성을 조사하였다. 대상 및 방법 : 지수증식기의 K562 세포에 6 MV 선형가속기(Clinac 1,800 C, Varian)를 이용하여 200˜ 300 cGy/min의 선량률로 10 Gy를 균일하게 조사하였다. HMA와 genistein은 각각 250 nM와 25μM 농도로 방사선 조사 후 즉시 투여하였다. 실험에서는 세포 주기,조절인자의 발현 및 활성,노화 및 분화정도 등에 있어서의 시간에 따른 변화를 조사하였다. 결 과: 방사선 단독조사에서 K562 세포는 G2기의 정체를 보였으나 정상적인 p53을 가지는 세포와는 달리 지속적인 세포 주기의 정체를 보이지 않았다. G2 정체가 유지되는 동안 cyclin B1의 점진적인 증가를 관찰할 수 있었으며, 이는 염색체의 복제가 완료되지 않은 상태에서 M기로 진행하여 미성숙한 염색체 응축과 mitotic catastrophe 현상이 나타나는 것 과 일치 한다. 방사선 조사와 함께 HMA를 투여한 경우에는 G2 정체가 빠르게 해소되었으며 동시에 G1기에서 세포가 정체되는 양상을 보였다. 세포 주기조절인자 cdc2 kinase 활성증가와 cyclinE와 A 발현 및 CDK2 활성의 감소 등의 현상으로 설명되며,이는 apoptosis의 증가와 연관성을 갖는다.반면 genistein의 경우에는 cyclin B1과 cdc25C 발현 및 cdc2 활성 이 모두 감소하는등 G2정체를 계속 유지하였다.이와 함께 방사선에 의한 노화와 megakaryocyte로의 분화도 지속되는 것을 관찰할 수 있었다. 결 론: HMA와 genistein에 의한 K562 세포의 방사선 유도 세포사망의 변화는 세포주기 조절과 밀접하게 연관되어 있음을 확인하였다.이는 다양한 방사선 유도 세포사망의 기전을 이해하는 데 독창적인 모델을 제공하며,방사선을 이용한 암 치료법의 개발에 새로운 표적을 제공할 수 있을 것이다. Purpose: In our previous study, we have shown the main cell death pattern induced by irradiation or protein tyrosine kinase (PTK) inhibitors in K562 human myelogenous leukemic cell line. Death o f t he cells treated with irradiation alone was characterized by mitotic catastrophe and typical radiation-induced apoptosis was accelerated by herbimycin A (HMA). Both types of cell death were inhibited by genistein. In this study, we investigated the effects o f H MA and genistein on cell cycle regulation and its correlation with the alterations of radiation-induced cell death. Materials and Methods: K562 cells in exponentialgrowth phase were used for this study. The cells were irradiated with 10 Gy using 6 MeV Linac (200-300 cGy/min). Immediately after irradiation, cells were treated with 250 nM of HMA or 25 M of genistein. The distributions of cell cycle, the expressions of cell cycle-related protein, the activities of cyclin-dependent kinase, and the yield of senescence and differentiation were analyzed. Results: X-irradiated cells were arrested in the G2 phase of the cell cycle but unlike the p53-positive cells, they were not able to sustain the cell cycle arrest. An accumulation of cells in G2 phase of first cell-cycle post-treatment and an increase of cyclin B1 were correlated with spontaneous, premature, chromosome condensation and mitotic catastrophe. HMA induced rapid G2 checkpoint abrogation and concomitant p53-independent G1 accumulation. HMA-induced cell cycle modifications correlated with the increase of cdc2 kinase activity, the decrease of the expressions of cyclins E and A and of CDK2 kinase activity, and the enhancement of radiation-induced apoptosis. Genistein maintained cells that were arrested in the G2-phase, decreased the expressions of cycl in B1 and cdc25C and cdc2 kinase activity, increased the expression of p16, and sustained senescence and megakaryocytic differentiation. Conclusion: The effects of HMA and genistein on the radiation-induced cell death of K562 cells were closely related to the cell cycle regulatory activities. In this study, we present aunique and reproducible model in which for investigating the mechanisms of various, radiation-induced, cancer cell death patterns. Further evaluation by using this model will provide a potent target for a new strategy of radiotherapy.

