비소세포폐암주에서 산소 농도에 따른 미세 배양 환경과 세포 증식능

신종욱 ( Jong Wook Shin ),전은주 ( Eun Ju Jeon ),곽희원 ( Hee Won Kwak ),송주한 ( Ju Han Song ),이영우 ( Young Woo Lee ),정재우 ( Jae Woo Jeong ),최재철 ( Jae Cheol Choi ),김재열 ( Jae Yeol Kim ),박인원 ( In Won Park ),최병휘 ( By 대한결핵 및 호흡기학회 2007 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.63 No.3

배경 및 목적: 암세포는 빠른 증식 속도로 인하여 상대적인 저산소증에 노출되면서 비정상적인 종양 혈관을 형성하여 치명적인 병인을 형성한다. 저산소증에서의 암세포 내의 유전자 표현을 연구하는 것은 병인의 규명과 나아가 치료에 결정적인 단초를 제공할 수 있다. 이에 본 연구에서는 체외 배양한 비소세포폐암의 증식과 저산소증 상태에 대한 연구를 시행하였다. 재료 및 방법: 비소세포폐암주인 A549를 RPMI 배지에서 계대 배양하였다. 저산소 유사 상태는 Modular Incubator Chamber(MIC-101)을 이용하였고 5% 이산화탄소와 95% 질소 혼합 가스를 5분간 공급하여 저산소 상태를 만들었으며 세포 배양액을 채취하여 혈액가스분석기(Blood Gas Analyzer ABL 725)로 세포 배양 상태를 측정하였다. 대조군으로 5% CO2와 멸균한 대기 공기 95%가 혼합된 가스를 사용하였다. 세포의 증식 상태는 MTT 방법을 실시하였다. 결과: 1. MIC-101을 이용하였을 때, 무산소혼합가스를 투여 후 30분에 50%의 산소 분압저하를 확인하였으며, 대기 가스에 의해 산소농도를 회복하는 것을 볼 수 있었다. 2. 무산소 혼합가스로 정화(purging)를 하면 산소의 분압을 더 낮출 수 있었다. 3. 저산소 상태에서 세포 배양액 내에는 pH 감소, 젖산 증가, 포도당의 감소 와 같은 미세환경이 변하였다. 4. 세포배양액에 따라 저산소에 의해 유도되는 포도당 저하에 차이가 있었다. 5. 비소세포폐암주는 저산소에 의해 증식능이 억제되었다. 결론: 저산소 상태는 세포 배양액 내 포도당 농도의 감소, 젖산의 증가, pH의 감소 등 세포 배양 미세 환경을 변화시키며, 비소세포폐암세포는 증식이 억제된다. 저산소는 미세 환경 변화와 함께 직접적으로 그리고 간접적으로 비소세포의 증식능에 영향을 미친다. Background: Abnormal angiogenesis can induce hypoxia within a highly proliferating tumor mass, and these hypoxic conditions can in turn create clinical problems, such as resistance to chemotherapy. However, the mechanism by which hypoxia induces these changes has not yet been determined. Therefore, this study was conducted to determine how hypoxia induces changes in cell viability and extracellular microenvironments in an in vitro culture system using non-small cell lung cancer cells. Methods: The non-small cell lung cancer cell line, A549 was cultured in DMEM or RPMI-1640 media that contained fetal bovine serum. A decrease in the oxygen tension of the media that contained the culture was then induced in a hypoxia microchamber using a CO2-N2 gas mixture. A gas analysis and an MTT assay were then conducted. Results: (1) The decrease in oxygen tension was checked the anaerobic gas mixture for 30 min and then reoxygenation was induced by adding a 5% CO2-room air gas mixture to the chamber. (2) Purging with the anaerobic gas mixture was found to decrease the further oxygen tension of cell culture media. (3) The low oxygen tension resulted in a low pH, lactic acidosis and a decreased glucose concentration in the media. (4) The decrease in glucose concentration that was observed as a result of hypoxia was markedly different when different types of media were evaluated. (5) The decrease in oxygen tension inhibited proliferation of A549 cells. Conclusion: These data suggests that tumor hypoxia is associated with acidosis and hypoglycemia, which have been implicated in the development of resistance to chemotherapy and radiotherapy. (Tuberc Respir Dis 2007; 63: 242-250)

