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B형 간염바이러스 중합효소의 역전사효소 활성을 억제하는 인간 단세포군 항체
박성재 ( Sung Jae Park ),설상영 ( Sang Yong Seol ),지삼룡 ( Sam Ryong Jee ),박은택 ( Eun Taik Park ),이연재 ( Youn Jae Lee ),이상혁 ( Sang Hyuk Lee ),정정명 ( Jung Myung Chung ),조현대 ( Hyun Dae Cho ),정영주 ( Young Ju Jeong ) 대한소화기학회 2007 대한소화기학회지 Vol.49 No.2
목적: 간경변과 간암의 주 원인 중 하나인 B형 간염바이러스(hepatitis B virus, HBV)에 대한 새로운 치료법의 개발의 일환으로 phage display 기법을 이용하여 바이러스 복제에 있어 중요한 P 단백의 역전사효소 활성을 억제하는 인간 단세포군 항체를 제작하여 protein based 유전자 치료 가능성을 분석하고자 하였다. 대상 및 방법: HBV P 단백의 역전사효소 기능 부위인 RT/POL 기능 부위를 pMAL-C 벡터에 클로닝하고 maltose binding protein과 융합 단백의 형태로 재조합 단백으로 발현시켰다. 1.1×10(10)의 인체 single chain Fv phage antibody library를 사용하여 RT/POL 재조합 단백에 대한 항체를 BIAcore로 선택하였다. 선택된 항체의 역전사효소, RNA-dependent DNA 중합효소 기능 정도를 분석하였으며 BIAcore로 항원에 대한 친화도를 그리고 염기서열 분석을 통하여 항원 결정 부위를 확인하였다. 결과: 대장균에서 발현 정제된 RT/POL 기능 부위 재조합 단백은 역전사효소 활성을 유지하고 있었으며, 1μg의 재조합 단백은 5 unit의 MMLV 역전사효소와 동일한 효소 활성을 가지고 있었다. BIAcore를 이용한 RT/POL에 대한 항체의 선택으로 POL-A5, POL-B8 그리고 POL-B12의 3개 클론을 확보하였다. 선택된 클론들의 역전사효소 활성 억제능은 각각 82- 52%였으며, 항원에 대한 친화도는 8.15×10(-8) M to 1.75×10(-6) M이었다. 결론: 이번 연구를 통하여 제작된 인간 단세포군 항체는 항원에 대한 친화도가 낮았으나 in vitro에서 효과적으로 역전사효소 활성을 억제하여 protein based gene therapy로서 세포 내 항체로 발현한다면 HBV P 단백의 기능을 억제하여 바이러스의 복제를 억제할 것이다. Background/Aims: To develop a novel treatment method for hepatitis B virus (HBV) infection, we aimed to make a human monoclonal antibody inhibiting reverse transcriptase (RT) activity of P protein which was important in HBV replication by using phage display technique. Therefore, we analysed the usability of human monoclonal antibody as a protein based gene therapy. Methods: Reverse transcriptase/polymerase (RT/POL) functional motif of P protein of HBV was cloned in pMAL-c vector and expressed as maltose binding fusion protein form. The RT/POL recombinant protein (pMRT/POL) was purified by amylose resin column. Using human single chain Fv phage antibody library with 1.1×10(10) size, human antibody against pMRT/POL was selected with BIAcore panning. Selected antibody fragments were analyzed for the activity of RT inhibition. Finally, they were analyzed for the affinity with BIAcore and the complementarity determining regions with nucleotide sequencing. Results: pMRT/POL recombinant protein expressed in E. coli showed RT activity, 1㎍ of recombinant protein had an activity equivalent to 5 unit of MMLV RT. By BIAcore panning, we could select 3 clones; POL-A5, POL-B8 and POL-B12. Each clone`s RT inhibiting activity were 52-82%, affinity against antigen were 8.15×10(-8) M to 1.75×10(-6) M. Conclusions: Human monoclonal antibodies produced in this study showed low affinity, but efficiently inhibited the activity of RT in vitro. If POL-A5, POL-B8, and POL-B12 can be converted to intracellular antibody form, it can be used for protein-based gene therapy by inhibiting the replication through the neutralization of polymerase protein of HBV. (Korean J Gastroenterol 2007;49:85-92)
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한국인 역류 식도염 환자의 식도 상피 세포 사이 간격 확장과 Esomeprazole 투여 후의 변화
김재환 ( Jae Hwan Kim ),지삼룡 ( Sam Ryong Jee ),박성재 ( Sung Jae Park ),양성연 ( Sung Yeun Yang ),박은택 ( Eun Taik Park ),이연재 ( Youn Jae Lee ),이상혁 ( Sang Hyuk Lee ),설상영 ( Sang Yong Seol ),정정명 ( Jung Myung Chung ) 대한소화기기능성질환·운동학회 2006 Journal of Neurogastroenterology and Motility (JNM Vol.12 No.1
