방사성동위원소로 표지된 단백질을 이용한 방사성의약품의 합성과 평가

한의식 한국응용약물학회 2003 학술대회 Vol.2003 No.1

Recenf Advances and Perspecfives in Regulatory Sciences for NDA and ANDA

한의식 한국에프디시규제과학회(구 한국에프디시법제학회) 2010 한국에프디시법제학회 학술대회 Vol.2010 No.1

비유전독성 발암물질의 검색에 관한 연구(Ⅱ)

김종원,한의식,박미선,엄미옥,전혜승,정해관,오혜영 식품의약품안전청 2000 식품의약품안전청 연보 Vol.4 No.-

의약품등록의 국제적합의를 위한 협의체(IC딨 . Interna금onal Conference on Harmonization of TecHnological Requirements for Registration of fharrnaceuticats for Human Use)에서 제시하는 유전폭성시험법에서 검색되지 않는 비유전독성 발암물질을 위한 새로운 시험법을 개발하기 위하여 1차년도 연구에서 이러찬 물질에 대한 검색 가능성을 나타낸 '생체외 소핵.시험'과 최근 환경변이원학계에서 새로이 그 유용성이 퍼두되고 있는 'Syrian hamster embryo (SHE) 세포형질전환 시험법'을 이용하여 알려진 두가지 좋류의 비유전독성 발암물질의 반응을 연구하였다. 생체외 소핵시험에서는 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin fTCDD)를 모델화합물로 선정하고, 사람유방 유래의 MCF-7, MCF-lOA,MDA-MB-231 세포를 사용하여 에스트로젠 수용체(ERf 존재여부와 세포의 유형에 파른 소핵형성을 연구하였으며, 등시에 에스트로젠 길항제인 타목시펜에 대한 영향을 보았다. 또한 TCDD가 MCF극 세포의 세포주기예 미치는 영향을 연구하기 위하여 소핵형성을 니-타렌 농도에서 flow cytometer를 이용한 세포주기 분석을 수행하였다. TCDD는 MCF-lOA세포 (ER negative)와 MDA-MB-231세포 (ER negative)에서는 소핵형성이 디미하거나 전혀 증가하지 않았으나, 뽀Cf-7세포 (ER positive)에서 재현성있는 소핵형성을 유발하였으며, 타목시펜 (10 nUt)은 TCDD (IpM)에 의한 소핵형성을 최고 47.3% 까지 억제하였다. 근또글 세포주기분석결과 TCDD, tamoxi(on 단독처리군은 읍성대조군과 유사하몄으나,병용처리군에서는 GO#'Gl arrest를 유의성있게 유발하였다. SHE 세포 형질전환시험법에서는 1차년도 연구에서 생체외 소핵시험에서 양성의 결과를 나타낸 bisphenoB A을 모델화합물로 하여 연구하였다. 시험조건하에서 blsphenol A(31.2SfM, 48시간 연속처리)는 세포혈질전찬을 유발하였다. 상기 연구결과로부터 비유전독성발암물질은 기존의 유전독성시험법중 생체왹 소핵시험(에스트로젠 수용체 양성인 세포주)과 세포형질전환#·1험(Syrian hamster 배자 초대배양세포)에서 시험계의 선택 여부에 따라 부분적으로. 유전독성 지표를 검색할 수 있음을 증명하였으며, 향후 본 연구결과에서 양성을 나타낸 세포의 세포주기 관련인자의 발현변확 등에 대한 작용기전 연구가 진행되어 새로운 생체지표를 이용한 시험법의 개발이 될 것이다 To identify nongenotoxic carcinogens which are not indentified by ICH (Internation Harmonization of I'echnological Requirements ·for Registration of Pharmaceuticals for Human Use) guideline-recommended standard genotoricfty test battery, two endpoints were chosen. They are in vitro micronilcleus 3ss3y which was useful to indentify for bisphenol Aand DEHP last year's study and in vitro 51'rian hamster embryo (SHE) ceBl transformationassay which was recently recognized as a useful tool to detect nongenotoxic carcinogen as wellas genotoxic carcnogen by Environmetal Mutagen Society. In the in vitro micronucleus assayusing MCF-7 cells, TCBD is all negative in standard genotoxicity test battery; Ames test,chromosome abem·ation assay, mouse 3ymphoma tk+/- assay, in vivo micronuclelts assay.therefore TCDD if picked up as a model compound- TCDD atso induced micronucleusformation. To identify the relationship between MN formation and estrogen receptor (ER),TCDO, BPA, and DEHP were studied using hfCF-7 cells (ER positive) and in MCF-tOfL cells(ER negative), MDA-MB-231'ce31s (ER negative). TCDD induced MN formation in bfCF-7celts (ER positive) but not or little induced MN fornlation in MCF-lOA cells (ER negative) andMDA-MB-231 (ER negative). BPA and DEHP didn't induced MN formation in MCF-lOA cells(ER negative). NP didn't induce MN formation in CHt cells but induced MN formation inMCF-7 cells, We also have included the effect of estrogen inhibitors, tamoxifen, against TCDDinduced MN formation. Tamoxifen inhihited TCDD-induced UtN formation up to 4f.3% in,4fCF-7 cells. in cell cycle analysis using flow cytorneter, 1'CDD (1 pM), tamcrifen (10 nM)didn't change cell cycle phase compared with that of negative control but, tamoxifen (10 nhf)with TCDD (1 pM) induced GO/Gl arrest significant]y. Inferring for the result above 4compounds (BPA, EIEHP, TCDD, NP), we concluded the in vitro micronucleus assay vsingMCF-7 cells is a good test method for detecting nongenotoxic carcinogen and identifying thegenotoxicity of endocrine distruptors. In the in vitro SHE celt transformation assay, bisphenol Ais picked up as a model compound. Treated for 48 hr, Bisphenol A induced morphotogicaltransformation significantly.'Strategy and methological approach for identification ofnonBenotoxic cartifogen in vitro'That to identify nongenotcxic carcinogens wllich are notidentified by standard genetic toxicology test battery should be included with additive endpointsIs convincing.