비소세포폐암에서 COX-2, MMP-9와 돌연변이형p53의 발현이 생존에 대한 예후 분석

신종욱 ( Jong Wook Shin ),최재호 ( Jae Ho Choi ),박인원 ( In Won Park ),유재형 ( Jae Hyung Yoo ) 대한결핵 및 호흡기학회 2007 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.63 No.1

연구배경: 폐암의 병인에 기여하거나 예후를 결정하는 인자에 대해서는 매우 다양한 인자와 다양한 상호 관계로 인하여 특히 유전자의 역할에 대해서는 결정적으로 알려진 것이 없어 앞으로 더 많은 연구가 필요한 실정이다. 이에 따라 본 연구에서는 COX-2, MMP-9, p53가 비소세포폐암에서 어떻게 발현되는지 세포면역학적으로 알아보고 임상 특성과 예후와 상관관계를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 91명의 비소세포폐암을 대상으로 하여 후향적으로 임상특성을 고찰하고 COX-2, MMP- 9, p53의 유전자 표현을 세포면역학적 방법을 통하여 검사하였다. 임상특성과 유전자 표현 패턴의 상관관계와 생존에 대한 예후인자로서의 역할에 대하여 조사하였다. 결과: 1) 편평상피세포암에서는 흡연자과 남자가 우세한 비율을 차지하였으며 남자에서 흡연의 비율이 유의하게 높았다. 2) 전체 대상 환자에서 생존에 영향을 미치는 결정적인 인자는 근치적 절제술의 시행여부와 병기로 나타났다. 3) COX-2의 발현은 편평상피세포암 보다 선암에서 더 유의하게 높게 발현되었다. 4) COX-2, MMP-9, p53의 발현이 모두 되지 않는 비율은 선암에 비해 편평상피세포암에서 더 흔하게 관찰되었다. 5) p53돌연변이가 있으면서 COX-2와 MMP-9은 발현이 되지 않는 비소세포폐암환자의 생존기간이 다른 발현 양상을 보이는 경우에서의 생존기간보다 더 연장되어 보였다(생존기간의 중앙값; 165.6주). 6) COX-2의 발현과 MMP-9의 발현 사이에는 유의한 상관관계가 있었다. 7) 폐암을 근치적으로 절제한 환자의 경우에 COX-2의 발현은 유의한 예후인자였다. MMP-9는 근치적 절제술을 받지 못한 환자군에서 유의한 예후인자로 작용하였다. 결론: COX-2와 MMP-9의 발현은 비소세포폐암 환자 일부에서 병의 진행에 관여하거나 예후에 영향을 줄 수 있을 것으로 기대된다. Background: In pathogenesis and prognosis of lung cancer, significance of enormous types of genetic expression were very compounding and undetermined. We performed this study to search association between clinical characteristics and expression of COX-2, MMP-9 and p53 in non-small cell lung cancer. Methods: Ninety-one patients with adenocarcinoma or squamous cell carcinoma were enrolled. We had searched clinical data retrospectively and performed immunohistochemical staining for COX-2, MMP-9 and p53. We had analyzed significance of these three genes in clinical features and prognosis for survival. Results: 1) In squamous cell carcinoma, male was predominant and was significantly correlated with smoking. 2) Major prognostic determinants for overall survival were curative resection. 3) Expression of COX-2 was more frequent in adenocarcinoma than in squamous cell carcinoma. 4) Negative staining of COX-2, MMP-9 and p53 was more frequent in squamous cell carcinoma than adenocarcinoma. 5) Survival duration was longer in the group with positive expression of p53 and negative for COX-2 and MMP-9 (median duration of survival = 165.6 weeks) than groups with the other expressional patterns. 6) Significant correlation was found between expression of MMP-9 and COX-2. In squamous cell carcinoma, expression of MMP-9, COX-2 and mutant p53 were mutually correlated. 7) COX-2 expression was significant prognostic factor for survival in resected cancer group. In unresected inoperable non-small cell lung cancer group, MMP-9 was statistically significant prognostic factor for overall survival. Conclusion: COX-2 and MMP-9 might have some roles for progression or prognosis in some selected patients with non-small cell lung cancer. COX-2 and MMP-9 may have some roles for disease progression or prognosis in selected patients with NSCLC. (Tuberc Respir Dis 2007; 63: 31-41)