목적: 서구에서 역류 식도염 환자의 식도 상피는 세포 사이 간격이 확장되어 있으며, 이는 프로톤 펌프 억제제 치료 후 호전된다고 한다. 이번 연구의 목적은 우리나라 역류 식도염 환자에서 식도 상피 세포 사이 간격이 확장되어 있는지 여부와 프로톤 펌프 억제제 치료 후 세포 사이 간격이 호전되는지 알아보았다. 대상 및 방법: 역류 식도염 증상이 있으며 상부위장관내시경 검사에서 점막 손상이 있는 역류 식도염 환자 10명과 위식도역류의 증상이 없고, 상부위장관내시경 검사에서 점막 손상이 없으며 24시간 보행 식도 산도 검사에서 음성인 정상인 10명을 대상으로 하였다. 모든 대상자에서 상부위장관내시경 검사를 시행하였으며, 위식도 경계부 5㎝ 상방에서 4군데 조직을 생검하여 전자 현미경으로 세포 사이 간격을 측정하였다. 모든 식도 조직의 전자 현미경 소견에서 100 번씩 세포 사이 간격을 측정하였다. 역류 식도염 환자는 8주간 esomeprazole로 치료한 후 내시경 검사를 하고 식도 상피 조직을 생검하여 세포 사이 간격을 다시 측정하였다. 결과: 역류 식도염 환자의 세포 사이 간격(평균 1.49±0.39 ㎛)은 대조군의 식도 상피 세포 사이 간격(평균 0.49±0.10 ㎛)보다 통계적으로 유의하게 확장되었다(p<0.01). 역류 식도염 환자에서 esomeprazole로 치료 후 세포 사이 간격(평균 0.56±0.19 ㎛)은 호전되었다(p<0.01). 결론: 우리나라 역류 식도염 환자의 식도 상피 세포 사이 간격은 정상인에 비해 확장된 소견을 보이며, 프로톤 펌프 억제제 치료 후 호전되었다. Background/Aims: It has been demonstrated that dilated intercellular spaces of esophageal epithelium are a marker of tissue injury in Western gastroesophageal reflux disease (GERD); which heals after proton pump inhibitor (PPI) treatment. The aim of this study was to determine whether dilated intercellular spaces are also a feature of acid damage in Korean GERD patients and are also healed after PPI treatment. Methods: Ten GERD patients with heartburn and esophageal mucosal breaks on endoscopy, and 10 controls with no symptoms, normal mucosa on endoscopy and negative 24-hour pH monitoring were enrolled. During upper gastrointestinal endoscopy, four biopsies from normal mucosa were taken within the lower 5 ㎝ of the esophagus for transmission electron microscopy (TEM) analysis. One hundred computer measurements were taken on TEM photomicrographs of the specimens in each patient. After eight weeks of esomeprazole 40 ㎎/day, patients with erosive esophagitis had another endoscopy with biopsies and the intercellular spaces were measured again. Results: The mean intercellular space diameter, in the erosive esophagitis patients, was greater than in controls (1.49±0.10 ㎛ vs 0.49±0.10 ㎛, p<0.01). The mean intercellular space diameter, in erosive esophagitis patients, improved after PPI treatment. Conclusions: Korean erosive esophagitis patients have dilated intercellular spaces of esophageal epithelium and dilated intercellular spaces can be reversed after esomeprazole treatment. (Kor J Neurogastroenterol Motil 2006;12:19-24)
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소화성 궤양에 의한 출혈에서 내시경적 에피네프린 국소주입법과 에탄올 국소주입법의 비교
이상욱,이상혁,정정명,설상영,이연재,박은택 대한소화기내시경학회 1997 Clinical Endoscopy Vol.17 No.5
Background/Aims: The endoscopic injection therapy with hypertonic saline- epineph- rine(HSE) and absolute ethanol are the most widely and easily used procedure in the management of patients with bleeding peptic ulcers. We performed a prospective, randomized trial to compare the hemostatic efficacy between HSE and absolute ethanol injection therapy. Methods: During the period of 1993 to 1996, 60 patients who were identified as active bleeding or visible vessel were enrolled for this trial. The 60 patients were randomly divided into two groups(HSE group, 30 cases: ethhnol group, 30 cases). We performed endoscopic injection therapy with 3% saline and 1:10,000 epinephrine solution in HSE group, and with 99.5% absolute ethanol in ethanol group. The two groups were matched for sex, age, site of bleeding, endoscopic findings, initial hemoglobin, and concomitant illness at randomization. Results: Bleeding was initially controlled in 21(70%) of the HSE group and in 29(96.7%) of the ethanol group(p $lt;0.05). Rebleeding occurred in 4(19%) of the HSE group and in 2(6.9%) of the ethanol group(p$lt;0.1). The ethanl group achieved a better hemostatic effect for spurting hemorrhage(3/13 vs 9/10, p $lt; 0.05). The emergent operations were undergone in 10(33.3%) and 2(6.7%) for HSE group and ethanol group respectively(p $lt;0.01). The stay in hospital were less than in ethanol group(mean 9.5 vs 16.3, p$lt;0.01). The death were noticed in 6 cases(20%) in HSE group and 1 case(3.3%) in ethanol group(p$lt;0.05). Conclusions: This study shows that absolute ethanol injection is more efficaceous and better satisfactory method in peptic ulcer bleeding.
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