제조방법 변경에 따른 의약품동등성시험 가이드라인 연구

조일영,한의식,정주연,이이다,송윤경,김동섭,김정현,송영미,박상애,정수연,이선희,김인규 한국에프디시규제과학회(구 한국에프디시법제학회) 2010 FDC법제연구 Vol.5 No.2

형질전환동물세포주에서 벤조피렌의 변이유발성에 대한 천연물질의 항 돌연변이 효과

엄미옥,한의식,손수정,김종원,류병규,변은경,강일현,강혁준,길광섭,오혜영 식품의약품안전청 1998 식품의약품안전청 연보 Vol.2 No.-

인간에게 고퉁을 주고 있는 질병중 많은 부분이 돌연한이로 인한 특정 유전자의 손상과 손상된 윤전자의 발현과 관련되어 있음이 밝혀져 왔다. 특히 암은 대표적인 유전자 돌연변이의 결과로 생기는 빌병으로서, 많은 암 유발 용힌중 화학물질에 의한 돌연변이 유발작용이 발암성과 관련하여 많은 관심의 대상이 되고 잇다. 따라서 본 연구에서는 외부DNA를 자신의 genome내게 삽입시킨 형질전환동물로부터 제조된 세포주를 이용하여 유전자 돌연변이를 검출할 수 있는 최신 유전독성 연구기댄을 확립하고자 하였다. 시험법을 확립하기 위하여 f3c f gene을 target으로 하는 Big Blue· Transgenic Mouse Embryonic Cell을 사용하였으며,시험법의 타당성 및 재현성여분를 확인하기 위하여 음성대조물질로는 1% DMSO, 양성대조물질로는 100rg/mf MNU(rnethrlnitrosourea)를 이웅하여 시험한 결과 mutant frequency(MF)는 각각 0.55±0.39Nle-', 4.26±1.51×10-'으로 나타나 재현성을 확인하였다. 또한 이 시험법의 유용성을 높이기 위하여 B[alP (benzo(alpyrene)를 양성대조물질로 in oifro대사환성화계에서 시험한 결과, 처리농도 20, 40, 60rgjm1에 대하여 Mf값이 9.1츠겪.14×10-", 14.3츠깆.86×10-', 20.St3.78×10-"로서 농도의존성을 보였다. 또한 식품을 비롯한 각종 천연물에는 돌연변이원 물질의 활성을 억제 또는 경감시키는 작용이 많이 보고되고 있어 갈조류의 일종으로서 강력한 항산화효과를 나타내는 것으로 알려진 료」ooi3 rfofonif☞ra(속칭 :곰피)를 사옹하여 꽉립된 시험법으로 항돌연변이 효과를 점색하고자 하였다. 양성대조물질로 사용한 MNU에 대하여 곰릭의 메탄을 추출물을 병용투여하여 항돌연변이 효자를 시험하였다. 100rg/mf MNU와 곰피 25.6, 51.2, 100.3#9/mf을 병용처리한 결과 MF가 각각 67, 79, 74% 감소하여, 형질전환동물세포주께서 공피 추출물치 돌연변이 억제 효과를 관찰하였 다. 그러나 암 예방제 개발의 기초자료로 활용하기 위해서는 돌연변이된 염기 서열을 분석하여 변이의 종류와 특성을 확인하여 그 작용기전을 밝히는 추가연구가 수챙되어야 할 것으로 사료된다. Transgenic animal cell with a A shuttle vector containing a fac ftarget gene is useful as a short-term in oifro mutagenesis assay. The gene is recovered from the cells treated by exposiog mousegenomic DNA to in oifro packaging extracts and plating the rescued phage on agar plates containing S-brorno-4-chloro-3-indolyl fD-galactopyranoside (X-gal). Phage with mutations in the f3c f gene formblue plaques, whereas phage with a nonrnutated fac J form colorless plaques, so mutant is defected easily.In order to estabilish this new transgenic technology, we studied mutagenicity of the direct-ectingalkylating agent N-methyl-N-nitrosourea (MNU ) and indirect mutagen benzora]pyrene in the BigBlue" transgenic mouse emf)ryonic cell line. Treatment of the cells with MNY or benzo[alpyrene causedinduction of mutations over 1% DMSO negative control and we conformed the reproducibility of thetransgenic mutagenicity assay. Also, dose-dependent response has been ohserved in benzo[a]pfrene-treatment cells. Sdrfonia afofonif☞ra, an edible brown algae, haying a strong antioBidizing activity, wasevaluated its antimutagenic effect by performing this assay, the methanol extract of Sffonia sfofonifrrashowed rfuction of mutation frequencies in MNU-treated transgenic mouse cells.