우장지 버섯(Antrodia camphorata) 균사체 배양액으로 제조한 초산발효액이 Streptozotocin으로 유발한 당뇨흰쥐의 혈당과 혈중지질함량에 미치는 영향

신종욱 ( Jong Wook Shin ),이상일 ( Sang Il Lee ),김순동 ( Soon Dong Kim ) 한국식품저장유통학회 ( 구 한국농산물저장유통학회 ) 2008 한국식품저장유통학회지 Vol.15 No.5

비소세포 폐암에서 C-erbB-2와 VEGF 발현에 대한 면역조직화학적 연구

신종욱 ( Jong Wook Shin ),하경원 ( Kyung Won Ha ),최재철 ( Jae Cheol Choi ),김재열 ( Jae Yeol Kim ),박인원 ( In Whon Park ),최병휘 ( Byoung Whui Choi ),유재형 ( Jae Hyung Yoo ) 대한결핵 및 호흡기학회 2007 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.62 No.1

배경 및 목적: 인체암에서 C-erbB-2의 과발현에 대한 광범위한 연구가 시행되고 있지만, 임상적 의의에 대해서는 논란의 대상이 되고 있다. 악성종양에서 신생혈관형성은 암의 진행에 필수적인 요소이다. 본 연구에서는 비소세포 폐암에서 C-erbB-2의 과발현의 의미, 암조직의 신생혈관형성에 중요한 역할을 하는 VEGF의 발현 및 두 표지자의 연관성을 연구하였다. 방법: 파라핀 포매된 95예의 비소세포 폐암조직을 이용하여 avidin-biotin complex 법에 의한 면역조직화학적 염색을 시행하였으며, 연구재료는 원발성 편평세포암종 60예 그리고 원발성 선암종 35예를 대상으로 하였다. 결과: 비소세포 폐암에서 선암종의 C-erbB-2의 과발현은 편평세포암종보다 의미 있게 높게 나타났다. 임상병기에 따른 C-erbB-2와 VEGF의 과발현은 진행암에서 증가하는 경향을 나타내었으나, 초기암과의 유의한 차이는 없었다. 선암종에서 C-erbB-2와 VEGF의 발현은 유의하게 상관성을 나타내었다. 결론: 비소세포 폐암에서 C-erbB-2의 과발현은 암의 유형에 따라 다르다는 것을 알 수 있었으며, C-erbB-2의 과발현이 높게 나타나는 선암종에서는 이 성적과 암세포의 VEGF의 발현이 상관성을 나타낸다는 것을 알 수 있었다. Background: Mutated or deregulated expression of C-erbB-2 causes this gene to function as a potent oncogene. Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a crucial angiogenic molecule in lung cancer. Both C-erbB-2 and VEGF can promote growth, proliferation and metastasis in non-small cell lung cancer (NSCLC). The purpose of this study was to investigate evaluate the relationship between the expressions of the C-erbB-2 and VEGF genes using immunohistochemistry. Materials and Methods: Ninety-five patients with NSCLC were involved (60 squamous cell carcinoma and 35 adenocarcinoma). The formalin-fixed paraffin embedded specimens were immunohistochemically stained for C-erbB-2 and VEGF using the avidin-biotin complex method. Results: Positive C-erbB-2 expression was observed more often in adenocarcinomas than squamous cell carcinomas (p<0.05). Although the immunohistochemical expressions of C-erbB-2 and VEGF in non-small-cell lung cancer showed increased tendencies at an advanced stage, the correlation between early and advanced cancers was insignificant. In adenocarcinomas, the expressions of VEGF and C-erbB-2 were significantly (p<0.05). Conclusion: The overexpression fo C-erbB-2 was significantly higher in adenocarcinomas than squamous cell carcinomas, and correlated with the expression of VEGF in adenocarcinomas of the lungs. (Tuberc Respir Dis 2007; 62: 43-50)