K562 세포의 방사선 감수성 변화에 영향을 미치는 신호전달인자

양광모(Kwang Mo Yang),윤선민(Seon-Min Youn),정수진(Soo-Jin Jeong),장지연(Ji-Yeon Jang),조월순(Wol-Soon Jo),도창호(Chang-Ho Do),유여진(Yeo-Jin Yoo),신영철(Young-Cheol Shin),이형식(Hyung Sik Lee),허원주(Won Joo Hur),임영진(Young-Jin Li 대한방사선종양학회 2003 Radiation Oncology Journal Vol.21 No.3

Purpose The human chronic myelogenous leukemia cell line, K562, expresses the chimeric bcr-abl oncopro-tein, whose deregulated protein tyrosine kinase activity antagonizes the induction of apoptosis via DNA damaging agents. Previous experiments have shown that nanomolar concentrations of herbimycin A (HMA) coupled with X-irradiation have a synergistic effect in inducing apoptosis in the Ph-positive K562 leukemia cell line, but genistein, a PTK inhibitor, is non selective for the radiation-induced apoptosis of p210bcr/abl protected K562 cells. In these experiments, the cytoplasmic signal transduction pathways, the induction of a number of transcription factors and the differential gene expression in this model were investigated. Materials and Methods K562 cells in the exponential growth phase were used in this study. The cells were irradiated with 0.5-12 Gy, using a 6 MeV Linac(Clinac 1800, Varian, USA). Immediately after irradiation, the cells were treated with 0.25 M o f H MA and 25 M of genistein, and the expressions and the activities of ablkinase, MAPK family, NF-B, c-fos, c-myc, and thymidine kinase1 (TK1) were examined. The differential gene expressions induced by PTK inhibitors were also investigated. Results: The modulating effects of herbimycin A and genistein on the radiosensitivity of K562 cells were not related to the bcr-ablkinase activity. The signaling responses through the MAPK family of proteins, were not involved either. In association with the radiation-induced apoptosis, which is accelerated by HMA, the expre-ssion of c-myc was increased. The combined treatment of genistein, with irradiation, enhanced NF-Bactivity and the TK1 expression and activity. Conclusion: The effects of HMA and genistein on the radiosensitivity of the K562 cells were not related to the bcr-abl kinase activity. In this study, another signaling pathway, besides the MAPK family responses to radiation to K562 cells, was found. Further evaluation using this model will provide valuable information for the optional radiosensitization or radioprotection. 목 적: 만성 골수성 백혈병 세포인 K562 세포주는 방사선 및 다양한 항암제에 대한 apoptosis에 저항성을 가진다. 지난 연구에서 K562 세포는 방사선에 대하여 내성반응을 보이며, 세포내 PTK의 작용을 억제하고 자방사선조사와 함께 투여한 herbimycin A (HMA)에 의하여 방사선에 대한 apoptosis와 같은 감수성 반응이 유도되는 반면, genistein에 의하여 방사선에 대한 apoptosis 반응이 저해 됨을 확인하였다.본 연구에서는 타이로신 인산화 효소억제에 의한 K562세포의 방사선 반응변화를 조절하는 신호전달경로를 조사하였다. 대상 및 방법 : K562 세포를 지수증식기의 세포 들만 선택하여 실험에 이용하였다. 방사선조사는 6 MeV 선형가속기 (Clinac 1800C, Varian)를 이용하여 200˜300 cGy/min 선량률로 0.5˜12 Gy를 균일하게 조사하였다. HMA와 genis-tein은 각각 0.25μM, 25μM을 방사선 조사 후 즉시 투여하였다. 실험에서 신호전달 경로로 abl kinase, MAPK family, NF-κB, c-fos, c-myc, thymidine kinase1 (TK1)등에서의 단백질 또는 유전자 발현 및 활성을 조사하였다. 또한 약제 투여에 따른 유전자 발현차이(differential gene expression)를 조사하였다. 결 과: Abl kinase의 발현 및 활성 변화를 조사하였으나 PTK 저해제에 의한 방사선 유도 세포사의 변화와의 연관성을 찾을 수 없었다. 세포생존 및 사멸의 신호전달 체계에서 주요조절과 정인 MAPKfamily의 관여 여부확인에서 방사선으로 인한 SAPK/JNK의 활성화의 유도가 관찰되었으나, PTK 저해제에 따른 변화는 없었으며,또한 MAPK/ERK와 p38MAPK활성은 모든 조건에서 변함없이 일정하였다.전사인자 활성화에 대한 조사에서 방사선 조사와 함께 genistein을 투여한 경우에NF-κB 활성이 증가하였다. 유전자 발현 차이의 조사에서 genistein 투여에 의한 TK1유전자 발현 및 단백질 활성이 증가하였다. 결 론: PTK 억제에 의한 K562 세포의 방사선에 대한 반응 변화는 bcr-abl kinase활성과는 무관하게 진행되며, MAPK family경로 외의 다른 경로를 통한 전사인자 활성화 과정이 연관되어 있음을 확인하였다.