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- 저자 : 장원경(Won-kyong Chang) (검색결과 4 건)
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돼지 골수 조혈 세포의 이종 마우스 동물 모델 생체 증식 및 분화 특성
이용수,이현주,김태식,김혜선,김유경,김재환,박진기,정학재,장원경,김동구,Lee, Yong-Soo,Lee, Hyun-Joo,Kim, Tea-Sik,Kim, Hye-Sun,Kim, Yoo-Kyong,Kim, Jae-Hwan,Park, Jin-Ki,Chung, Hak-Jae,Chang, Won-Kyong,Kim, Dong-Ku 한국동물번식학회 2008 Reproductive & developmental biology Vol.32 No.1
The SCID-repopulation cells(SRCs) assay has been widely used to determine the self-renewal capacity of hematopoietic stem cells (HSCs). In this study, we tested the repopulating efficiency of porcine bone marrow derived hematopoietic stem cells using nonobese diabetic/severe combined immunodieficient (NOD/SCID) mice which was inherited immunodeficiency mire with defect of T cells, B cells, and low activity of NK cells. We transplanted porcine bone marrow hematopoietic stem/progenitor cells with intraperitoneal injection into neonate NOD/SCID mice. We confirmed efficient reconstitution activity of inoculated porcine hematopoietis cells in variety of organs of NOD/SCID mice. Interestingly, pig $CD3^+$ T lymphocytes detected with high level in liver($15.6{\pm}3.7%$), spleen($5.6{\pm}3.0%$), thymus($1.5{\pm}1.3%$), and BM($2.3{\pm}0.9%$), respectively. These data imply that microenvironment of neonate NOD/SCID mice is very efficient for proliferation and differentiation of porcine T cells, and can be useful for the study of T cells development and renogeneic organ transplantation. 본 연구는 돼지 골수에서 존재하는 조혈 줄기 세포 및 전구 세포를 이용해 이종 동물 모델인 태아 마우스 복강 생체 이식을 통하여 돼지 조혈 세포의 이종 조혈 조직에서의 증식과 분화 특성을 규명하였다. 선천성 면역 부전 마우스인 NOD/SCID 마우스 태아 조혈 환경에 돼지 골수 유래 조혈 줄기 세포 및 전구 세포를 이식하고, 이식 후 5주령에 마우스 조혈기관에서의 돼지 조혈 세포의 증식과 분화 특성을 돼지 특이적 항체 면역 염색으로 유세포 분석을 실시한 결과, 마우스 조혈 조직인 골수, 흉선, 간장, 비장 및 림파절에서 돼지 조혈 세포의 분화 및 증식이 관찰되었다. 특히 돼지의 T 면역세포가 골수계 세포에 비해서 높은 chimerism이 관찰되어 태생 초기의 NOD/SCID 조혈 환경에 의한 특이적 T 면역세포의 증식에 적합한 조혈 환경을 제공하고 있다는 사실이 밝혀졌다. 본 마우스 신생 NOSD/SCID 복강 이식 동물 모델을 이용해 돼지 T 면역세포의 분화 발달 연구 및 이종 장기 이식 기전 연구에 좋은 모델로서 활용이 기대된다.
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돼지 $\beta$-Casein 유전자의 3' 말단 부위의 cis-Acting Element가 유선 상피 세포내의 발현에 미치는 영향
이휘철,김병주,변승준,이승훈,김민지,정희경,이현기,조수진,장원경,박진기,이풍연,Lee, Hwi-Cheul,Kim, Byoung-Ju,Byun, Sung-June,Lee, Seung-Hoon,Kim, Min-Ji,Chung, Hee Kyoung,Lee, Hyun-Gi,Jo, Su-Jin,Chang, Won-Kyong,Park, Jin-Ki,Lee, Poong 한국동물번식학회 2008 Reproductive & developmental biology Vol.32 No.3
Tissue-specific and temporal regulation of milk protein gene expression is advantageous when creating transgenic animal that produces foreign protein into milk. Gene expression, i.e. protein production, is regulated not only by promoter strength but also mRNA stability. Especially, poly A tail length by polyadenylation affects in vivo and in vitro mRNA stability and translation efficiency of the target gene. In the present study, nucleotide sequence of 3'-UTR was analyzed to evaluate the effects of mRNA stability on the target gene expression. Based on the poly A signal of 3' -untranslated region (UTR), nucleotide sequences of putative cytoplasmic polyadenylation elements (CPEs) and downstream