형질전환동물세포주(Big Blue^(�) Transgenic Mouse Cell Line)를 이용한 돌연변이 및 항돌연변이시험

엄미옥,한의식,김종원,손수정,류병규,변은경,최재수,오혜영 대한암예방학회 2000 Journal of cancer prevention Vol.5 No.3

식품등의 새로운 가이드라인에 의한 유전독성평가에 관한 연구

오혜영,한의식,김종원,박장환,엄미옥,강일현,강혁준,하광원 식품의약품안전청 1997 식품의약품안전청 연보 Vol.1 No.-

ssay)의 "표준작업지침서"를 작성하였으며, 획집된 시험법을 촬용하여 5vioside(Smg/mf) 및 그 체내 가순뜰해 물질인 steviol(340fe/mf)의 유전독성을 평가한 결과 유전독성을 나타내지 않는 물질로 판명되었으며, MOLY시험 에서 stevioside 및 steviol은 ethanol (1%)과의 병용툰여에서포 유전독굉에 어펴한 영향도주지 찮았다. 마우스의 간세포 및 골수세포를 이용한 쏘핵시험에서도 stevioside(250mg/kg) 및 steviol(200mg/kg)은 돌연변이를 일으키 지 알는 물질로 판명되었고, ethanol . NNK(Imgfg)에 의한 유전독성 상숭효과도 보이지 않았다. The standard operation precedure of mouse tymphoaa L5178y TK-/-3.7.2C gene ntion (MOLY) assay was estal)lished- The MOLY assay has been regarded as a sensitive in oifro marlian cell mutation assay that is capable of detecting clastogens as well as mutagens. Using MOLY aone of natural sweetener, ste·yioside (Srag/mf) and its aglycon, steviol (340fg/m1) were evaluatedmutagenicity both single treatmeBt and in combination with ethanol (1% ). Stevioside and stevionot induce mutagenicity in bfOLY assays. On the other hand, stevioside (2SOmg/kg, B.W.) and steviol (200mg/kg,3.W.) were also e!valuated their mutagenicitr in regenerating hepatocytes and bone marrowcells of ddY micr for detecting. Stevioside aad steviol did not show inotagenic effect. Ethanol (1% ) and4- (methylnitrosamiBo)-1- (3-Pylidyl)-1-butanone (NNK, Irn9/kg. B.W.) did not induce synergic effectin bone marrow micronucleus test.

단기 유전독성시험법을 이용한 근로작업환경의 위해성 평가에 관한 연구

손수정,김종원,한의식,엄미옥,강혁준,강일현,변은경,장은철,권영준,이수진,길광섭,오혜영 식품의약품안전청 1998 식품의약품안전청 연보 Vol.2 No.-