허파혈관주위세포에서 저산소증에 의한 생존능의 억제와 유전자 발현의 변화

신종욱 ( Jong Wook Shin ),김계영 ( Kae Young Kim ),이영우 ( Young Woo Lee ),정재우 ( Jae Woo Jung ),이병준 ( Byoung Jun Lee ),김재열 ( Jae Yeol Kim ),조인호 ( In Ho Jo ),박인원 ( In Won Park ),최병휘 ( Byoung Whui Choi ) 대한결핵 및 호흡기학회 2004 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.57 No.1

삼나물 에탄올 추출물이 Streptozotocin으로 유발한 흰쥐의 당뇨증상과 산화적 스트레스에 미치는 영향

신종욱(Jong-Wook Shin),이상일(Sang-Il Lee),우미희(Mi-Hee Woo),김순동(Soon-Dong Kim) 동아시아식생활학회 2008 동아시아식생활학회지 Vol.18 No.6

폐암종에서 Nuclear Retinoid Receptor 및 CREB의 면역조직화학적 발현양상

신종욱 ( Jong Wook Shin ),기승석,백광현 ( Kwang Hyun Paik ),최원 ( Won Choi ),박인원 ( In Won Park ),김미경 ( Mi Kyung Kim ) 대한결핵 및 호흡기학회 2005 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.59 No.6

무전극형광램프용 전원장치의 평가기준 및 수명예측

신종욱(Jong-Wook Shin),함중걸(Jung-Keol Ham) 한국조명·전기설비학회 2004 한국조명·전기설비학회 학술대회논문집 Vol.2004 No.11월

본 논문에서는 무전극형광램프용 전원장치에 대한 전기용품의 안전기준에 대하여 시험항목 및 적용규격을 제시하였으며, 전기적 및 광학적 특성을 알아보기 위하여 성능측정을 수행하였다. 또한 무전극 형광램프용 전원장치의 고 수명에 대한 이론적인 평균고장수명을 알아보기 위하여 MIL-HDBK-217방법에 의한 예측방법을 이용하여 전원장치의 주위온도, 사용장소 및 설치조건에 따라 각 온도별로 각부품의 고장율을 예측하여 평균고장수명을 예측하였다. 그 결과 무전극형광램프용 전원장치는 온도가 어느 정도가 유지되어야 광효율이 좋은 반면 전원장치는 온도가 높으면 상대적으로 수명이 급격히 줄어들면서 특성이 열화하는 경향을 가진다.