elements (DSEs: U-rich, G-rich, GU-rich) were analyzed and used to construct 15 luciferase reporter vectors. Each vector was transfected to HC11 and porcine mammary gland cell (PMGC) and measured for dual luciferase expression levels after 48 hours of incubation. Luciferase expression was significantly higher in construct #6 (with CPE 2, 3 and DSE 1 of exon 9) and #11 (with CPE 2, 3 and DSE 1, 2 and 3 of exon 9) than construct #1 in the PMGC. These results suggest that expression of target genes in PMGC may be effectively expressed by using the construct #6 and #11 on production of transgenic pig. 형질 전환 동물 생산에는 조직 및 시기 특이적 발현 조절이 가능하다는 장점 때문에 유즙 내로 외부 유전자를 발현시키는 시스템이 널리 이용되고 있다. 유전자 발현 즉, 단백질 생산은 프로모터의 강도뿐만 아니라 mRNA의 안정성에 의해서도 조절된다. 특히, polyadenylation에 의한 poly A의 길이는 in vivo와 올 in vitro에서 mRNA 안정성 및 목적 유전자의 번역효율에 영향을 준다. 본 연구에서는 이러한 mRNA 안정성이 목적 유전자의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해 3'-UTR 염기 서열을 분석하였다. 이 3'-untranslated region(UTR) 내의 poly A signal을 기준으로 putative cytoplasmic polyadenylation element(CPE) 부위와 downstream elements(DSE: U-rich, G-rich, GU-rich)의 염기 서열을 분석하고, 각각의 element를 기준으로 15 종의 luciferase reporter vector를 제작하여, 생쥐 유선 세포주(HC11)와 돼지 유선 세포주(PMGC)에 각각 transfection시킨 후 48시간 동안 배양하고 luciferase 발현량을 분석하였다. PMGC의 경우, luciferase의 발현은 exon 9의 CPE 2,3 및 DSE 1을 포함한 #6 construct에서 유의적으로 높은 발현량을 보였으며, exon 9의 CPE 2, 3과 DSE를 모두 포함하고 있는 #11 construct에서도 유의적으로 높은 발현량을 보였다. 이러한 결과는 형질 전환 돼지 생산에 있어 #6 및 11 construct의 사용은 목적의 유전자를 효과적으로 발현시키는데 기여할 것으로 사료된다.
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돼지에서 단일 전신 방사선 조사 용량에 따른 혈액변화 관찰
이재훈(Jae-Hoon Lee),강은희(Eun-Hee Kang),정다정(Dai-Jung Chung),김동구(Dong-Ku Kim),김재환(Jae-Hwan Kim),신현수(Hyun-Soo Shin),안정용(Jung-Yong Ahn),박진기(Jin-Ki Park),장원경(Won-kyong Chang),최치봉(Chi-Bong Choi),김휘율(Hwi-Yool K 한국생명과학회 2007 생명과학회지 Vol.17 No.12
4주령의 돼지에서 여러 용량의 방사선 조사를 하고 경시적으로 혈액 수치의 변화, helper T-cell 및 cytotoxic T-cell에 대한 변화를 관찰 하였다. 6 Gy 이상을 조사한 돼지에 3일이후 백혈구와 혈소판의 수의 감소되어 회복 되지 않았으며, 식욕 부진, 설사 등의 부작용을 보이며, 조사 후 10일부터 15일 사이에 모두 폐사 하였다. 4 Gy 전신 단일 조사한 돼지에서는 조사 후 임상적인 부작용을 보이지 않았으며, 9일 이후 백혈구, 혈소판이 증가하여 회복되는 경향을 보였다. 본 연구의 결과는 돼지를 사용한 방사선 생물학적 실험에서 혈액변화 및 면역억압 관찰에 대한 기초 자료로 활용 될 수 있을것이다. We examined total body irradiation (TBI)-induced effects by complete blood count (CBC) and fluorescence-activated cell sorter analysis (FACS) in the piglet following radiation irritation. A CBC included red blood cell count, white blood cell count, and platelet cell count. Four piglets were examined in this study and each piglet was divided by irradiation dose, two piglets with 4 Gy, two with 6 Gy, one with 8 Gy. All piglets showed leukopenia, thrombocytopenia after irradiation. In 6 and 8 Gy group, three piglets showed severe hemostatic disorder and gastrointestinal disorder suchas diarrhea and anorexia, and they died between 10 and 15 days after radiation irritation. In 4 Gy, two piglets showed no clinical sign after radiation injury, but persistent leukopenia was shown in blood examination. We suggest that a single TBI dose less than 6 Gy is adequate for conditioning piglet for bone marrow transplantation.
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