국내 8개 인쇄업체의 혼합 유기용매에 직업적으로 노출된 근로자 51명의 유전독성을 평가하고자 사람 말초혈액을 이용한 염색체이상시험과 세포질 분열억제 소핵시험을 시시하였다. 흡연과 작업기간등을 고려하여 일반직 근무자를 대조군으로 선정하였으며,발암물질인 mitomycin C와 혼합 유기용매의 병용효가도 비교, 관찰하엿다. 혼합 유기용매에 폭로된 작업장 근로자에서 소핵 생셩빈도가 대조군보다 유의하게 증가하엿으며, 이는 작업기간별로 소핵 빈도를관찰하엿을 때에도 유의한 증가를 나타내엿다. 작업장 근로자와 대조군으 ㅣ말초혈애게 mitomycin C를 처리한 결과에서도 작업장 근로자에서 농도 의존적으로 소핵이 유의하게 증가함이 관찰되엇다. 염색체이상시험 결과에서는 작업장 근로자와 대조군 비교 시 유의성 잇은 차이를 나타내지 않앗으며, 작업기간,흡연,mitomycin C 처리 등의 유무에 따라서도 유의한 차이를 나타내지 않았다. The popula'tion monitoring study was performed by using the chromosome aberration assay and the cytokinesis-:blocked micronucleus assay to investigate whether occupational exposure tonixed organic solvents are genotoltic to workers. The blood samples were collected from fifty one malepresser and matched controls in Seoul area. Smoking habits a]Id duration of employment were fatteninto account. Also, we focu.sod on the synergic effects of organfc sotvents and a DHA damaging agentmitomycin C(MMC). The frequencfes of mieroaucleus in periphffral Iymphocytes from worlters erposedto organic sotvents were significantly different in comparision with control subjects. Alse there weresignificant differences in tOe frequencies of micronucleus by duration of exposure. The combined expo-sure of the cells to the organic solvents with MMC showed synergic effect in cytoBtinesis-blocked micro-aucleus assay- The frequency of chromosome aberrations did not show any increase.

위염치료제의 임상시험평가지침 연구

송윤경,진선경,한의식,안미령,정주연,이이다,조일영,김동섭,지은희,박효영,오정미,신원,이선희,김인규,Song, Yun-Kyoung,Jin, Sun-Kyung,Han, Eui-Sik,Ahn, Mee-Ryung,Jung, Ju-Yeon,Lee, Rhee-Da,Cho, Il-Yong,Kim, Dong-Sub,Ji, Eun-Hee,Park, Hyo-Young,Oh, 대한약학회 2011 약학회지 Vol.55 No.4

Gastritis is the most common disease among Korean. The demand for the development of gastritis drugs has been increasing. Currently, however, there is no guideline available for the clinical evaluation of gastritis drugs worldwide. As a consequence, domestic and international pharmaceutical companies make errors in the drug development processes, and it becomes difficult for them to establish the scientific validity and objectivity of newly developed drugs. The objective of this study was to develop the Guideline for Clinical Trials Evaluation of Gastritis which can be used in improving the quality and consistency of clinical trials. First, we collected and reviewed the clinical trials on gastritis drugs that were available from Japan Pharmaceuticals and Medical Devices Agency and Korea Food and Drug Administration (KFDA), and investigated the recent research trends on clinical trials of gastritis drugs. Reviewers from KFDA and National Institute of Food and Drug Safety Evaluation and scientific experts from the pharmaceutical industries developed the guidelines through regularly scheduled meetings. Opinions and consultation from academic fields and industry experts were also obtained. This project will provide the clinical trial practitioners, investigator and reviewers the scientific and rational guidelines for performance and evaluation of clinical trials for gastritis drugs. Furthermore, we hope this guideline contributes to establishing the national competitiveness, improving the quality of clinical trial, and encouraging researches on drug development for gastritis.

형질전환효모를 이용한 내분비계장애물질검색과 Nonylphenol의 Estrogen 유사작용에 대한 DEHP의 상협작용

박미선,정해관,박현신,한의식,김종원,엄미옥,정상희,오혜영 한국독성학회 2001 Toxicological Research Vol.17 No.1

The key targets of endocrine disruptors are nuclear hormone receptors, which bind to steroid hormones and regulate their gene transcription. A yeast-based steroid hormone receptor gene transcription assay was previously developed for the evaluation of chemicals with endocrine modulating activity. The yeast transformants used in this assay contain the human estrogen receptor along with the appropriate steroid response elements upstream of the b-galactosidase reporter gene. We tried to evaluate several natural and synthetic steroids of their potential to interact directly with the steroid receptor. Some putative endocrine disruptors, including nonylphenol, are weakly estrogenic. But the combined treatment of these chemicals with di-(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP) significantly increased the b-galactosidase activity in the yeast transformant. These results suggest that we also have to consider the synergistic effects of endocrine disruptors. In this study, we showed that yeast-based bioassay is a valuable tool for screening potential endocrine disruptors and quantitative determination of estrogenicity. And the possibility that the estrogen receptor binds multiple environmental chemicals adds another level of complexity to the interaction between the endocrine disruptors and the human hormone system.