전암성 폐병변 및 편평상피세포폐암 조직에서 CBP(cAMP-responsive Element Binding Protein) 전사 공동 활성인자의 면역조직화학적 발현양상의 비교

신종욱 ( Jong Wook Shin ),김진수 ( Jin Soo Kim ),김미경 ( Mi Kyung Kim ) 대한결핵 및 호흡기학회 2007 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.63 No.2

폐암의 발생은 여러 많은 유전자의 변화가 축적되어 나타나는 일련의 과정에 의한다. 세포 내 전사 조절 인자의 하나인 CBP는 폐를 포함한 인체 내 여러 조직에서 상피세포의 분화 및 증식에 중요한 역할을 담당하며, 유전자들에서 전사조절인자로서 세포의 성장에 관여하며 발암 과정에서도 중요할 것으로 기대된다. 이에 아직까지 폐암에서 CBP에 대한 연구가 확정된 바가 없어, 폐의 전암성 병변(상피 화생 20예, 이형성증 40예) 및 편평상피세포폐암 60예를 대상으로 하여 CBP의 발현정도를 면역화학적 방법으로 비교 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 화생성 병변(7예; 35%)에 비해 이형성 병변(26례; 65%)이나 편평세포암종(42례; 70%)에서 CBP의 발현이 유의하게 높았다(p<0.05). 2) 이형성 병변의 경우, 경도의 이형성 병변(20예 중 10예; 50%)보다 고도의 이형성 병변(20예 중 16예; 80%)에서 높은 CBP의 발현율을 보였다(p<0.01). 3) 편평세포암의 분화도별로 살펴보았을 때, 고분화암에서 95%(20예 중 19예), 중등도 분화암에서 85%(20예 중 17예), 저분화 암에서는 30%(20예 중 6예)의 발현율을 보였다(p<0.05). 이상과 같은 결과를 볼 때, CBP는 폐 조직에서 정상 기관지 상피 세포가 전암성 병변으로 변하거나 전암성 병변이 암으로 진행하는 과정에서 중요한 역할을 하는 것으로 보이며, 세포가 암으로의 발전할 수 있는 잠재성을 가늠하는 표지자가 될 수 있을 것으로 보인다. Background: The pathogenesis of lung cancer includes the accumulation of multiple genetic abnormalities. The CREB-binding protein(CBP) is one of several transcriptional co-activators among various sequence-specific DNA-binding transcription factors. CBP is involved in a wide range of cellular activities, such as DNA repair, cell growth, differentiation, and apoptosis that are suspected of contributing to tumorigenesis. The goal of this study was to evaluate CBP expression in a series of human lung tissues containing normal epithelium, premalignant lesions(hyperplasia and dysplasia) and squamous cell carcinomas. Materials and Methods: Immunohistochemical staining was performed on formalin-fixed paraffin-embedded sections by use of a monoclonal anti-CBP antibody. CBP expression was compared in samples from 120 patients with premalignant and malignant histological types including 20 metaplastic specimens, 40 dysplastic specimens, and 60 squamous cell carcinomas in the lung. Results: CBP expression was seen in 35% (7/20) of the metaplastic specimens. 65% (26/40) of the dysplastic specimens, and 70% (42/60) of the squamous cell carcinomas (p<0.05). According to celluar atypism, CBP expression was 50% (10/20) of the low-grade dysplastic specimens and 80% (16/20) of the high-grade dysplastic specimens(p <0.01). By cellular differentiation, CBP expression was seen in 95% (19/20) of the well differentiated squamous cell carcinomas, 85% (17/20) of the moderately differentiated carcinomas and 30% (6/20) of the poorly differentiated lesions (p <0.05). Conclusion: These results suggest that CBP may have an important role in malignant transformation of precancerous lung lesions and may be a marker for malignancy. (Tuberc Respir Dis 2007; 63: 165-172)

자연 기흉의 치료에서 8 French 도관삽입의 치료 효과에 대한 장기적 관찰

신종욱 ( Jong Wook Shin ),이병훈 ( Byoung Hoon Lee ),안창혁 ( Chang Hyeok An ),최재선 ( Jae Sun Choi ),유지훈 ( Jee Hoon Yoo ),임성용 ( Seong Yong Lim ),강윤정 ( Yoon Jung Kang ),고형기 ( Hyung Ki Koh ),김재열 ( Jae Yeol Kim ) 대한결핵 및 호흡기학회 1997 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.44 No.5